运动发酵单胞耐酸菌株的诱变筛选及发酵条件的优化

通过对运动发酵单胞菌原始菌株(ZM6)的耐酸驯化、紫外诱变、小型初筛和复筛,获得一株耐酸突变菌株ZM6-3-2.通过突变菌株与出发菌株以及酵母发酵性能的比较表明,ZM6-3-2的发酵蔗汁性能显著优于ZM6菌株和工业生产乙醇的酵母,其最终乙醇质量浓度为56.64 g.L-1,比ZM6菌株的52.18 g.L-1提高了4.46 g.L-1,而且最终乙醇质量浓度、总糖出酒率、总糖利用率均比酵母高出约10%.通过正交试验对该耐酸菌株的发酵培养基进行优化并进行验证,发现含250 g.L-1总糖、10 g.L-1酵母膏、2 g.L-1KH2PO4、0.5 g.L-1(NH4)2SO4、1 g.L-1MgSO4.7H2O,pH 5.5的培养基最有利于ZM6-3-2的发酵,发酵时间短,产乙醇多.     

应用响应面法优化乳酸乳球菌DU101发酵培养基

应用响应面法对乳酸乳球菌DU101发酵产生乳链菌肽(Nisin)的培养基进行了优化。首先采用Plackett-Burman设计对培养基中8个相关影响因素的效应进行了评价。结果表明,葡萄糖和无水乙酸钠两个因素对Nisin效价影响显著。然后根据中心组合设计和响应面分析确定了上述两个主要影响因素的最佳浓度,得到优化的发酵培养基组成为:玉米浆5 g.L-1,葡萄糖6.57 g.L-1,柠檬酸铵3 g.L-1,K2HPO4 2 g.L-1,无水乙酸钠7.11g.L-1,MgSO4.7H2O 0.2 g.L-1,MnSO4.H2O 0.05 g.L-1,吐温80为2 mL.L-1。在此条件下,发酵液中Nisin效价达到1 564 IU.mL-1,比优化前提高了12.6%。     

植酸酶产生菌的选育及产酶条件研究

从不同来源的样品中分离筛选出1株热稳定性较好的植酸酶产生菌株X19,初步鉴定为Aspergillus.sp。对其进行诱变育种获得热稳定性和酶活均得到提高的正突变株A73,所产植酸酶在90℃下作用10 min,酶活仍保留93%。对菌株A73的最适液体培养基的组成和发酵条件的研究结果表明:培养基的最佳配比为6%玉米淀粉,1.0%葡萄糖,1.0%NaNO3,0.005%KH2PO4,0.05%MgSO4.7H2O,0.05%KCl,0.001%MnSO4.4H2O和0.001%FeSO4.7H2O;最佳培养条件为初始pH值5.5,培养温度28℃,摇床转速200 r/min,发酵时间96 h。在该条件下,摇瓶发酵酶活达到2 186 U/ml。     

全膜双垄沟播玉米锌肥锰肥铁肥肥效试验

在泾川县旱塬区,对全膜双垄沟播春玉米基施锌肥、锰肥、铁肥,结果表明,除过量施用锰肥没有增产效果外,其它处理均有一定的增产效果,适宜用量分别为硫酸锌(ZnSO4.7H2O,含Zn21%)22.5 kg/hm2、硫酸亚铁(FeSO4.7H2O,含Fe19%)15.0 kg/hm2、硫酸锰(MnSO4.H2O,含Mn31.8%)26.3 kg/hm2。     

辽藁本内生细菌ZHAB63鉴定与拮抗菌筛选

采用组织块法,从健康辽藁本中共分离出64株内生细菌,经初筛和复筛,菌株ZHAB63对11种常见中药材病原菌拮抗率均在50.00%以上(P0.01),根据菌株形态特性、16SrDNA基因序列测定以及系统发育树初步鉴定发现,菌株ZHAB63为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens);采用L9(34)正交设计试验优化该菌株发酵培养基及发酵条件,确定液体发酵最适培养基为:蔗糖15.0 g·L-1,酵母粉20.0 g·L-1,蛋白胨20.0 g·L-1,硫酸镁5.0 g·L-1;最佳发酵条件:温度30℃,pH 6.5,转速180 r·min-1,培养时间48 h。研究表明,辽藁本中内生细菌资源丰富,以其研制新配方生物农药有待深入开发。     

