裂褶菌高产菌丝体发酵培养基的优化

【目的】探明裂褶菌高产菌丝体液体发酵培养基配方,为其菌丝体的批量生产及活性产物的开发提供依据。【方法】采用单因素及正交试验方法,通过摇瓶培养优化裂褶菌高产菌丝体发酵培养基中的碳源(葡萄糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖、淀粉)、氮源(牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、土豆浸粉、大豆蛋白胨)及生长因子(维生素B₁、L-谷氨酸、α-萘乙酸、油酸、吲哚丁酸)。【结果】筛选出最优碳源(蔗糖)、氮源(牛肉膏)、生长因子(L-谷氨酸)进行正交试验的3个浓度水平(30 g/L、40 g/L和50 g/L,6 g/L、8 g/L和10 g/L,1.5 mg/L、2 mg/L和2.5 mg/L),各因子菌丝体的产量分别为16.10～19.56 g/L,13.26～14.53 g/L,9.40～9.78 g/L;裂褶菌高产菌丝体发酵培养基的优化配方为蔗糖50 g/L+牛肉膏8 g/L+L-谷氨酸2 mg/L+MgSO₄·7H₂O 1 g/L+KH₂PO₄ 2 g/L,pH 6.0。在此条件下裂褶菌菌丝体产量达21.51...     

荷叶离褶伞液体发酵及生物酶法提取菌丝体多糖的研究

首次利用10 L发酵罐研究了荷叶离褶伞菌丝生长、胞内和胞外多糖产量,以及6种酶对发酵菌丝体多糖的提取效果。结果表明,在25℃、120 r/min,空气流量为200 L/h的条件下发酵,8 d时胞内多糖含量（63.1 mg/g干菌丝体）和胞外多糖产量（3.54 g/L）达最高,9 d时菌丝体产量（17.86 g/L）及胞内多糖产量（1.11 g/L）达最高,与摇瓶发酵相比,其产量均显著提高。参试的6种酶中,溶壁酶酶解处理菌丝体获得的多糖产量最高,而中性蛋白酶是最经济适宜的酶类,与不加酶的水提法相比,多糖提取率分别提高了459.29%和376.11%,中性蛋白酶酶解制备菌丝体多糖的适宜条件为:在1%酶用量下,30℃酶解2 h后,95℃提取2次,每次2 h。     

桑黄菌丝多糖的提取及多糖成分分析

以桑黄(Phellinus igniarius)菌丝体为材料,探索热水提取法提取桑黄菌丝体多糖的工艺,并分析桑黄多糖的主要组成成分.试验在100℃的恒温下,以多糖提取率为考察目标,分别对提取料液比(m/V,g:mL)和提取时间进行考察,利用硅胶薄层分析的方法,对桑黄多糖的成分做初步测定.热水提取的最优工艺为在水提温度为100℃条件下,料液比1∶45、浸提时间3.5 h,此时桑黄粗多糖提取率为3.99％;桑黄菌丝体多糖的单糖组成初步确定有D-葡萄糖、D-半乳糖、L-阿拉伯糖和D-乳糖.     

8种渗水利湿中药对桑黄生长及多糖合成的影响

以8种渗水利湿中药为试验材料,探讨其对桑黄生长及多糖合成的影响。结果表明:薏苡仁、茵陈蒿、香加皮能促进桑黄生长及胞外多糖合成,茵陈蒿对胞内多糖合成也有促进作用,而其他5种中药(5g.L-1)对桑黄生长无显著促进作用。薏苡仁、茵陈蒿添加量为1～13g·L-1时,可显著促进桑黄生长;当添加量为8g·L-1时,两者对胞外多糖合成有促进作用,桑黄多糖含量由(86.7±4.1)mg·L-1分别提高到(123.6±3.1)和(116.7±2.6)mg·L-1;当添加量为4g·L-1时,茵陈蒿也能显著促进桑黄胞内多糖合成,含量由(175.7±0.9)mg·g-1提高到(186.9±10.0)mg·g-1,而在其他浓度下均不能促进胞内多糖合成。香加皮添加量为1～4g·L-1时,能促进桑黄生长和多糖合成,超过该浓度则受到抑制。薏苡仁不仅能促进桑黄生长,而且其水提物和醇提物也有促进多糖合成的作用,故中药对桑黄活性产物合成的促进作用并不是作为有效氮源或碳源而起作用的。     

培养条件对桑黄菌丝体生物量的影响

在前期筛选出适宜液体发酵培养基配方的基础上,通过发酵条件的筛选优化桑黄发酵工艺。结果最适桑黄菌丝体生长的液体发酵条件为培养温度27℃,装液量30 mL/50 mL,种龄5 d,接种量10%,培养时间7 d。在最适条件下,桑黄菌丝体的产量高达26.52 g.L-1。     

