白藜芦醇对肝癌SMMC-7721细胞的抑制作用

[目的]探讨白藜芦醇对人肝癌细胞SMMC-7721体外生长的影响和作用机制。[方法]利用MTT法检测不同剂量组的白藜芦醇对肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖的影响,通过Hoechst染色和荧光显微镜观察肝癌细胞SMMC-7721细胞核的形态学变化,流式细胞仪测定各浓度组白藜芦醇对肝癌细胞SMMC-7721作用的周期变化与凋亡分析。[结果]白藜芦醇对人体肝癌细胞SMMC-7721的增殖具有抑制作用,且有浓度和时间依赖性;在荧光显微镜下观察到典型的凋亡细胞形态特征;流式方法测定的结果显示,白藜芦醇阻滞肝癌细胞SMMC-7721于S期。[结论]白藜芦醇对人体肝癌细胞SMMC-7721生长具有抑制作用,使其细胞周期阻滞于S期并诱导其凋亡。     

盘花垂头菊中两种新型倍半萜类化合物诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡

[目的]为开发新型肿瘤治疗药物提供依据。[方法]通过单细胞电泳和流式细胞分析法等技术,研究2种从盘花垂头菊中分离的高含氧甜没药烯型倍半萜化合物(HOBS)对人肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用。[结果]2种HOBS处理48 h后,SMMC-7721细胞体积变小,且出现膜泡化和凋亡小体。单细胞电泳试验表明SMMC-7721细胞经不同浓度HOBS处理后,DNA碎片在电场中呈彗星状向阳极移动,且彗星样尾迹随药物浓度的增大而增长。HOBS能以剂量依赖的方式诱导SMMC-7721细胞凋亡。当2种HOBS浓度为8μg/ml时,细胞凋亡率分别达36.7%和38.9%。凋亡率随药物浓度的增大而升高,与对照组相比有显著差异,并出现典型的凋亡峰。2种HOB可使细胞内[Ca2+]i水平升高。[结论]HOBS能诱导SMMC-7721细胞凋亡。     

α-三联噻吩对斜纹夜蛾SL细胞线粒体膜电位及细胞周期的影响

【目的】研究α-三联噻吩(α-T)对斜纹夜蛾(Spodoptera litura)SL细胞线粒体膜电位及细胞周期的影响。【方法】通过Rhodamine123染色和流式细胞术(flow cytometry,FCM)研究α-T处理SL细胞24h和48h后细胞线粒体膜电位的变化,并通过PI染色和FCM,测定α-T处理SL细胞24h和48h后细胞周期各时相百分率的变化。【结果】光活化后的α-T处理SL细胞24h后,0.0625μg·mL-1浓度和0.1250μg·mL-1浓度处理组细胞线粒体膜电位的变化幅度不大,而0.5000μg·mL-1浓度处理组细胞线粒体膜电位明显升高,48h后高浓度处理组(1.0000μg·mL-1)导致线粒体膜电位明显去极化;处理24h后,低浓度(0.0625μg·mL-1)处理组细胞被阻滞于S期,而高于此浓度的光照处理组细胞被阻滞于G2/M期,48h后,浓度≤0.1250μg·mL-1的光照处理细胞被阻滞于G2/M期,而浓度0.1250μg·mL-1的光照处理组细胞被阻滞于S期。【结论】SL细胞经α-T处理后,细胞处于一系列复杂的动态变化中。当细胞本身不能扭转ROS造成的氧化损伤时,细胞线粒体膜电位和细胞周期时相即出现较大幅度的变化,这种变化决定着细胞的受损程度和细胞的死亡途径。     