黑曲霉变异株AU 55发酵菊芋汁产菊粉酶的研究

为提高菊粉酶活力,以菊芋汁为主要培养基成分,对一株产菊粉酶的黑曲霉(Aspergillus niger)变异株AU-55发酵产酶历程和发酵工艺条件进行研究。结果表明,菊芋汁中还原糖的含量为3.4 g.L-1,菊糖含量约为121.3 g.L-1;黑曲霉AU-55在基础发酵培养基中培养,发酵液中菊粉酶活力、糖度、酸度、菌体生物量随着发酵时间的不断延长而变化,96 h菊粉酶活力达到最大;菊芋汁添加量、玉米浆添加量、初始pH、接种量对黑曲霉AU-55菊粉酶活力的影响均显著,优化后的发酵工艺参数为:菊芋汁250.0 mL.L-1,玉米浆20.0 g.L-1,NH4H2PO45.0 g.L-1,MgSO4.7H2O 0.5 g.L-1,NaCl 3.0 g.L-1,初始pH 6.5,接种量35.0 g.L-1,30℃,200 r/min下,培养4 d,所得菊粉酶活力最高达42.3 U.mL-1。     

4种重金属盐对泥东风螺幼螺的急性毒性试验

在水温16～23℃、盐度30、pH8.0的环境条件下,采用静水试验法测定硫酸铜(CuSO4.5H2O)、硫酸锌(ZnSO4.7H2O)、氯化镉(CdCl2)和硝酸铅[Pb(NO3)2]4种重金属盐对泥东风螺Babylonia lutosa幼螺的急性毒性。结果显示,对泥东风螺幼螺24、48、72和96h的半数致死质量浓度(LC50),CuSO4.5H2O分别为2.596、1.037、0.690和0.400 mg.L-1;ZnSO4.7H2O分别为16.384、4.738、3.225和2.721mg.L-1;CdCl2分别为17.286、7.340、3.799和2.361 mg.L-1;Pb(NO3)2分别为650.640、410.595、262.342和141.525mg.L-1。CuSO4.5H2O、ZnSO4.7H2O、CdCl2和Pb(NO3)24种重金属盐对泥东风螺幼螺的安全浓度(SC)分别为0.040、0.272、0.236和14.153mg.L-1;Cu2+、Zn2+、Cd2+和Pb2+、4种重金属离子对泥东风螺幼螺的安全浓度分别为0.010、0.062、0.148和8.501mg.L-1,其毒性大小为Cu2+>Zn2+>Cd2+>Pb2+。     

产γ-氨基丁酸乳酸菌的分离与鉴定

从泡菜和酸奶中分离出产γ-氨基丁骏(GABA) 乳酸菌10株,筛选得GABA高产菌株B、BY和SS.3个菌株在含10 g·L-1谷氨酸钠(MSG) 的MRS培养基中培养6 d,发酵液中GABA含量分别达到3.680、3.341和2.700 g·L-1.通过16S rDNA基因鉴定和生理生化鉴定,确定菌株B和SS为乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis) ;菌株BY为唾液链球菌嗜热亚种(Streptococcus salivarius subsp.thermophilus) .     

引发处理对丹参种子萌发及幼苗抗旱性的影响

用H2O、200 g.L-1PEG-6000、2.5 g.L-1KNO3、100 mg.L-1GA3、12.5 mg.L-16-BA引发处理丹参种子,研究不同处理对种子萌发及幼苗抗旱性的影响。结果表明,各处理提高发芽势、发芽率的顺序为12.5 mg.L-16-BA100 mg.L-1GA32.5 mg.L-1KNO3200 g.L-1PEG-6000H2OCK;简化活力指数顺序为2.5 mg.L-1KNO3100 mg.L-1GA3≈200 g.L-1PEG-6000H2O12.5 mg.L-16-BACK。幼苗的抗旱性顺序为H2O200 g.L-1PEG-60002.5 mg.L-1KNO312.5 mg.L-16-BACK100 mg.L-1GA3。最终得出用200 g.L-1PEG-6000或2.5 mg.L-1KNO3作为引发剂处理丹参种子,可有效促进种子萌发和提高幼苗抗旱性。     

