暴露于异丙隆中文蛤差异表达基因的研究

为了研究文蛤经异丙隆处理后引起的细胞基因表达变化,探索文蛤暴露于农药后分子水平上基因的开放、关闭或表达量的改变,以寻找和发现有价值的指示农药污染的生物标记物基因.在恒定温度(25℃)条件下驯化文蛤7 d,将驯化后的文蛤分为2组(每组20个),给药组文蛤暴露于添加除草剂异丙隆的海水中处理30 d,对照组文蛤暴露于天然海水中处理30 d,用酸性酚-硫酸氰胍-氯仿提取法纯化文蛤鳃总RNA,用4种锚定引物,以总RNA为模板在反转录酶的作用下合成cDNA第一链,以cDNA第一链为模板,在锚定引物和随机引物的作用下连续进行2轮PCR反应,用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离PCR产物,银染法显色.对聚丙烯酰胺凝胶电泳显示的差异条带进行回收,并对差异基因片段进行第2次扩增,经琼脂糖电泳后回收基因片段.结果共得到cDNA扩增片段约400条,其中有60余种基因片段的表达发生了明显的差异.在文蛤适应除草剂污染过程中有12个基因表达上调,有11个基因表达下调,有22个基因片段只在试验组表达,有23个基因片段只在对照组表达.基因差异片段可能与指示农药污染的生物标记基因的表达有关.     

缢蛏多糖的提取及抗氧化作用研究

以新鲜缢蛏的碎肉为材料,加水配制成一定比例的匀浆,利用超声波提取法对缢蛏碎肉匀浆进行多糖的提取。利用蒽酮—硫酸法对多糖得率进行计算。将得到的多糖粗品通过DEAE离子交换层析及G-75凝胶层析进一步分离纯化。通过邻苯三酚自氧化体系和Fenton体系测定所得样品的抗氧化能力。结果表明:利用超声波提取多糖的提取率为19.93%。多糖粗品通过DEAE离子交换柱,得到2个峰,峰1对超氧阴离子的清除能率为43.89%,质量浓度为1 mg/ml时,对.OH清除率为57.80%。峰2对超氧阴离子的清除能率为57.80%,质量浓度为1 mg/ml时,对.OH清除率为77.83%。将DEAE峰2进行G-75凝胶层析得到2个峰,峰1对超氧阴离子的清除能率为83.08%,质量浓度为1 mg/ml时,对.OH清除率为94.76%。峰2对超氧阴离子的清除能率为74.41%,质量浓度为1 mg/ml时,对.OH清除率为52.41%。     

真瓣鳃目5种海洋贝类生物活性的研究

[目的]研究真瓣鳃目5种海洋贝类提取物的体外抗肿瘤和免疫调节活性。[方法]利用植物化学分析方法对这5种海洋贝类成分进行初步分离,将其乙醇提取液分为石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水4个不同极性部分,并对这些成分的抗肿瘤及免疫调节活性进行研究。[结果]5种贝类的乙醇提取物均有一定的抑制肿瘤细胞生长的作用。大多数组分对人早幼粒细胞白血病细胞HL-60有较强的抑制作用,但只有文蛤的正丁醇部分对人胃癌细胞BGC-823、四角蛤蜊的石油醚部分和文蛤的正丁醇部分对人肺癌细胞A549以及缢蛏的石油醚部分、杂色蛤仔的乙酸乙酯部分、杂色蛤仔和文蛤的正丁醇部分和青蛤的水提部分等组分对人肝癌细胞SMMC-7721有明显的抑制作用。5种贝类的大多数提取组分对小鼠脾淋巴细胞的增殖有调节作用,其中文蛤和缢蛏的增殖作用较强,文蛤的水提部分和石油醚部分对脾淋巴细胞的增殖率分别为670%和370%,缢蛏正丁醇部分对脾淋巴细胞的增殖率为500%,少数提取成分对免疫细胞的增殖具有抑制作用。[结论]真瓣鳃目5种海洋贝类提取物大多对肿瘤细胞的生长有一定的抑制作用,且对小鼠脾淋巴细胞的增殖也有较强的调节作用。     

藻蓝蛋白生理活性及作用机制研究进展

就近年来藻蓝蛋白的生理活性尤其是抗癌活性、抗氧化、抗炎、免疫调节等方面的研究进展进行了综述。     

农杆菌素MI15的分离、纯化及分子量测定

放射土壤杆菌(Agrobacterium radiobacter)MI15菌株.属于生物Ⅰ型.在平皿培养时,能够产生农杆菌素MI15,能抑制葡萄根癌土壤杆菌的生长.采用透析和DEAE纤维素柱离子交换层析纯化制备了MI15菌株分泌的农杆菌素MI15.经HPLC分析,此制备物纯度较高,可达到结构分析要求.紫外吸收光谱分析显示,该物质在260nm和280nm处均无洗脱峰,故认为该物质不是核酸、蛋白类似物.经红外吸收和元素分析,初步认定它是一种小分子有机物,质谱测定结果显示,农杆菌素MI15的分子量为368.     

3种蛏类水提液的抗氧化作用研究

[目的]研究竹蛏、缢蛏、刀蛏的水提液体外对羟自由基(.OH)和超氧阴离子自由基(O2-.)的清除作用。[方法]采用Fenton体系测定3种蛏类水提液对羟自由基的清除作用,采用邻苯三酚自氧化体系测定3种蛏类水提液对超氧阴离子自由基的清除作用,采用DPPH体系对二苯代苦味酰自由基(DPPH.)的清除能力大小进行测定。[结果]3种蛏类水提液对羟自由基的清除能力大小为竹蛏>缢蛏>刀蛏;对超氧阴离子自由基的清除能力大小为竹蛏>缢蛏>刀蛏;对二苯代苦味酰自由基的清除能力大小为竹蛏>缢蛏>刀蛏。[结论]竹蛏、缢蛏的组织水提液抗氧化作用较强。     

缢蛏蛋白组分Y3的提取及抑癌活性研究

以新鲜缢蛏Sinonovacula constrzcta为材料,经25 mmol/L Tris-HCl(pH 7.5,含0.14mol/L NaCl)缓冲液提取缢蛏粗蛋白、透析、DEAE离子交换层析、Sepharose CL-6B凝胶层析,得到1种具有抑癌生物活性的缢蛏蛋白组分Y3.SDS-PAGE电泳测得该蛋白组分的分子量约为64 kD.采用MTT比色法检测Y3对4种肿瘤细胞增殖的影响.结果显示,Y3对Hela和BGC803细胞有明显的抑制作用,而对SKOV3和HepG2抑制作用不明显.此外,探讨了Y3对羟基自由基和超氧阴离子自由基的清除能力.结果显示,该蛋白组分清除自由基的能力很强,在浓度为100 μg/ml时,Y3对羟基自由基清除率达到92.71％.在3μg/ml下,对超氧阴离子自由基的清除率达到59.73％.