桑树水提物对桑黄液态深层发酵的影响

为研究两种桑树原料(桑树粉和桑树枝)水提物对桑黄液态深层发酵的影响,对平板培养基桑黄菌丝体生长的关键影响因子进行筛选,得出桑树粉可作为生长因子;通过种子培养和发酵培养试验,探究桑树粉或桑树枝对桑黄液态发酵的影响。结果表明:3%桑树粉及2%桑树枝对桑黄菌丝体在种子培养基中的生长具有促进效果,且该条件下的菌丝体干重达到最大,分别为7.75 g/L和5.16 g/L,较空白对照分别提高了133.43%和55.42%。发酵培养基中,3%桑树粉促进桑黄菌丝体生长作用最显著,最大生物量达到17.15 g/L,较空白提高了16.43%,而桑树枝对桑黄菌丝体生长产生抑制作用。该两种桑树水提物对桑黄液态深层发酵的研究,能为桑黄液体发酵及规模化生产提供参考依据。     

分批与流加培养对萼状粒毛盘菌生物量和胞外多糖产量的影响

通过摇瓶实验对萼状粒毛盘菌(Lachnumcalyculiforme)生物量及其产胞外多糖的发酵条件进行研究;并在5L发酵罐中进行分批与流加培养,比较二者对萼状粒毛盘菌生物量及其多糖产量的影响.结果表明:在25℃时,粒毛盘菌生物量和产胞外多糖的最佳碳、氮源及其浓度为葡萄糖30g L-1、酵母膏5g L-1,pH值为6.0;10g L-1橄榄油能显著加速菌丝体的生长,而10g L-1大豆油能明显提高胞外多糖的产量;分批培养时粒毛盘菌的最大生物量和多糖产量分别为6.40和8.28g L-1,而在葡萄糖浓度低于5g L-1时进行流加培养可以显著提高粒毛盘菌的生物量和多糖产量,最大生物量和多糖产量分别为7.72和11.82g L-1.     

蝉拟青霉多糖反馈抑制的初步研究

在摇瓶中考察了蝉拟青霉发酵菌丝体生长、多糖合成的动态过程,探讨了蝉拟青霉多糖自身反馈抑制作用。在培养144 h后,生物量达到最大值31.07 g/L;培养168 h后,蝉拟青霉多糖达到最高浓度3.24 g/L,大致与生物量变化的趋势呈正相关。在摇瓶培养基中添加同源多糖,以浓度梯度实验法考察培养基中的同源多糖浓度对蝉拟青霉菌丝体及多糖产量的影响。结果表明:当培养基中添加的同源多糖浓度大于0.6 g/L时,蝉拟青霉菌丝体及多糖的产生明显受到抑制,随着培养液中同源多糖浓度的增加,反馈抑制作用逐渐增强,当浓度达到2.2 g/L时,蝉拟青霉菌丝体的生长和多糖的产生完全被抑制。     

药用真菌桑黄的液体发酵培养基的配方优化筛选研究

为探索名贵药用真菌桑黄摇瓶发酵培养基较优配方,在探索到不同碳源、氮源、无机盐种类和不同浓度单因素试验结果的基础上,分别选取玉米粉、黄豆粉、氯化钾作三因素三水平的L9(34)正交摇瓶培养试验.摇瓶发酵置于摇瓶转速135 r/min,28℃温度下培养9d,以桑黄菌丝体干质量为检测指标进行发酵培养基配方的优化筛选.初步获得桑黄摇瓶发酵培养基较优配方:玉米粉30 g/L,黄豆粉10 g/L,氯化钾2 g/L,KH2PO44g/L、MgSO42g/L、VB1 0.1 g/L,使桑黄菌在摇瓶发酵培养条件下其菌丝体干质量可达2.23 g/100 mL.初步获得桑黄摇瓶发酵培养基较优配方,为进一步的桑黄菌摇瓶发酵工艺研究奠定一定的基础.     

pH对桑黄 TH021菌株液体发酵抗氧化能力的影响

【目的】探索pH对桑黄TH021菌株液体发酵及其甲醇提取物抗氧化能力和主要活性成分的影响,为充分利用该菌提供依据。【方法】用5L机械搅拌发酵罐在pH 4.5,5.5,6.5和7.5下进行桑黄TH021菌株液体发酵,于培养第8天时获取滤液、菌丝体,测定其生长速率,分析甲醇提取物对DPPH自由基清除能力、亚铁离子螯合作用、超氧阴离子清除作用及主要活性成分含量,研究pH对桑黄TH021液体发酵甲醇提取物抗氧化能力及活性成分的影响。【结果】桑黄TH021菌株生长的最适pH值为6.5。在pH为6.5时,桑黄TH021菌株滤液甲醇提取物产量(LYC)达到最高,为(4.63±0.01)g/L;桑黄TH021菌株液体发酵菌丝体甲醇提取物对DPPH、超氧阴离子的清除作用,以及滤液甲醇提取物对亚铁离子的螯合作用均达到最高;菌丝体甲醇提取物总酚含量和黄酮类物质含量均达到最高,分别为(14.04±1.69)和(9.21±1.14)mg/g。在pH为7.5时,桑黄TH021菌株液体发酵滤液甲醇提取物多糖含量达到最高,为(66.10±1.96)mg/g。【结论】pH对桑黄TH021菌株液体发酵甲醇提取物抗氧化能力及主要活性成分有显著影响,因此要在适宜的pH下使用。     