内生产酶溶杆菌R-2-1发酵工艺优化

以一株具有广谱抗菌活性的黄花蒿内生产酶溶杆菌(Lysobacter enzymogenes)R-2-1为研究对象,在LB液态培养基基础上,通过正交试验确定了其最佳发酵培养基组成为:玉米粉20 g·L-1,花生粕20 g·L-1,豆粕20 g·L-1,酵母提取物2 g·L-1,胰蛋白胨4 g·L-1,(NH4)2SO46 g·L-1,K2HPO46 g·L-1,Mg SO4·7H2O 4.8 g·L-1,Mn SO4·H2O 0.02 g·L-1,Fe SO4·7H2O 0.01 g·L-1,Ca Cl2·2H2O 0.12 g·L-1,Na Cl 2.4 g·L-1,核黄素3.0 g·L-1,硫胺素1.2 g·L-1,维生素B60.01 g·L-1,生物素0.1 g·L-1,优化后培养活菌数24 h达到6.94×108cfu·m L-1。以菌株R-2-1总发酵代谢物产量为指标,在单因素实验的基础上,采用响应面法优化其发酵工艺条件,确定最佳发酵条件为:发酵时间87.2 h,初始p H 7.55,装液量204 m L,接种量7.90 m L,发酵物产量达(0.518±0.050)g·200 m L-1;通过摇床转速和发酵温度因素考查,确定在摇床转速210 r·min-1、发酵温度30℃条件下,该菌代谢物产量可进一步提高到(0.523±0.023)g·200 m L-1。本试验结果可为该菌杀菌剂扩大生产提供参考。     

基于PB设计和BBD响应面法优化高山被孢霉 产花生四烯酸发酵培养基

使用响应面法对高山被孢霉生产花生四烯酸(ARA)的发酵培养基成分进行优化。以摇瓶发酵7 d的ARA产量为指标,在前期试验的基础上,利用Plackett-Burman法设计试验考察酵母粉、葡萄糖、玉米浆干粉、磷酸二氢钾、硫酸镁和氯化钙6个因素的影响;分析筛选出葡萄糖、酵母粉和玉米浆干粉3个主要因素,再以最陡爬坡路径试验逼近最大响应区域,最后用Box-Behnken中心组合设计三因素三水平试验,利用Design Expert 10软件进行二次回归分析计算得到ARA产量最高的培养基,其成分为酵母粉12.6 g·L~(-1),葡萄糖75.6 g·L~(-1),玉米浆干粉7.1g·L~(-1),磷酸二氢钾1 g·L~(-1),硫酸镁0.5 g·L~(-1),氯化钙0.5 g·L~(-1),pH 6.5。在该条件下,ARA产量达到了5.12 g·L~(-1),与预测值的5.17g·L~(-1)接近,相比优化前的初始培养基,ARA产量提高了27.3%。该结果为提高ARA生产水平提供了研究基础。     

荔枝转基因胚性愈伤组织原生质体分离条件的优化

对荔枝品种下番枝转基因胚性愈伤组织原生质体分离条件进行了优化.结果表明:转基因胚性愈伤组织抗性细胞系Q811培养16-18 d后,转入含8 g.L-1纤维素酶Cellu lose R-10和4 g.L-1离析酶M acrease R-10的CPW+130 g.L-1甘露醇酶液中,在(25±2)℃、黑暗条件下,连续振荡(30-40 r.m in-1)10-11 h进行酶解,转基因原生质体产量达到18.2×106个.g-1,存活率达97.5%.     

苏云金杆菌摇瓶发酵培养基

采用正交试验法 ,对苏云金芽孢杆菌高毒力菌株 TS1 6进行了摇瓶发酵培养基筛选试验 .结果表明 ,不同原料对发酵液毒力的影响相差很大 ,在几种培养基组分中以鱼粉对发酵液的影响最大 .试验所得的最佳培养基组合为 :黄豆饼粉 3 2 g· L- 1 、玉米粉 1 4g· L- 1 、花生饼粉 3 2 g· L- 1 、鱼粉 1 4g· L- 1 、蛋白胨 4g· L- 1 、酵母 6g· L- 1 、Fe SO4 · 7H2 O 0 .0 4g· L- 1 、Zn-SO4 · 7H2 O 0 .0 8g· L- 1 .     