α-三联噻吩对斜纹夜蛾SL细胞线粒体膜电位及细胞周期的影响#br#

【目的】研究α-三联噻吩（α-T）对斜纹夜蛾（Spodoptera litura）SL细胞线粒体膜电位及细胞周期的影响。【方法】通过Rhodamine123染色和流式细胞术（flow cytometry,FCM）研究α-T处理SL细胞24 h和48 h后细胞线粒体膜电位的变化,并通过PI染色和FCM,测定α-T处理SL细胞24 h和48 h后细胞周期各时相百分率的变化。【结果】光活化后的α-T处理SL细胞24 h后,0.0625 μg•mL-1浓度和0.1250 μg•mL-1浓度处理组细胞线粒体膜电位的变化幅度不大,而0.5000 μg•mL-1浓度处理组细胞线粒体膜电位明显升高,48 h后高浓度处理组（1.0000 μg•mL-1）导致线粒体膜电位明显去极化;处理24 h后,低浓度（0.0625 μg•mL-1）处理组细胞被阻滞于S期,而高于此浓度的光照处理组细胞被阻滞于G2/M期,48 h后,浓度≤0.1250 μg•mL-1的光照处理细胞被阻滞于G2/M期,而浓度＞0.1250 μg•mL-1的光照处理组细胞被阻滞于S期。【结论】SL细胞经α-T处理后,细胞处于一系列复杂的动态变化中。当细胞本身不能扭转ROS造成的氧化损伤时,细胞线粒体膜电位和细胞周期时相即出现较大幅度的变化,这种变化决定着细胞的受损程度和细胞的死亡途径。     

6种生物碱对斜纹夜蛾离体培养细胞的作用方式

通过倒置显微镜观察斜纹夜蛾细胞凋亡小体,采用MTT法测定细胞增殖抑制作用,并使用流式细胞仪检测细胞周期时相,研究了骆驼蓬碱、喜树碱、蓖麻碱、苦参碱、博落回碱和烟碱对斜纹夜蛾离体培养细胞系SL-1的作用方式和细胞毒理。结果表明:骆驼蓬碱5.0μg/mL、20.0μg/mL和喜树碱0.5μmol/L、1.0μmol/L处理后48～60 h,斜纹夜蛾离体培养细胞系SL-1表现出明显的细胞凋亡诱导作用,处理后12～48 h,明显抑制SL-1细胞增殖,流式细胞仪检测显示细胞阻滞于G2/M期;博落回碱和蓖麻碱5.0μg/mL、20.0μg/mL对SL-1具有细胞增殖抑制作用,以20.0μg/mL处理具有细胞周期时相阻滞作用,同样使细胞阻滞于G2/M期,但无明显的细胞凋亡诱导作用;烟碱和苦参碱在5.0μg/mL、20.0μg/mL对SL-1具有细胞增殖抑制作用。     

线粒体途径参与FTY720诱导白血病细胞凋亡的研究

为研究FTY720诱导K562细胞凋亡与线粒体途径的关系。体外培养人白血病K562细胞,用不同浓度FTY720处理细胞24 h,台盼蓝染色法检测K562细胞存活率;流式细胞术分析细胞凋亡和线粒体功能。免疫印迹技术检测线粒体相关蛋白Bcl-2和Bax的表达。收集FTY720处理48 h细胞,流式细胞技术检测细胞周期。结果表明:随FTY720浓度的增加,K562细胞的存活率下降,细胞凋亡增加,线粒体膜电位下降,促凋亡蛋白Bax表达明显增加。细胞周期分析发现,Sub G1期细胞增加,而S期和G2M期细胞减少。表明线粒体途径参与FTY720诱导K562细胞凋亡。     

