药用植物马蔺的内生真菌分离及其抑菌活性的研究

[目的]研究药用植物马蔺内生真菌资源的多样性及其抑菌活性特征。[方法]通过组织块法对内生真菌进行分离,并选择小麦全蚀病菌、枸杞黑果病菌、番茄灰霉病菌、黄瓜枯萎病菌和黄瓜立枯病菌5种植物病原真菌和枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌4种细菌作为指示菌,采用对峙法和改进的菌块法测定抑菌活性。[结果]从马蔺不同组织器官中分离出32株内生真菌,以根部的最多,茎叶次之;经形态学初步分类鉴定其属于3个目,3个科,4个属。其中,有22株内生真菌对2种或2种以上的植物病原真菌指示菌有不同程度的抑制作用,占菌株总数的68.8%;有12株内生真菌对2种或2种以上的供试细菌指示菌具有不同程度的抑制作用,占分离菌株总数的37.5%;有7株内生真菌对3种以上的植物病原真菌指示菌具有明显的抑制作用,占菌株总数的21.9%;有2株内生真菌对2种供试细菌指示菌有明显的抑制作用,占分离菌株总数的6.3%。马蔺内生真菌对供试植物病原真菌指示菌和供试细菌指示菌有明显抑制作用,且抑制植物病原真菌的范围较宽;2株高活性菌株来源于马蔺叶部,对5种供试真菌指示菌具有明显抑制作用;2株高活性菌株来源于马蔺根部,对2种供试细菌指示菌具有明显抑制作用;1株高活性菌株对4种供试真菌指示菌和1种供试细菌指示菌有明显抑制作用。这5株高活性内生真菌菌株属于束丝菌属、镰孢霉属、梭孢霉属和组丝核菌属。[结论]药用植物马蔺具有丰富的内生真菌资源,并具有明显的抑菌活性。     

云南红豆杉内生菌的分离及拮抗植物病害菌的筛选

[目的]为从与红豆杉共生的内生菌或其代谢物中寻找其他新型防治植物病虫害药物提供基础依据。[方法]以云南红豆杉为试验材料,从其根、茎、叶中分离内生菌;以棉花枯萎病、小麦赤霉病、番茄叶霉病等11种病原真菌作为供试菌株,研究红豆杉内生菌的抗菌活性,从中筛选出有较高抗菌活性的内生菌。[结果]从云南红豆杉根、茎、叶中分离出内生菌152株,其中细菌80株,真菌48株,放线菌24株;从中筛选出了有较高抗菌活性的11株内生细菌、5株内生放线菌和3株内生真菌,分别占分离得到的内生细菌、内生放线菌和内生真菌总数的13．75％、37．50％和20．83％。[结论]云南红豆杉组织内存在丰富的内生菌,不同组织内生菌的数量、种类有一定差异,在具有抑菌活性的菌物中,放线菌占的比例最高。     

月腺大戟内生菌分离纯化及抑菌活性筛选

从月腺大戟的根、茎、叶中分离出内生菌41株,细菌18株、真菌23株。7株供试菌用滤纸片法分别对内生菌发酵液进行了抗菌活性的研究。结果表明：月腺大戟内生菌对7种供试菌有一定的抑菌活性,内生真菌与内生细菌的抑菌活性存在差异,其中YJX1、YJX6和YJZ15对供试菌具有普遍抑菌作用。     

宁夏野生苦豆子中内生菌的分离及拮抗细菌的筛选

[目的]筛选从宁夏苦豆子中分离出的有生物拮抗活性的内生菌菌株。[方法]采用平板划线法从不同组织中分离内生菌,采用对峙生长法将分离得到的内生细菌对宁夏当地作物的病原真菌做拮抗试验。[结果]分离自宁夏各地的苦豆子内生菌在种类上和数量上都有差异,并且苦豆子不同组织内生菌的种类和数量也有差异;从苦豆子各种组织中分离得到180株内生菌,其中10株内生细菌对5种宁夏当地植物病原真菌有拮抗作用,并且抗逆性较高。[结论]该试验从宁夏各地的野生苦豆子不同组织中分离出内生菌,并筛选出有生物拮抗活性的内生细菌菌株,对于合理开发苦豆子资源具有重要意义。     