玻璃化法超低温保存荔枝胚性愈伤组织及其植株再生

采用玻璃化法对荔枝胚性愈伤组织超低温保存及植株再生进行了初步探讨.将继代保存15 d的荔枝胚性愈伤组织转接到预培养基[MS+50 mL.L-1二甲基亚砜(DMSO)+1 mg.L-12,4-D+20 g.L-1蔗糖+6 g.L-1琼脂糖]中,在5℃低温下预培养.将预培养后的愈伤组织于常温下用体积分数为60%玻璃化溶液(2PVS2)装载20 min,再于0℃下用PVS2溶液平衡40 min;换新鲜的PVS2溶液,迅速投入液氮中保存.1周后取出,于40℃温水浴中化冻,弃PVS2,用1.2 mol.L-1蔗糖液+MS基本培养基的洗涤液洗涤3次,再接种到新鲜的培养基中恢复培养,恢复培养后的胚性愈伤组织能正常进行体细胞胚胎发生、成熟和植株再生.     

美味牛肝菌母种培养基的筛选

对美味牛肝菌(BoletusedulisBull.exFr.)进行了母种培养基筛选试验.结果表明,美味牛肝菌母种最适培养基为20.0g葡萄糖+7.0g酵母粉+3.0g黄豆粉+1.0gKH2PO4+0.5gMgSO4·7H2O+0.5gMnSO4·H2O+20.0g琼脂.     

太子参茎尖脱毒培养及增产效果

取长约0.5 mm,带有1-2个叶原基太子参茎尖,接种在MS+0.5 mg.L-1NAA+0.5 mg.L-1BA+30 g.L-1蔗糖+6.5 g.L-1琼脂培养基上培养40 d,组培苗出苗率为86.7%;接种在1/2MS+1.5 mg.L-1IBA+0.5 mg.L-1IAA生根培养基,组培苗生根率最高,为93.3%;组培苗成活率为85.2%,定植成活率为100%.采用目测法和指示植物鉴定法检测,初步认为茎尖组培苗不带病毒.小区对比试验表明,茎尖脱毒苗单株产量比种根组培苗增产102.7%.     

大岩桐的组织培养

以大岩桐的叶片为外植体进行组织培养。结果表明:叶片可诱导形成愈伤组织。经实验筛选出各培养阶段最适宜的培养基:(1)诱导、继代培养基为Ms+BA2mg·L-1+NAA0.2mg·L-1;(2)生根培养基为1/2Ms+IBA0.2mg·L-1+AC1g·L-1。     

枯草芽孢杆菌S37沼液发酵培养基优化及其产物对棉苗立枯病的防治

为获得以沼液为基础的枯草芽孢杆菌S37的最佳发酵培养基。采用Plackett Burman法和响应面(Response Surface Methodlolgy, RSM)对以沼液为基础的枯草芽孢杆菌S37抑菌蛋白的发酵培养基进行优化。在Plackett Burman试验基础上确定对抑菌蛋白影响较大的4个显著因素：MgSO₄·7H₂O、玉米粉、KH₂PO₄和豆粕;通过最陡爬坡试验,中心组合设计及响应面分析确定枯草芽孢杆菌S37的最优发酵培养基组成：MgSO₄·7H₂O 2.95 g·L^-1、(NH₄)₂SO₄ 2.4 g·L^-1、NaCl 3.0 g·L^-1、KNO₃ 4.41 g·L^-1、CaCO₃ 5.89 g·L^-1、ZnCl₂ 1.11 g·L^-1、玉米粉4.18 g·L^-1、KH₂PO₄ 4.14 g·L^-1和豆粕2.79 g·L^-1。在优化条件下进行发酵验证,试验值和预测值较接近,吻合度较高,相对误差较小,枯草芽孢杆菌抑菌圈达1.94 cm,比优化前提高8.38%;用此培养基发酵产物滴施棉苗根际土壤,与对照相比,相对防效达到45.94%。     

淡紫拟青霉FZ-0289产几丁质酶的条件优化

通过单因素和多因素正交试验对淡紫拟青霉FZ0289产几丁质酶的条件进行了研究.单因素试验表明:100目几丁质粉末对菌体产几丁质酶的诱导性最强;添加蛋白胨能使产酶高峰提前,产酶量增加.多因素正交试验表明,在添加2g·L-1100目几丁质粉末、2g·L-1蛋白胨、1g·L-1KH2PO4、0.5g·L-1MgSO4、0.2g·L-1CaCl2和0.2g·L-1NaCl的培养基中接入经马铃薯蔗糖培养基(PSA)活化10d的菌碟(接菌孢子量为6×109个·L-1,500mL摇瓶中培养体积为150mL),在28℃、150r·min-1的条件下培养3d,发酵液中几丁质酶活达到0.11U·mL-1.