马齿苋结合态多酚和自由态多酚抑制肝癌细胞HepG-2增殖及诱导细胞凋亡的研究

[目的]研究马齿苋结合态多酚和自由态多酚抑制肝癌细胞HepG-2增殖并诱导细胞凋亡的作用。[方法]将不同浓度马齿苋结合态多酚和自由态多酚与HepG-2细胞在体外培养,采用MTT检测细胞增殖活性;光镜观察细胞形态;流式细胞术分别检测细胞周期、细胞凋亡和线粒体膜电位;酶标仪检测Caspase酶活力。[结果]结果表明,马齿苋多酚对肝癌细胞HepG-2的增殖抑制作用和凋亡促进作用与一定范围的处理浓度和处理时间呈正相关,36h、0.4g·L-1处理条件下,马齿苋自由态多酚对HepG-2细胞的抑制率仅为15.7%,而马齿苋结合态多酚对HepG-2细胞的抑制率达到73.8%;马齿苋结合态多酚作用下,HepG-2肝癌细胞光镜下可观察到细胞出现明显的形态学改变,处理后细胞周期阻滞于S期,Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9酶活性也显著提高,并诱导细胞发生凋亡。马齿苋结合态多酚可能通过激活膜受体通路和线粒体介导的内源性凋亡通路诱导HepG-2细胞凋亡。     

姬松茸多糖诱导HepG2 细胞凋亡的线粒体通路研究

为探讨姬松茸多糖诱导HepG2细胞凋亡过程中线粒体膜电位和细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)的变化.以人肝癌细胞系HepG2细胞为对象,使用流式细胞仪检测姬松茸多糖对HepG2细胞凋亡及线粒体膜电位的影响,激光共聚焦显微镜检测HepG2细胞[Ca2+]i的变化.结果表明姬松茸多糖能显著诱导HePG2细胞凋亡,并不同程度降低HepG2细胞线粒体跨膜电位,升高细胞[Ca2+]i,造成钙稳态失衡.姬松茸多糖诱导HepG2细胞凋亡的机制与降低线粒体膜电位,造成细胞内Ca2+超载有关.     

JA_1对体外培养肝癌细胞线粒体膜电位及wt-p53基因表达的影响

为探索梯度浓度的JA1对体外培养人肝癌细胞株(HCC-9724)的细胞周期、细胞线粒体膜电位和wt-p53蛋白表达的影响.采用流式细胞技术和体外细胞培养技术,发现经JA1处理后的细胞培养样本中有明显的DNA低含量颗粒("亚G1期"峰),细胞周期各时相分布发生改变,细胞在G1被阻滞.细胞线粒体膜电位(ΔΨm)明显下降,且表现出剂量和时间效应关系.而wt-p53蛋白阳性细胞百分率则随时间延长而逐渐增加.JA1诱导了HCC-9724细胞线粒体膜电位的下降和细胞凋亡,而wt-p53蛋白表达的增强则是其诱导HCC-9724细胞凋亡的重要分子机制之一.     

西罗莫司酯化物对肾癌细胞系786-0的抑制作用及其机制初探

目的:研究西罗莫司酯化物(Temsirolimus)对肾癌细胞786-0增殖与凋亡的影响,并探讨分子作用机制.方法:采用显微镜形态学观察和MTT法检测细胞增殖抑制;流式细胞仪分析用药48h后肾癌细胞周期变化和细胞凋亡率;Western免疫印迹法检测P70S6K,4EBP-1蛋白水平表达变化.结果:西罗莫司酯化物作用786-0细胞的IC50=3.31μmol/L;给药48h后,细胞明显阻滞于G0/G1期,G2/M期细胞比例减少,细胞凋亡率增加;肾癌786-0细胞中P70S6K和4EBP-1蛋白的磷酸化水平明显下降.结论:西罗莫司酯化物能显著抑制肾癌细胞786-0的细胞增殖作用,阻滞细胞周期于G0/G1期且诱导细胞凋亡,其机制可能与P70S6K和4EBP-1磷酸化相关.     

