纳豆芽孢杆菌米糠发酵物中抗氧化成分分析

分离提取纳豆芽孢杆菌米糠发酵物(Rice bran formentation,RBF)的各成分,检测其抗氧化活性;并利用薄层层析对其抗氧化成分进行分离,对乙酸乙酯萃取相的薄层分离活性部位和乙醚萃取相进行气相色谱-质谱联用(GC-MS)分析。结果显示,米糠发酵物中大分子成分抗氧化活力较低,系统分离后各萃取相除了石油醚相以外均有抗氧化活力,其中乙酸乙酯相和乙醚相的抗氧化活力最强,分别为168和163 kU/g;乙酸乙酯相抗氧化活性成分主要是烯丙基甲基硫醚,乙醚相抗氧化活性成分主要是3,5-二甲基苯酚、2,4-二叔丁基苯酚和二氢吡啶等。     

碳酸铯催化下烷基芳醚的制备

研究了碳酸铯催化酚与卤代烃反应制备烷基芳醚．以碳酸铯作催化剂,氢氧化钾作碱,DMF作溶剂,室温下,在分子筛存在下,苯酚、萘酚、3,5-二叔丁基苯酚及4-[二(4 -叔丁基苯基)苯基甲基]苯酚与溴乙烷、溴丁烷及苄溴等反应形成相应的烷基芳醚,收率为90%～96%．结果表明,碳酸铯可有效地催化酚与卤代烃反应．     

南海红树林内生真菌Gx-4c代谢产物研究

采用反复硅胶柱色谱法、Sephadex LH-20凝胶色谱法等进行南海红树林内生真菌Gx-4c的代谢产物分离纯化,并通过理化常数测定和光谱分析鉴定其化学结构。研究结果:从南海红树林内生真菌Gx-4c的菌体中分离得到4个代谢产物,经波谱解析,分离得到的4个化合物分别为:5,7-二羟基-2-甲基色原酮(1)、3-羟基-2-甲基苯酸(2)、3,4-二氢-8-羟基-3-甲基-1H-2-苯吡喃-1-酮-5-羧酸(3)、3,4-二氢-8-羟基-3,5-二甲基-1H-2-苯吡喃-1-酮(4);初步药理活性显示化合物1对口腔癌细胞KB、KBv200的抗肿瘤活性值分别为7.5和11.2 Mol。研究结果表明:所有化合物均首次从南海红树林内生真菌Gx-4c中分离得到。     

2,6-二叔丁基苯酚对辣椒的化感效应及缓解物质

为探讨2,6-二叔丁基苯酚对辣椒的化感效应及凹土对该化感作用的缓解效应,将2,6-二叔丁基苯酚设定为0.01、0.1、1.0、10 mmol/L 4个浓度和1个对照(CK),处理辣椒、番茄、青菜种子测定其发芽率和辣椒的各项生长指标。将凹土添加量分别设定为20、40、60 g/kg 3个含量,添加于2,6-二叔丁基苯酚含量为0.1、1.0、10 mmol/L的辣椒生长土壤中,共9个处理。分别测定辣椒的株高、叶绿素含量、根系活力和超氧化物歧化酶(SOD)等各项生长及生理指标,研究凹土对该物质化感作用的缓解效应。结果表明,随2,6-二叔丁基苯酚浓度的提高,辣椒、青菜、番茄种子的发芽率呈现先升高后降低的趋势。土壤中含有2,6-二叔丁基苯酚添加凹土后的处理,以添加凹土含量为20~40 g/kg的各处理,辣椒叶绿素含量和根系活力等生长和生理指标较高,SOD酶含量较高,过氧化物酶(POD)含量较低,表明凹土对2,6-二叔丁基苯酚的化感抑制有明显的缓解效应。     

翅荚木人工林木材提取物成分分析

利用GC-MS技术测定分析17年生和10年生翅荚木人工林木材甲醇提取物和三氯甲烷提取物的主要成分，结果表明，17年生和10年生翅荚木人工林木材甲醇提取物多数成分均为含氧化合物，有己酸、2,3-二氢-3,5-二羟基-6-甲基-4H-吡喃-4-酮、2-甲氧基-4-乙烯基苯酚、香兰素、2,4-二叔丁基苯酚、丁香草酮、3,4,5-三甲氧基苯酚、4-羟基-3,5-二甲氧基苯甲醛、4-羟基-2-甲氧基肉桂醛、1,2-苯二甲酸双(2-甲基丙基)酯、棕榈酸、3,3’-二甲氧基-4,4’-二羟基二苯乙烯、3-甲基-柱头甾-5-烯-3-醇共13种相同的成分；17年生和10年生翅荚木人工林木材三氯甲烷提取物多数成分亦为含氧化合物，有香兰素、癸烷、邻苯二甲酸二丁酯、菜油甾醇、三氟乙酸羽扇豆醇5种相同的成分。     