苍耳提取液与植物内生真菌抗菌活性研究

[目的]为研制高效、低毒、低残留的新型杀菌剂提供理论依据。[方法]采用生长速率法和抑菌圈法,分别以水稻纹枯病菌等6种植物病原真菌和大肠杆菌等3种病原细菌为供试菌种,对苍耳各器官(根、茎、叶、果)提取液、植物内生真菌MG4-23的发酵液及菌丝体提取液进行抑菌活性测定。[结果]苍耳各器官提取液、植物内生真菌发酵液及菌丝体提取液均有抑菌作用。苍耳的丙酮提取液抑菌活性要好于乙醇提取液。苍耳中抑菌活性最高的器官是叶,对6种供试病原真菌的抑制率均在47.8%以上,对3种病原细菌的抑制直径均在0.5 cm以上。植物内生真菌发酵液的抑菌活性也很明显,对6种供试病原真菌的抑制率均在68.1%以上,对3种病原细菌也具有抑制性。苍耳根和植物内生真菌菌丝体提取液的抑菌活性也较明显。[结论]苍耳和植物内生真菌MG4-23均具有较大的开发利用价值。     

具杀虫活性雷公藤内生菌的分离与筛选

以卫矛科植物雷公藤的根、茎、叶为材料分离得到内生菌183株,其中真菌111株,放线菌23株,细菌49株。雷公藤植株的不同组织部位的内生菌数量有较大的差异,雷公藤根中分离得到的内生菌最多(89株),占总数的48.63%,叶部次之(72株),占总数的39.35%,茎部分离得到的内生菌最少(22株),占总数的12.02%。以卤虫、蚊幼及蚜虫为试虫,对183株内生菌的杀虫活性进行筛选,得到3株对蚜虫具有较高毒杀活性的菌株。其中菌株11-6-76的胞内和胞外代谢物均具有较高的杀蚜活性,蚜虫的死亡率分别为78.64%和70.75%;菌株11-3-37和12-2-47的胞内代谢产物提取物对蚜虫的毒杀活性较高,蚜虫死亡率分别为82.74%和76.97%。菌株11-3-37、11-6-76和12-2-47胞内代谢产物粗提物对蚜虫的LC_(50)分别为34.8mg/mL、31.2mg/mL和46.4mg/mL。     

鱼腥草内生真菌的分离、鉴定及抑菌活性研究

[目的]分离和鉴定鱼腥草中的内生真菌,并检测其发酵液抑菌活性。[方法]用组织块法分离内生真菌,通过形态分类学方法进行鉴定,并用滤纸片法对4种指示菌进行体外抑菌试验。[结果]从鱼腥草各器官中共分离得到13株内生真菌。其中,根中1株,茎中10株,叶中2株;经形态鉴定,其分别属于子囊菌纲的毛壳菌属和半知菌亚门的曲霉属、镰孢属、茎点霉属及丝核菌属;12株内生真菌发酵液对至少1种指示菌有抑菌活性,而2株内生真菌的发酵液具有强抑菌活性。[结论]鱼腥草中存在具抑菌活性的内生真菌,可作为筛选抑菌活性物质的新资源。     

细菌在蚜虫生物防治中的研究初报

从死亡蚜虫样品中分离得到一批细菌菌种,对这些菌种分离纯化后进行不同细菌对蚜虫的杀虫效果筛选试验。结果从中发现并鉴定出两株蚜虫高致病菌KI3[粘质沙雷氏菌（Serratia marcescens）]和KI63[阴沟肠细菌（Enterobacter cloacae）],这2株菌株对蚜虫均有明显的杀灭作用。研究结果为利用微生物控制植物虫害提供了参考。     

月季内生真菌分离及抗黑斑病活性菌株的筛选

[目的]分离并筛选具有抗黑斑病活性的内生真菌。[方法]从陕西省西安、咸阳、宝鸡、渭南4个地点采集各种类型的健康月季品种,从茎和叶组织中分离内生真菌并通过转接2～3次进行纯化,采用改良的打孔法筛选对黑斑病病原菌有拮抗作用的内生真菌。[结果]共分离获得月季内生真菌67株,其中咸阳采集的样品内生菌的定殖率和分离率最高;月季的茎段内生真菌的定殖率和分离率明显高于叶片。从67株内生真菌中筛选出3株具有抗黑斑病活性的内生菌菌株,并且全部来自宝鸡。[结论]为进一步筛选生防真菌的候选菌株及环境友好型真菌生物防治奠定了基础。     