EDTA调控下香根草对重金属铅胁迫的抗氧化酶特性

[目的]探讨外源化学物质EDTA对香根草在重金属Pb胁迫下的生理效应。[方法]采用溶液培养法,选取长势一致的香根草幼苗,用1/4 Hoagland营养液预培养1个月后进行Pb胁迫处理。Pb以Pb(NO)3盐溶液的形式加入,共设4个处理浓度:0、2、4、6mmol/L,EDTA设2个处理浓度:0.5、1 mmol/L,研究了EDTA调控下不同Pb2+浓度胁迫对香根草生理生化的影响。[结果]在单一Pb胁迫下,当Pb2+浓度<2 mmol/L时,香根草的SOD、POD、CAT活性较对照组高;当Pb2+浓度>2 mmol/L时,上述指标下降;随着Pb2+浓度的增加,SOD、POD、CAT的活性呈现先高后低的效应关系,叶片相对膜透性和丙二醛(MDA)含量明显升高。EDTA的加入能使Pb引起的植物细胞膜透性、膜脂过氧化水平得以恢复,还能使SOD、CAT活性有所升高。[结论]EDTA外源化学物质一定程度上缓解了Pb对香根草的毒害效应。     

玉米品种真实性鉴定中SSR技术体系的优化

[目的]优化玉米品种真实性鉴定中的SSR技术体系。[方法]以11份玉米骨干自交系为材料,通过对影响SSR扩增质量的Mg2+、dNTPs、引物、TaqDNA聚合酶的浓度等因素进行优化和比较,建立了适于玉米品种真实性鉴定的SSR标记技术体系,并以5个玉米杂交种为例,验证该体系在玉米杂交种真实性鉴定中的可行性。[结果]Mg2+浓度为2.5 mmol/L时,扩增效果最佳。dNTPs浓度为0.3 mmol/L时,扩增效果最好。引物浓度为0.2μmol/L较为适宜。TaqDNA聚合酶浓度为1.0 U时,扩增效果较好。优化后的PCR反应体系为:1×PCR缓冲液,2.5 mmol/LMg2+,0.3 mmol/L dNTPs,0.2μmol/L正、反向引物,1.0 UTaqDNA聚合酶,40 ng样品DNA,总体积25μl。[结论]该研究优化的SSR技术体系可以有效地对玉米杂交种进行真实性鉴定。     

信号分子N-乙酰高丝氨酸内酯(AHLs)诱导铜绿微囊藻细胞凋亡的研究

[目的]研究信号分子N-乙酰高丝氨酸内酯（AHLs）与铜绿微囊藻细胞凋亡的关系。[方法]以铜绿微囊藻为试验材料,采用5μmol/L AHLs处理铜绿微囊藻细胞,用DAPI染色后观察细胞凋亡的形态。[结果]AHLs在1μmol/L浓度下能诱导铜绿微囊藻的细胞凋亡,从而抑制铜绿微囊藻的生长和增殖。[结论]该研究结果为治理铜绿微囊藻水华爆发提供了科学依据。     

硒对姬松茸菌丝体酶活性的影响

[目的]探讨姬松茸在富硒过程中的生化机理。[方法]在姬松茸菌丝体培养基中加入浓度分别为03、0、609、01、201、50 mg/L的亚硒酸钠溶液,研究不同浓度硒对姬松茸菌丝体内过氧化物酶(POD)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性以及丙二醛(MDA)含量的影响,[结果]当硒浓度为150 mg/L时,姬松茸菌丝体POD活性最高,为241.53μmol/(g.min)。当硒浓度为60 mg/L,姬松茸菌丝体SOD活性和MDA含量最高。低浓度硒能显著提高姬松茸菌丝体内POD和SOD活性、明显降低MDA含量,增强菌丝体的抗氧化能力。高浓度硒则对姬松茸菌丝体有毒害作用。[结论]在培养富硒姬松茸菌丝体过程中,应选取适宜的硒浓度。     

信号分子N-乙酰高丝氨酸内酯（AHLs）诱导铜绿微囊藻细胞凋亡的研究

[目的]研究信号分子N-乙酰高丝氨酸内酯（AHLs）与铜绿微囊藻细胞凋亡的关系。[方法]以铜绿微囊藻为材料,采用5μmol/lN-乙酰高丝氨酸内酯（AHLs）处理铜绿微囊藻细胞后,用DAPI染色后观察细胞凋亡的形态。[结果]信号分子N-乙酰高丝氨酸内酯（AHLs）在1μmol/L浓度下能诱导铜绿微囊藻细胞凋亡,从而抑制铜绿微囊藻的生长和增殖。[结论]该研究结果为治理铜绿微囊藻水华爆发提供重要的科学依据和新颖的治理思路。     