气相色谱-质谱法同时测定坚果中的4种抗氧化剂

【目的】为了建立了气相色谱质谱法同时测定坚果中的叔丁基对羟基茴香醚(BHA)、2,6-二叔丁基对甲基苯酚(BHT)、叔丁基对苯二酚(TBHQ)、2,6-二叔丁基-4-羟甲基苯酚(Ionox-100)4种抗氧化剂的分析方法。【方法】坚果中的4种抗氧化剂经石油醚提取、甲醇溶解、冷冻分层后取上层甲醇,用气相色谱质谱联用仪测定。【结果】结果表明, 4种抗氧化剂在50μg/L～1000μg/L范围内有良好线性关系,相关系数均大于0.99;定量限在0.128～0.176mg/kg之间;在3个添加水平下(1.0、4.0、20.0mg/kg)的平均回收率为86.8%～100.2%,相对标准偏差(n=7)为1.9%～9.6%。【结论】本法样品处理简单快速,灵敏度和选择性高,重复性好,适用于坚果中的4种抗氧化剂的同时检测。     

湖北贝母活性成分与内生菌次级代谢产物研究

为探究湖北贝母不同组织贝母素乙含量、内生菌组成及其次级代谢产物的抑菌活性,采用气相色谱法测定湖北贝母鳞茎、花、叶的贝母素乙含量,分别利用16S rDNA和ITS测序技术鉴定内生细菌和真菌,并通过琼脂扩散法、微量二倍稀释法研究内生菌次级代谢产物对10株供试菌的抑菌活性。结果表明:湖北贝母叶中贝母素乙含量最高,达(3.99±0.10) mg/g,其含量是鳞茎的1.78倍、花的4.24倍;从湖北贝母中分离鉴定了4株内生菌,分别为Pseudomonas sp. BM-X-6、Arthrinium sp. BM-Z-5、Aspergillus sp. BM-Z-1、Aspergillus sp. BM-Z-3;3株内生真菌次级代谢产物抑菌活性均优于细菌Pseudomonas sp. BM-X-6,其中Arthrinium sp. BM-Z-5的次级代谢产物抑菌谱最广,对肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌、鲍曼不动杆菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌有中度抑制活性。     

珠兰香精油的提取及其香气成分分析

利用水蒸汽蒸馏法提取珠兰香精油,通过正交试验优选获取珠兰香精油的技术参数,结果表明:珠兰香精油的最佳提取工艺条件是将珠兰粉碎过30目筛,加水5倍,提取6 h;用气相色谱-质谱联用仪对珠兰挥发油的化学成分进行分离鉴定,得出27个组分,占峰面积的85.89%,并用面积归一化法测定了各种香气成分的相对百分含量,其主要挥发性成分有反-罗勒烯(5.71%)、3,6-二甲基-4,5-二乙基-3,5-辛二烯(4.61%)、1-(1,4-二甲基-3-环己烯基)乙酮(3.53%)、2,6-二甲基-2,4,6-辛三烯(1.45%)。     

2,3-二甲氧基-5-甲基苯酚衍生物的合成及生物活性

以2-羟基-5-甲基苯乙酮为原料,经溴化、甲醚化、Baeyer-Villiger氧化、醇解、Ullman反应得到具有杀虫活性的苦皮藤内生菌代谢产物2,3-二甲氧基-5-甲基苯酚。以对甲酚为原料,经溴化、Ullman反应和甲醚化反应得到3,4,5-三甲氧基甲苯,所合成化合物结构经核磁共振确认。测定了这些化合物对3龄粘虫（My-thimna separataWalker）幼虫的毒杀活性和对某些植物病原菌的抑菌活性。其中部分化合物在500 mg/kg的浓度下有较强的抑菌活性。     

2株红树内生真菌混合发酵培养液中代谢产物的分离鉴定

将混合发酵技术应用于南海红树林内生真菌E33和K38代谢产物的培养,从该提取物中分离到5个化合物,利用波谱技术确定其结构分别为2-甲酰基一3,5-二羟基-4-甲基苯甲酸(化合物1)、6,8-二羟基-4-乙酰基异香豆素(化合物2)、5-羟基-6,8-二甲氧基-2,3-二甲基-4H-萘-[2,3-b]-吡喃-4-酮(化合物...     