山苍子内生细菌的分离及抑菌活性研究

[目的]探讨山苍子内生细菌的抑菌活性及生防效果。[方法]从山苍子的根、茎、叶和果中分离出内生细菌52株(其中根23株、茎8株、叶7株、果实14株),采用对峙生长法检测其对植物病原真菌的抑制效果。[结果]5株来自叶和果的内生细菌分别对杨树溃疡病菌、小麦纹枯病菌、番茄灰霉病菌、小麦赤霉病菌、苹果炭疽病菌和辣椒疫霉病菌有较好的拮抗作用。田间试验结果表明,1株16S rD-NA序列(序列号为JN252095)与Bacillus megaterium最为接近的山苍子叶内生细菌对辣椒疫霉病的防治效果较好,且可促进辣椒植株生长。[结论]山苍子内生细菌作为农作物生防细菌效果明显,值得进一步研究。     

夹竹桃提取物的棉蚜毒杀活性研究

[目的]研究夹竹桃提取物的灭蚜活性。[方法]选用95％乙醇、石油醚和水分别萃取夹竹桃叶和树皮的活性成分,配制成1．2、0．6、0．3mg／ml3种浓度对棉花蚜虫进行室内杀虫活性研究。[结果]夹竹桃的树皮和树叶乙醇提取物对棉蚜具有较强的毒杀作用。叶片的乙醇提取物对棉花蚜虫的杀伤性极强。[结论]夹竹桃提取液具有一定的杀虫活性,这为利用植物提取液来毒杀棉花蚜虫提供了理论依据。     

番茄内生细菌的分离及其促生活性研究

[目的]探讨番茄内生细菌的促生活性。[方法]从番茄的不同组织内分离内生细菌,研究其对番茄种子萌发及幼苗生长的促生作用,并对具有促生活性的细菌进行初步鉴定。[结果]从番茄的根和茎中共分离出59株内生细菌,其中4株对番茄种子的萌芽及幼苗生长有显著的促生作用,具有一定的促生潜能。[结论]从番茄植株体内筛选到具有促生活性的内生细菌,为开发和利用促生细菌提供了良好的基础。     

蛇足石杉体内抑制乙酰胆碱酯酶活性物质的内生真菌的分离

[目的]从蛇足石杉体内分离筛选出具有体外抑制乙酰胆碱酯酶活性的内生真菌。[方法]取野外采集的蛇足石杉的叶、茎和根进行表面消毒后接种于PDA培养基,分离出内生真菌后进行摇瓶发酵,超声提取其发酵产物,以DTNB法检测其发酵产物在体外抑制乙酰胆碱酯酶的活性。[结果]从根、茎、叶中分离得到194株内生真菌,在马铃薯葡萄糖液体培养基(PDB)中发酵后,对内生真菌发酵提取液进行体外AChE抑制活性检测;共有31株内生真菌显示出体外AChE抑制活性,抑制活性较强的有13株,抑制率在50.2%～80.5%。其中从蛇足石杉茎部位分离得到9株,叶部位分离得到4株。[结论]从蛇足石杉体内可分离出内生真菌,该内生真菌的发酵产物在体外有较强的抑制乙酰胆碱酯酶活性,这可能是寻找乙酰胆碱酯酶抑制药物的有效途径之一。     

油菜内生真菌的分离及其抑菌活性的研究

[目的]探讨油菜内生真菌的抑菌活性。[方法]从油菜的不同组织内分离内生真菌,研究它们对植物病原真菌的抑制作用,并对活性菌株进行了初步鉴定。[结果]从油菜的根、茎、叶中共分离出12株内生真菌,其中2株(WG5和WJ2)对病原真菌均有不同程度的抑制作用,尤其对油菜菌核病菌和小麦黄斑叶枯病菌的抑制率最高,而且其发酵滤液经高温处理后活性不丧失,对病原真菌仍有较强的抑制作用,具有一定的生防潜能。[结论]油菜内生真菌可以产生具有抑菌活性的次生代谢产物,为新型活性物质的筛选提供新的途径。     