高效氯氟氰菊酯对黄鳝的急性毒性作用

[目的]研究高效氟氯氰菊酯对黄鳝的毒性作用,为安全使用农药提供参考。[方法]将体长26.6~29.9 cm,体重17.68~21.51 g的黄鳝置于水簇缸内,采用常温静水试验法进行高效氯氟氰菊酯对黄鳝的急性毒性试验。按等对数间距设置0.055 2、0.038 1、0.026 30.018 10、.012 5μg/L高效氯氟氰菊酯的5个浓度组和1个对照组,观察黄鳝24、48、729、6 h的存活、中毒及死亡症状。[结果]随着药液浓度上升和浸泡时间的延长,各浓度组黄鳝的平均死亡率均逐步上升。至48 h时0.055 2μg/L浓度组黄鳝已全部死亡。对照组无死亡。高效氯氟氰菊酯对黄鳝的244、87、29、6 h的半致死质量浓度分别为0.036 2、0.032 00、.026 30、.021 3μg/L,安全质量浓度为0.002 13μg/L。[结论]药物的浓度与黄鳝的死亡情况密切相关,高效氯氟氰菊酯对黄鳝剧毒。     

Cr6+对皱叶留兰香生长及生理生化的影响

[目的]为皱叶留兰香野生蔬菜生产中预报金属铬的污染及消除其毒害提供理论依据。[方法]通过水培试验,研究不同浓度的重金属Cr6(+0、5、10、50和100mg/L)对野生蔬菜皱叶留兰香生长、生理生化特性的影响。[结果]当Cr6+浓度>5mg/L时,皱叶留兰香株高、叶面积、产量及叶绿素a/b比值随着Cr6+浓度的升高而明显下降。植株体内细胞膜透性和MDA含量随着Cr6+处理浓度的增加而逐渐增大,SOD活性随Cr6+浓度增到50mg/L时上升,达到峰值后下降;POD活性随Cr6+浓度的增加而下降。SOD对铬引起氧化胁迫具有相应的适应和抵抗能力,在皱叶留兰香生长抗铬胁迫防止膜脂过氧化起着重要作用。[结论]野生蔬菜皱叶留兰香对浓度为10mg/L的Cr6+污染胁迫有较强的适应性和防御能力。     

真瓣鳃目5种海洋贝类生物活性的研究

[目的]研究真瓣鳃目5种海洋贝类提取物的体外抗肿瘤和免疫调节活性。[方法]利用植物化学分析方法对这5种海洋贝类成分进行初步分离,将其乙醇提取液分为石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水4个不同极性部分,并对这些成分的抗肿瘤及免疫调节活性进行研究。[结果]5种贝类的乙醇提取物均有一定的抑制肿瘤细胞生长的作用。大多数组分对人早幼粒细胞白血病细胞HL-60有较强的抑制作用,但只有文蛤的正丁醇部分对人胃癌细胞BGC-823、四角蛤蜊的石油醚部分和文蛤的正丁醇部分对人肺癌细胞A549以及缢蛏的石油醚部分、杂色蛤仔的乙酸乙酯部分、杂色蛤仔和文蛤的正丁醇部分和青蛤的水提部分等组分对人肝癌细胞SMMC-7721有明显的抑制作用。5种贝类的大多数提取组分对小鼠脾淋巴细胞的增殖有调节作用,其中文蛤和缢蛏的增殖作用较强,文蛤的水提部分和石油醚部分对脾淋巴细胞的增殖率分别为670%和370%,缢蛏正丁醇部分对脾淋巴细胞的增殖率为500%,少数提取成分对免疫细胞的增殖具有抑制作用。[结论]真瓣鳃目5种海洋贝类提取物大多对肿瘤细胞的生长有一定的抑制作用,且对小鼠脾淋巴细胞的增殖也有较强的调节作用。