营养条件对桑黄菌丝体生长及活性成分的影响

为获得更高产量的桑黄菌丝体和活性成分,采用单因素试验对鲍姆纤孔菌(Sanghuangporus baumii,桑黄)菌丝体及活性成分液体发酵营养条件进行研究。结果表明,最佳碳源和氮源分别为可溶性淀粉和大豆蛋白胨,菌丝体产量分别为18.68g/L和12.04g/L;pH 6.0和MgSO4分别为最佳pH和大量元素。麦芽糖、玉米粉、pH 4.0和KH2PO4最利于黄酮的产生。麦芽糖、牛肉浸膏最利于总多酚和总三萜的积累。但pH 4.0和pH 7.0则分别是总多酚和总三萜形成的最佳pH。不同营养条件对桑黄菌丝体生长及活性成分含量影响的研究结果可为桑黄应用开发提供参考依据。     

N+离子束注入诱变选育桑黄菌株的研究

[目的]研究N+离子注入诱变选育桑黄菌株,提高桑黄菌的产量。[方法]通过对N+离子注入诱变后桑黄孢子的存活率以及突变率的研究确定离子注入的最适剂量,诱变后用拮抗试验结合酯酶同工酶酶谱分析验证菌株发生突变,之后分别以菌丝形态、菌丝生长速度、液体发酵菌丝体生物量以及液体发酵胞外多糖产量为参数进行变异菌株的筛选。[结果]确定了离子注入诱变桑黄适宜参数:注入剂量2.00×1016ions/cm2,注入能量20 KeV。得到1株高产桑黄菌株PI 126,其生物量和多糖产量分别为23.7和7.6 g/L,比出发菌株相应产量显著提高。经平板传代,10代后变异菌株的遗传性状较稳定,无明显回复突变。[结论]低能离子束注入技术用于桑黄育种是可行的。     

不同前体对黄芪悬浮培养细胞中黄芪多糖积累的影响

[目的]研究苯丙氨酸、草酸和油酸等前体对黄芪细胞生长和黄芪多糖合成的影响.[方法]在细胞培养的第O天,向细胞悬浮培养液中加入3种前体,测定细胞干重增殖倍数和黄芪多糖的含量.[结果]添加2 mmol/L的草酸可以明显地促进黄芪细胞中黄芪多糖的积累,其含量为对照组的1.80倍;较低浓度苯丙氨酸能有效促进黄芪细胞中黄芪多糖的合成;当苯丙氨酸浓度为1.Ommol/L,黄芪多糖的含量达最大,为33.429 mg/g,为对照组的1.70倍;当油酸添加浓度由0.1mmol/L增加至2 mmol/L时,细胞中黄芪多糖的含量逐渐提高;2 mmol/L的油酸使黄芪多糖的含量达37.565 mg/g,为对照组的1.91倍.[结论]前体的添加可有效促进黄芪悬浮培养细胞中黄芪多糖的积累.     

疣孢霉粗多糖激发的3种真菌菌丝体蛋白质及酶变化

    以疣孢霉发酵液粗多糖作为激发子,分析其对云芝、粗柄侧耳和花脸香蘑生物量、菌丝体蛋白质含量及酯酶变化情况的影响,并测定发酵液纤维素酶活性.结果表明,疣孢霉粗多糖能诱导菌丝体产量上升3.2%～86.2%;激发子浓度达到800 μg·mL-1时,云芝、花脸香蘑和粗柄侧耳菌丝体蛋白质含量较对照分别增加63.76%、47.73%和39.03%,发酵液纤维素酶活分别为对照的4.98倍、2.87倍和1.63倍.电泳结果显示,3种供试食用菌菌株菌丝体酯酶谱带随着激发子浓度的变化,明显出现条带增加或缺失,酶活强度也发生变化,表明病原真菌多糖对真菌菌丝体也具有类似激发子的作用.     

桑黄液体发酵菌丝体多糖提取条件的优化

通过单因子试验和正交试验,对桑黄液体发酵菌丝体多糖提取方法进行研究,结果表明:热水提取法提取桑黄菌丝体多糖的最适料水比为1:50,提取温度为70℃,浸提时问为2h,乙醇终浓度为80%,多糖得率为3.48%.     

