天胡荽抗肿瘤活性成分研究

[目的]研究天胡荽的抗肿瘤活性成分.[方法]利用色谱手段进行分离纯化,应用NMR方法鉴定结构,并进行MTT法抗肿瘤试验.[结果]从天胡荽中分离鉴定了4种化合物（化合物1～4）.天胡荽的各萃取部位对LA795细胞株有一定的抑制作用,其中以正丁醇层萃取物在高浓度800雌/ml时的抑制作用较强,而石油醚和乙酸乙酯萃取物的抑制作用相对较弱.单体化合物对LA795细胞株的抑制作用均较弱.[结论]4个化合物有一定抑制肿瘤细胞生长作用.     

虫生真菌Isaria cateniannulata次级代谢产物及抗肿瘤活性研究

[目的]对虫生真菌环链棒束孢(Isaria cateniannulata)的次级代谢产物进行分离并研究其抗肿瘤活性。[方法]采用溶剂萃取、硅胶柱色谱、凝胶Sephadex LH-20等方法进行分离纯化,根据理化性质和波谱技术对分离得到的化合物进行结构鉴定,利用MTT法对化合物的抗肿瘤活性进行测试。[结果]从虫生真菌Isaria cateniannulata中共分离得到8个化合物,分别为β-麦角甾醇、豆甾-4-烯-3-酮、5α,8β-过氧-(22E,24R)-麦角甾-6,22-二烯3β-醇、4-methyl-5,6-dihydro-2H-pyran-2-one、(R)-甲羟戊酸内酯、对羟基苯甲醛、β-石竹烯和石竹烯氧化物。除化合物4外,其余化合物均是从该种中首次分离得到。抗肿瘤结果显示,化合物7、8对肿瘤细胞具有一定的抑制能力。[结论]该研究为新的抗肿瘤药物开发方面提供了广阔空间。     

一株野生粗毛纤孔菌的分类鉴定及其发酵上清液的抗肿瘤活性

[目的]对一株野生粗毛纤孔菌进行分类学鉴定,并分析其发酵上清液抗肿瘤活性,为粗毛纤孔菌的开发利用及抗肿瘤活性机制研究提供理论依据.[方法]通过形态特性观察、ITS序列分析及系统发育进化树构建等方法对一株野生粗毛纤孔菌(简称IH3菌株)进行分类学鉴定,并利用B16、Hep-3B、Hela、MCF-7、HCT-116和4T16种肿瘤细胞及正常细胞HUVEC分析该菌株发酵上清液的抗肿瘤谱.从石油醚、乙酸乙酯和正丁醇中筛选出萃取抗肿瘤活性物质的最佳有机溶剂,利用液相色谱分离技术分离抗肿瘤活性组分,并利用MTT(四唑盐)法分析活性组分对不同肿瘤细胞的半致死浓度(IC50).[结果]IH3菌株的形态特性与粗毛纤孔菌相似,且其ITS序列与粗毛纤孔菌(MF183947.1)的相似度最高,为98%,鉴定为粗毛纤孔菌.系统发育进化树分析结果也显示,IH3菌株属于纤层孔菌属类群,与3个粗毛纤孔菌菌株的亲缘关系较近.IH3菌株的发酵上清液对不同肿瘤细胞的抑制活性排序为:B16>Hep-3B>Hela>MCF-7>4T1=HCT-116.正丁醇萃取的IH3菌株发酵上清液抗肿瘤活性组分对B16肿瘤细胞的抑制率最高,达80%,说明正丁醇对发酵上清液中抗肿瘤活性组分的萃取效果最佳.利用液相色谱分离方法可有效获得纯度较高的单一抗肿瘤活性组分(WIH3),该活性组分对B16、Hep-3B、Hela和MCF-7肿瘤细胞的半致死浓度(IC50)分别为29.322、37.387、47.029和58.009μg/mL.[结论]IH3菌株被鉴定为粗毛纤孔菌,与已发表的粗毛纤孔菌菌株存在遗传差异,可能为粗毛纤孔菌的新亚种,其发酵上清液具有广谱的抗肿瘤活性.     

虾蛄活性肽的分离与纯化及其对肿瘤细胞凋亡的影响

[目的]为海洋抗肿瘤新药的开发提供候选药物.[方法]以海洋生物虾蛄为原料,采用胰蛋白酶水解提取虾蛄软体组织中的活性多肽,采用超滤、凝胶层析、高效液相色谱等技术对其进行分离与纯化,并选择高表达肿瘤细胞株进行体外抗肿瘤活性评价.[结果]获得纯度较高的活性肽FHOS,此肽的氨基酸序列为Phe Tyr Met Asn His.采用MTT法测得FHOS对PC-3细胞和A549细胞的最高增殖抑制率达到70.1％和90.0％,呈现良好的量效和时效关系.[结论]FHOS具有一定的抑制肿瘤细胞凋亡的活性.     