小单孢菌227所产生物活性物质的抑菌特性研究

[目的]研究小单孢菌227所产生物活性物质的抑菌特性。[方法]分别从小单孢菌227摇瓶发酵液的上清液和菌丝体的乙醇提取液中提取生物活性物质,分别对其进行抑菌活性的测定。[结果]小单孢菌227所产生物活性物质对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、苏云金芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌均有较强的抑制作用。该菌所产抗菌活性物质是既有脂溶性又有水溶性的多组分物质。用乙醚萃取脂溶性物质的萃取效果分别优于正丁醇、乙酸乙酯和正乙烷。对小单孢菌227菌丝体乙醇提取液与离心上清液抑菌能力比较结果表明小单孢菌227所产生物活性物质属胞外产物。[结论]小单孢菌227所产生物活性物质具有较强抑菌效果。     

枯草杆菌诱导家蝇幼虫产生抗菌物质的研究

[目的]探究枯草杆菌诱导家蝇幼虫产生抗菌物质。[方法]研究枯草杆菌诱导的家蝇幼虫提取物的抗菌活性及其对温度、酸碱、离子强度的稳定性。[结果]枯草杆菌诱导的家蝇幼虫提取物对6种病原菌和工程菌大肠杆菌JM109均有抑制作用,其中对革兰氏阳性菌的抑制作用更强,诱导组的抗菌活性优于未诱导组。枯草杆菌诱导家蝇产生抗菌物质的具有很好的温度稳定性,在pH值4~10范围内都有较高的活性,但随着离子强度的升高抗菌活性下降。[结论]该研究为抗菌物质应用于饲料提供理论依据。     

芽孢杆菌抗菌作用研究

将纳豆芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌3种菌单菌发酵培养和两两混合发酵培养及三者混合发酵培养24 h和48 h后,提取上清液,即为抗菌粗提液。通过杯碟法检测上清液对猪丹毒、金黄色葡萄球菌、葡萄球菌、产气杆菌、大肠杆菌及巴氏杆菌6种菌的生长是否具有抑制作用及3种菌之间是否有抑制作用,以确定3种菌在发酵过程中是否产生抗菌物质以及哪个时期发酵产生的抗菌物质的抗菌作用更强。结果表明,3种芽孢杆菌的提取液对6种菌的生长都具有一定的抑制作用;发酵24 h的上清液比发酵48 h的上清液的抗菌作用更强;3种芽孢杆菌之间除地衣芽孢杆菌对枯草芽孢杆菌具有抑制作用外,其它的两两之间都没有抑制作用。     

复合酶处理废次烟末制备烟草浸膏

对果胶酶、纤维素酶、α-淀粉酶和中性蛋白酶4种酶的复合酶处理废次烟末制备烟草浸膏的工艺进行了研究,对酶添加量、作用时间、作用温度和作用pH进行了优化.结果表明,优化条件果胶酶、纤维素酶、α-淀粉酶和中性蛋白酶的添加量分别为0.05％、0.15％、0.05％、0.05％,处理温度50℃,处理时间1h,pH自然.与对照相比,酶法处理后制备的浸膏烟气浓度和劲头明显增加,烟气柔和细腻,有润感和甜感,喉部和鼻腔无刺激,烟香丰富,有烘烤香和果甜香.处理后的浸膏中还原糖含量增加了123％,氨基酸含量增加了74％,蛋白质含量变化不大.GC/MS分析表明,酶处理后对烟草香气有重要贡献的物质如茄酮、巨豆三烯酮、3-羟基-β-大马酮、紫罗兰醇以及紫罗兰酮等物质含量均有所增加,且非酶促棕色化反应产物5,6-二氢-2H-吡喃-2-酮、3,5-二羟基-2-甲基-4(H)吡喃-4-酮、2,3-二氢-3,5-二羟基-6-甲基-4(H)吡喃-4-酮及2,6-二甲基-4-硫代呋喃酮等含量也明显提高.     

橡胶树枯草芽孢杆菌Czk1抑菌活性物质的理化性质

采用杯碟法和生长速率法,对橡胶树枯草芽孢杆菌菌株Czk1发酵液中活性物质进行了初步定位。结果表明：活性物质属于胞外分泌型代谢产物,存在于发酵上清液中。理化性质的研究表明,其抗菌物质表现出耐高温,不耐强酸碱,对紫外线和蛋白酶K不敏感,以及对5种常见的金属离子溶液、有机溶剂具有不敏感的特性;采用酸沉淀后甲醇抽提的方法可提取该活性物质。Czk1培养条件的单因子实验结果表明,YPD培养基作为该菌株的发酵液培养基,初始pH值为7.0,以7%接种量接种,摇床培养（28℃,180r·min-1）3d,Czk1表现出对病原菌最佳的拮抗活性。     