金耳菌丝体液体深层发酵和多糖提取研究

[目的]研究金耳菌丝体液体深层发酵的最佳培养条件及其多糖提取工艺。[方法]通过培养基筛选和培养条件优化确定了金耳菌丝体液体深层发酵的最佳培养条件,通过比较分析研究了碱提取法和热水浸提法对金耳多糖的提取效果。[结果]以玉米粉、麸皮和红薯粉作碳源时,金耳菌丝体产量分别为19．1、13．2和10．9g／L。当玉米粉的添加量为1％、2％、3％、4％、5％时,金耳菌丝体产量分别为8．6、17．1、19．5、15．4和7．2g/L。以蛋白胨、酵母膏、尿素和硫酸铵作氮源时,金耳菌丝体产量分别为18．9、10．3、6．7和5．2g/L。当蛋白胨的添加量为0．2％、0．4％、0．6％、0．8％、1．0％时,金耳菌丝体产量分别为10．1、15．7、23．0、20．3和18．7g/L。碱提取法提取的粗多糖和多糖分别比热水浸提法的提高了6．9％和36．4％。[结论]该试验为金耳菌丝体的生产及其多糖的提取提供了技术支持。     

液体悬浮法生产猪苓有效成分的初步研究

以甾体含量为主要指标,以菌丝体生长量及多糖含量为辅助指标,对液体悬浮法生产猪苓甾体所需的培养条件进行了初步研究,结果表明:适合猪苓菌丝甾体化合物积累的最佳液体培养条件为:葡萄糖28.0 g.L-1,酵母膏4.0 g.L-1,磷酸二氢钾1.00 g.L-1,硫酸镁1.00 g.L-1,维生素VB10.1 g.L-1,1%羟甲基纤维素钠10 mL.L-1;在此培养基中每瓶所得菌丝体干重得率为2.050 g,干菌丝体及发酵液中甾体含量分别达到3.864 mg.g-1和37.68 mg.L-1;同时在此培养条件下,菌丝体和发酵液的猪苓多糖含量分别为11.542 mg.g-1和58.85 mg.L-1。     

钙离子和锌离子对金针菇菌丝生长的影响

在培养基中加入不同质量的Ca~(2+)和Zn~(2+),研究其对金针菇菌丝生长、生物量以及多糖含量的影响。结果表明,固体培养时,Ca~(2+)浓度为1 000～9 000 mg/L促进菌丝的生长,当浓度超过12 000 mg/L时抑制菌丝的生长;Zn~(2+)浓度为10～100 mg/L时促进菌丝的生长,当Zn~(2+)浓度超过150 mg/L时抑制菌丝的生长。液体培养时,Ca~(2+)浓度为5 000 mg/L时,菌丝体多糖含量最多,相比对照组提高139.2%;Zn~(2+)浓度为6 mg/L时,菌丝体多糖含量最大,相比对照组增加141.8%。     

铆钉菇菌丝体液体培养条件及产胞外多糖的研究

[目的]为食用菌液体培养和胞外多糖的研究提供基础。[方法]研究铆钉菇菌丝体的最佳液体培养条件,并对其产胞外多糖的情况进行测定。[结果]铆钉菇菌丝体深层发酵适宜的培养基组成为:蔗糖20 g/L、酵母浸膏2 g/L、K2HPO40.5 g/L、MgSO40.5g/L、Vc 0.001 g/L,适宜培养温度28℃,pH值7.0。铆钉菇菌丝体液体培养7 d,菌丝体干重为28.0 g/L,胞外多糖产量为3.27 g/L。[结论]铆钉菇菌丝体液体培养可很好地生长,并产生较多的胞外多糖。     

谷氨酰胺高效酶法转化条件研究

[目的]研究不同影响因素及工艺条件对酶法生产L-谷氨酰胺的影响。[方法]以安琪酵母为试验菌种,在YEPD培养基中28℃培养24h后进行气流干燥处理,然后进行谷氨酰胺的合成反应,之后测定与计算葡萄糖（谷氨酸）的量、谷氨酸的消耗量以及谷氨酰胺的生成量。[结果]在磷酸盐浓度为0.15mol／L,酶液浓度在80U／ml时,谷氨酸加入量为25g／L,谷氨酰胺的产量最大,提高葡萄糖加入量会增加谷氨酰胺的转化,但利用率明显降低。通过正交试验发现,优化条件与单因素试验结果一致,谷氨酸添加量是最显著的因素,在优化条件下,谷氨酰胺产量达26.8g/L,转化率为91.2％。采用葡萄糖、谷氨酸的分批补料工艺,得到谷氨酰胺的最高产量为33.8g/L。[结论]优化酶法合成谷氨酰胺的工艺条件能够有效降低生产成本。