家独行菜子的化学成分研究

[目的]对家独行菜子的化学成分进行研究.[方法]利用溶剂萃取、柱色谱、LH-20凝胶、重结晶等方法对家独行菜子乙醇提取物进行化学成分分离,并通过波谱和理化性质等方法对化合物结构进行鉴定.[结果]从家独行菜子中得到12个化合物,分别为芥子酸（1）、芥子酸乙酯（2）、阿魏酸乙酯（3）、1,2-二芥子酰基葡萄糖（4）、对异丙基苯甲酸（5）、苯甲酸（6）、苯乙酰胺（7）、苯甲胺（8）、二苯乙酮（9）、蔗糖（10）、胡萝卜苷（11）、β-谷甾醇（12）.[结论]化合物2 ～ 10为首次从该植物中分离得到.     

昆仑雪菊中血管紧张素转化酶活性抑制成分的分离鉴定

[目的]从昆仑雪菊中分离纯化抑制血管紧张素转化酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)活性成分,鉴定其化学结构,并评价其对ACE的抑制活性.[方法]以抑制ACE活性为指标,筛选出最佳的昆仑雪菊萃取溶剂,提取得到粗提物,活性跟踪分离纯化粗提物中的单体化合物,并对单体化合物的活性进行评价.[结果]最佳的提取溶剂为甲醇,利用常压硅胶柱层析和Sephedex LH-20柱层析从粗提物中分离得到5个单体化合物,采用核磁共振(NMR)和电喷雾质谱(ESIMS)鉴定其化学结构:化合物1为咖啡酸甲酯;化合物2为脱镁叶绿素a;化合物3为β-香树脂;化合物4为异奥卡宁-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷;化合物5为对香豆酸甲酯.活性测试结果表明:化合物1、4和5都表现出了较强的抑制ACE活性,其中化合物4对ACE的抑制活性最强,IC50为(167.02±4.32) μmol·L-1,其次为化合物1和5,IC50分别为(237.74±5.82) μmol·L-1和(331.57±4.69) μmol ·L-1,提示这些化合物可能为昆仑雪菊中潜在的降血压物质.[结论]本研究结果为深入研究昆仑雪菊的降血压作用机制提供了物质基础.     

米仔兰中环戊烷并苯呋喃化学成分及细胞毒活性研究

[目的]对米仔兰中环戊烷并苯呋喃化学成分及细胞毒活性进行研究。[方法]采用硅胶、Sephadex LH-20柱层析及制备薄层色谱等分离方法,对米仔兰(Aglaia odorata Lour.)的化学成分进行研究,通过1H NMR、13C NMR和MS等波谱技术鉴定化合物的结构,并采用MMT法对其细胞毒活性进行测试。[结果]从米仔兰枝叶中分离得到6个包含环戊烷并苯呋喃结构的化合物,鉴定分别是roca-glamide、aglaroxin E、3'-Hydroxyrocaglafolin、3'-Hydroxyaglamide、rocaglaol和cyclorocaglamide。在极低的浓度下,化合物1～5分别对肿瘤细胞株A-539和MCF-7显示出细胞毒活性。[结论]化合物2和6在米仔兰植物中首次被发现;化合物1～5具有较好的细胞毒活性。     

海南狗牙花有效部位提取和体外抗肿瘤活性研究

[目的]初步筛查海南狗牙花抗肿瘤活性部位.[方法]采用MTT比色法测定海南狗牙花4种提取物分别对人非小细胞肺癌细胞(A549)和人乳腺癌细胞(MCF-7)体外生长抑制作用.[结果]海南狗牙花4种提取物对2种肿瘤细胞呈现不同的抑制活性,乙酸乙酯提取物的抗肿瘤活性最强,石油醚提取物次之,正丁醇萃取物较弱而萃取后的水层无抗肿瘤活性.[结论]该研究为深入研究海南狗牙花中具有抗肿瘤活性的单体化合物提供科学依据.     