解淀粉芽孢杆菌F11抗真菌活性研究

解淀粉芽孢杆菌F11对核盘病菌、玉米大斑病菌、猕猴桃软腐病菌、烟草炭疽病菌等12种作物病原菌具有高效、广谱的抑菌效果,研究其生物防治机理可为该菌株应用于植物病害防治提供理论依据。本研究采用混菌法、牛津杯法及显微镜观察法探究了菌株F11发酵液不同稀释倍数、发酵液3种分离液（菌株发酵液离心分离获得上清液A,上清液A继而进行酸沉淀和甲醇提取分别获得发酵上清液B和胞外代谢物粗提液）对病原菌的抑制效果及抑菌特性。混菌法结果表明,菌株F11的抑菌效果随稀释倍数的增加而逐渐下降,但1 000倍稀释液对樟树炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioides）的相对抑制率和10倍稀释液与发酵原液对烟草黑胫病菌（Phytophthora parasitica var.nicotianae）、核盘病菌（Sclerotinia sclerotiorum）、玉米大斑病菌（Setosphaeria turcica）、猕猴桃软腐病菌（Botryosphaeria dothidea）的相对抑制率均达100%,且所列稀释液与发酵原液间无显著差异。牛津杯法结果表明,上清液B中不含抑菌活性物质,而上清液A与胞外代谢物粗提液中均含有抑菌活性物质。显微镜观察结果显示,胞外代谢物粗提液中的抑菌活性物质可使病原菌菌丝消融、断裂、扭曲、缠绕变形、原生质体凝集渗漏、形成泡囊结构等。研究表明,菌株F11病原菌的抑菌效果随发酵液稀释倍数增加而下降,其对樟树炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioides）的防治效果最好,发酵液经1 000倍稀释后相对抑制率仍达100%;对烟草黑胫病菌、核盘病菌、玉米大斑病菌、猕猴桃软腐病菌四种病原菌则可采用10倍稀释液代替发酵原液进行防治。其抑菌活性物质存在于胞外代谢物粗提液中,该物质的抑菌特性和脂肽抗生素的作用基本一致,推测为一类脂肽抗生素。     

黄粉虫幼虫抗真菌物质的诱导及其抗真菌活性研究

[目的]研究用真菌诱导黄粉虫幼虫表达抗菌物质及其对真菌的影响。[方法]用黄粉虫幼虫从土壤中诱捕真菌,培养出2种病原真菌作为诱导源分别对黄粉虫幼虫做诱导试验,每种试验分别进行对照、菌刺和菌饲3种处理,并于处理后1、2、3、4和5 d分别提取抗菌物质,用平板琼脂打孔扩散法测定其抑菌圈直径而确定其抗真菌活性。[结果]结果表明,黄粉虫幼虫受真菌诱导后抗真菌活性比对照都有不同程度的增加,同时不同真菌诱导表达样品对于相应的诱导真菌均表现明显的抗真菌活性。说明不同真菌诱导产生的抗真菌物质与诱导源有关,抗真菌物质为黄粉虫幼虫体内固有成分,诱导增加了抗真菌物质的表达量,同时刺激新的抗真菌物质的产生。[结论]用真菌直接诱导黄粉虫幼虫可以产生抗真菌物质。     

小麦赤霉病拮抗菌P72抗菌物质的分离纯化和性质研究

[目的]研究小麦赤霉病拮抗菌P72的抑菌活性及稳定性。[方法]将Bacillus subtilisP72接种于发酵培养液中,接种量5%,28℃摇床培养48 h后,8 000 r/min,离心10 min取菌株发酵离心所得上清液进行分离纯化、遗传稳定性、热稳定性及酸碱稳定性测定。[结果]P72菌株发酵上清液经过盐析、透析后进行DEAE-52离子交换层析,用0.5 mol/LNaCl溶液洗脱的蛋白对小麦赤霉病菌的拮抗能力最强。SDS-PAGE电泳显示具有抗菌作用的蛋白分子量约为40 kD。经过稳定性的试验测定,该抗菌物质的拮抗活性具有遗传稳定性,在60℃有较高的稳定性,无菌液对酸具有稳定性,在碱性溶液中不具有稳定性。[结论]小麦赤霉病拮抗菌P72对小麦赤霉病菌的拮抗能力较强,抗菌活性较稳定,且热稳定性较好,有广阔的开发前景。     

产蛋白酶生防细菌的筛选及其对病原真菌的拮抗作用

从小麦根际土壤中分离到一株高产蛋白酶并对多种植物病原真菌具有拮抗作用的生防细菌T2.通过形态特征、生理生化及16S rDNA同源性序列分析,初步鉴定该菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis).其发酵液经硫酸铵沉淀后的粗酶液可明显抑制棉花枯萎病菌菌丝生长及孢子萌发,在显微镜下观察到棉花枯萎病菌孢子萌发的芽管短、孢子膨大变形呈泡囊状,菌丝呈串珠状膨大、细胞破裂、细胞质外渗,表明该细菌菌株产生的胞外蛋白酶可能与病菌菌丝生长受抑制密切相关.