日本夹竹桃化学成分及细胞毒活性研究

［目的］研究日本夹竹桃枝的化学成分,并对分离得到的化合物进行细胞毒活性测定。［方法］采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱等方法对日本夹竹桃进行分离纯化,根据理化性质和波谱数据进行结构鉴定。［结果］从夹竹桃枝中分离并鉴定了4个化合物,分别为东莨菪内酯（1）、对羟基苯乙酮（2）、白桦脂酸（3）和齐墩果酸（4）。化合物1～3均为首次从日本夹竹桃中分离得到,化合物3、4对人体肺癌细胞模型VA-13和人体肝癌细胞HepG2有一定的细胞毒活性,化合物3显现出一定的抗癌活性。［结论］该研究结果为日本夹竹桃的临床应用提供理论依据。     

何首乌植物内生真菌多样性的初步研究

[目的]对药用植物何首乌（Polygonum multiflorun Thunb.）不同部位内生真菌进分离和分类鉴定。[方法]采用内生真菌常规分离法对健康何首乌块根、茎和叶的内生真菌进行分离和鉴定。[结果]从何首乌根、茎、叶中分别分离到植物内生真菌24、28、18株,共计70株,其形态经初步鉴定分属2纲4目6科31属,以交链孢属（Alternariasp.）和镰孢霉属（Fusariumsp.）为优势属。[结论]何首乌不同部位内生真菌的数量、分布和种群存在差异。     

夹竹桃挥发物的化感作用研究

以夹竹桃挥发物为化感物质,对稗草、三叶鬼针草和青葙3种杂草种子进行了化感作用研究。研究表明,夹竹桃的茎叶在密闭系统中产生的挥发性物质以及经水蒸气蒸馏法所得的夹竹桃的挥发油对稗草、三叶鬼针草和青葙的幼苗生长具有明显抑制作用。结果显示,夹竹桃可能会通过挥发物对杂草产生化感作用。     

夹竹桃叶提取物的抑菌作用研究

[目的]研究夹竹桃叶提取物的抑菌效果。[方法]选用不同的提取溶剂提取夹竹桃叶的活性成分;运用二倍稀释法,以大肠埃希氏菌、普通变形杆菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、八叠球菌为供试菌种,对夹竹桃叶的不同提取溶液抑菌作用进行了抑菌试验。[结果]夹竹桃叶对6种供试菌均有不同程度的抑制作用,对金黄色葡萄球菌的抑制作用最强,其他细菌对其敏感性较弱。其中以浓度70%乙醇提取液的效果最佳。[结论]夹竹桃叶不同提取液的抑菌效果存在差异,浓度70%乙醇提取液的抑菌作用最强。     

夹竹桃水提液对变色夜蛾幼虫的毒杀效果

[目的]探究夹竹桃水提液对变色夜蛾幼虫的毒杀效果。[方法]通过对变色夜蛾幼虫进行添食试验,研究了夹竹桃水浸液对变色夜蛾幼虫的毒杀效果。[结果]夹竹桃干叶量的1/20～1/200倍水浸液对变色夜蛾幼虫有较好的毒杀作用,添食死亡率均达到100%。[结论]为研发高效、环保、低碳的新型植物农药提供了参考。     

夹竹桃提取物对蚯蚓的毒害作用

[目的]探究夹竹桃不同部位提取物对赤子爱胜蚯蚓的毒性效应。[方法]采用索式提取法制备夹竹桃乙醇提取物,配制不同浓度提取物溶液通过不同方式处理蚯蚓,进行蚯蚓中毒反应及死亡率研究。[结果]夹竹桃的茎皮和叶乙醇提取物对蚯蚓具有毒害作用,新鲜茎皮的毒力较叶强,干燥后毒力减弱。鲜茎皮乙醇提取物浓度≤2.0 mg/m L时,蚯蚓的死亡率较低,可正常生活。[结论]夹竹桃对蚯蚓的毒害作用主要集中在茎皮中,制作植物源农药时可以优先选用。茎皮提取物浓度为1.0~2.0 mg/m L可起到杀虫的效果。