光棘球海胆壳中化学成分的分离、鉴定及其抗肿瘤活性

采用硅胶柱色谱及薄层制备色谱等手段,从光棘球海胆Strongylocentrotus nudus壳中分离纯化出2种化合物,并对所获得的化合物经过理化性质、波谱分析和文献对照的方法进行结构鉴定,同时对所获得的化合物进行体外抗肿瘤活性测试。结果表明,从光棘球海胆壳中分离得到的2种化合物分别为棕榈酸(化合物1)和单棕榈酸甘油酯(化合物2)。体外抗肿瘤细胞活性测试表明,单棕榈酸甘油酯具有显著的抑制肿瘤细胞生长的活性,其可作为潜在的抗肿瘤药物进行进一步研究。     

玫瑰花中抗补体活性成分研究

[目的]分离鉴定玫瑰（Rosa rugosa）花中的抗补体活性成分。[方法]在活性筛选指导下,并用多种色谱方法进行分离纯化,并用核磁共振、质谱数据与文献数据对比鉴定化合物结构。[结果]从活性部位中分离出3个黄酮类化合物,分别为木犀草素（1）、槲皮素（2）和山柰酚（3）。[结论]玫瑰花提取物有体外抗补体作用,其中黄酮类化合物是其活性成分。     

同时蒸馏萃取法提取黔产鹅不食草挥发油的化学成分分析

[目的]探讨黔产鹅不食草挥发油的化学成分,为进一步开发利用鹅不食草提供依据。[方法]采甩同时蒸馏萃取法（sDE）提取鹅不食草挥发油,通过气相色谱～质谱联用技术（Gc—MS）对各个色谱峰定性,并用色谱峰面积归一法获得各化合物的相对含量。[结果]从鹅不食草挥发油中共鉴定出55种化合物,占总峰面积的96．45％。[结论]鹅不食草挥发油主要的成分为反式乙酸菊烯酯（62．46％）、辟甜没药烯（4．69％）、麝香草酚（3．88％）、马鞭草烯醇（3．03％）、1,1,5,6,6,9,9-七甲基-10-亚甲基-螺[2．7]癸-4-烯（2．66％）、香芹酚（2．57％）等。     

福鼎大白茶愈伤组织的诱导条件优化

[目的]优化福鼎大白茶愈伤组织的诱导条件。[方法]以茶叶品种福鼎大白茶的幼嫩茎段为外植体,以MS为基本培养基,添加不同浓度的2,4-D、KT、NAA和蔗糖,研究不同激素组合、蔗糖浓度对其愈伤组织诱导的影响。在继代培养过程中,研究了不同抗褐变剂对愈伤组织生长情况的影响及抗褐变的效果。[结果]不同激素对福鼎大白茶愈伤组织的诱导影响依次为2,4-D>KT>NAA。适宜福鼎大白茶愈伤组织生长的培养基为MS+2,4-D1.0 mg/L+NAA1.0 mg/L+KT0.5 mg/L+蔗糖30 g/L,pH值为5.8。在培养基中添加0.5%的活性炭和0.1%的聚乙烯吡咯烷酮可有效减轻愈伤组织的褐变。[结论]不同的激素组合、蔗糖浓度及抗褐变剂对福鼎大白茶愈伤组织的诱导均有较大影响。     

铜完全抗原的合成·鉴定及单克隆抗体的制备

[目的]获得抗Cu2＋的单克隆抗体。[方法]以异硫氰酸苄基乙二胺四乙酸（ITCBE）为双功能螯合剂,使Cu2＋分别与载体蛋白牛血清白蛋白（BSA）、卵清蛋白（OVA）偶联,获得免疫原（Cu-ITCBE-BSA）和检测原（Cu-ITCBE-OVA）。用非变性聚丙烯凝胶电泳鉴定偶联结果。免疫Balb/C小鼠,通过细胞融合,获得能稳定分泌抗Cu2＋的杂交瘤细胞株,并通过亲和层析法纯化腹水获得抗Cu2＋的单克隆抗体。[结果]获得了1株能稳定分泌抗Cu2＋的单克隆抗体的细胞株（4A6）,所分泌的抗体亚类为IgG1,细胞培养上清效价可达1∶1.0×103,腹水效价可达1∶6.4×105。以该细胞株接种Balb/C小鼠腹腔,获得抗Cu2＋的腹水型单抗;该腹水经过亲和层析法纯化后,纯度可达95%。[结论]获得了抗Cu2＋的单克隆抗体,为环境水样中Cu2＋的免疫学检测奠定基础。     

苦楝皮提取物的抗肿瘤活性研究

[目的]研究苦楝皮提取物的抗肿瘤活性。[方法]采用提取及萃取过程制备苦楝皮提取物分离化合物,选取人肝癌BEL7402、人肺癌H460和人胃癌SGC-7901等3种细胞为被试细胞,测定苦楝皮提取物对癌细胞的抑制作用。[结果]当异川楝素和苦楝皮萜酮浓度较高时(50和100μ/ml),提取物对人胃癌、人肺癌和人肝癌细胞株的抑制率都超过或者接近50%。当其余的4种化合物浓度较高(50和100)时,其对3种细胞也有比较明显的抑制生长作用。表明从苦楝皮提取出的物质有一定的细胞毒作用。[结论]苦楝皮提取物对癌细胞的生长有抑制作用。     

石胡荽组织培养及无性系建立的研究

为了保护野生资源,实现石胡荽人工栽培,我们以石胡荽嫩茎为材料进行了不定芽诱导与分化、试管苗生根、继代、移栽和定植研究。结果表明：MS＋6-BA 0.4mg/L＋NAA 0.1mg/L是石胡荽嫩茎直接诱导分化不定芽的理想培养基;MS＋NAA0.1mg/L＋GA3 0.5mg/L＋6-BA 0.6mg/L是石胡荽不定芽增殖分化培养的理想培养基;把不定芽下部切口浸入浓度为40mg/L的IAA溶液处理6min后,接种到N6＋NAA 0.2mg/L培养基上进行生根培养的方法是石胡荽不定芽生根培养的理想方法。试管苗的移栽和定植易成活,定植的试管苗保持了野生石胡荽的所有植物学性状。建立起石胡荽嫩茎无性系。     

黄曲霉毒素B1单克隆抗体的制备与鉴定

[目的]为黄曲霉毒素类生物毒素研究提供试验参考。[方法]黄曲霉毒素B1与人血清白蛋白耦联后免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行细胞融合,通过阳性株的筛选和克隆等步骤,制备了3株稳定分泌抗黄曲霉毒素B1的单克隆抗体,用酶联免疫吸附试验测定抗体的效价和特异性。[结果]成功地筛选出能够分泌抗黄曲霉毒素B1的单克隆抗体杂交瘤细胞株,制备出对黄曲霉毒素B1具有高亲合力、高特异性的单克隆抗体。[结论]为鲜奶及奶粉的快速筛检提供了技术支持。     

发根农杆菌介导的花生遗传转化体系的建立

[目的]为花生的转基因研究和白芦藜醇的生物技术生产奠定基础。[方法]利用发根农杆菌R1601分别侵染花生的子叶、叶片和茎段,诱导毛状根;利用PCR技术检测毛状根。[结果]叶片和茎段在发根农杆菌R1601侵染后产生毛状根,但叶片诱导率较高,其诱导率达65.6%,更适合作为转化外植体。毛状根除菌后,能在MS培养基上自主生长。PCR扩增表明,T-DNA序列整合进花生的基因组中。[结论]建立了发根农杆菌介导的花生遗传转化体系。     

胡杨叶总黄酮提取物的体内抗氧化活性研究

[目的]以胡杨叶子为研究对象,测定其总黄酮提取物的体内抗氧化活性.[方法]用超声辅助法提取胡杨叶中的总黄酮,并采用CCl4肝损伤小鼠模型测定胡杨叶中的总黄酮提取物的体内抗氧化活性.[结果]胡杨叶中的总黄酮提取物可以显著提高小鼠血清和肝组织中SOD、GSH -PX的活性,并降低它们的MDA含量.[结论]胡杨叶中的总黄酮提取物具有一定的体内抗氧化活性,为其进一步研究提供了参考依据.     

Prokaryotic Expression of Rubber Elongation Factor Gene and Preparation of Its Polyclonal Antibody

[Objective] The aim of this study was to prepare the recombination protein of rubber elongation factor and its polyclonal antibodies.[Method] The encoding gene of rubber elongation factor(REF)was amplified by RT-PCR,and cloned into the prokaryotic expression vector pDEST17 to transform into Escherichia coil BI2I-AI.The recombinant protein induced by L-Arabinose was purified by the affinity chromatography.As the immunogen,the recombination protein was used to immunize mice for preparing polyclonal antibodies,while ELISA and Western blot hybridization were used to detect the titers and specificity.[Result] The purified recombination protein of REF with high expression was used to immunize house mice for preparing polyclonal antibodies with high titer and specificity.The western blot hybridization showed that the antibody could recognize the natural REF from latex.[Conclusion] The recombination protein of REF was successfully obtained and the mouse anti REF antibody with high titer and specificity was prepared,which lays a basis for further studies on biological functions of rubber elongation factor and other membrane proteins in rubber particles.