濒危植物四合木(Tetraena mongolica Maxim)的离体培养组织学观察及再生植株的研究

本文以四合木(Tetraena mongolica Maxim)种子萌发12d的无菌苗为外植体进行离体培养，通过在MS 2，4-D0．5mg／L 6-BA0．1mg／L培养基上获得愈伤组织产生。然后对MS 2，4-D0．1mg／L 6-BA0．25mg／L 500mg／L水解酪蛋白培养基上获得胚状体及试管苗并进行了组织学观察，结果表明：胚状体来源于多种发育形式，它由单细胞、愈伤组织经不均等或均等分裂形成的细胞后代继续发育为各级胚至试管苗。     

魔芋再生植株形态发生途径的细胞组织学观察

本研究发现魔芋再生植株的形态发生途径除愈伤组织发生不定芽生根外，还有愈伤组织发生不定根再生芽、发生小块茎出芽、形成体细胞胚和块茎休眠芽萌发直接成苗等４种．还发现魔芋体细胞胚的发生不同于植物组织培养中体细胞胚形成的一般情况，它有时发生在芽苞片切口处和愈伤组织表面，有时发生在愈伤组织内部，前者由多细胞的拟分生组织发育而成，后者起源于单个胚原始细胞．胚原细胞分裂产生二细胞原胚，之后无序分裂发育形成具有明显珠芽结构的块茎原始体．     

继代培养时间对抗性黑松体胚发生的影响

以继代培养0.5、1.5 a和3.5 a的抗性黑松37#家系胚性愈伤组织为材料,观察不同培养时间胚性细胞的形态和体胚成熟的过程,并对愈伤组织的增殖率、每克愈伤形成的体胚数量及体胚萌发率和植株成活率进行测定。结果表明:在继代培养过程中,胚性胚柄细胞团(ESM)结构逐渐疏松,胚柄细胞呈现缩短、增粗的现象;培养时间对抗性黑松愈伤组织的增殖、分化、体胚萌发及植株成活率均有显著影响。3种不同培养时间愈伤组织的增殖率分别为200.37%、182.47%和111.63%,每克胚性愈伤组织形成成熟体细胞胚分别为77、31、5个,萌发率分别为84.43%、51.10%、11.13%;植株成活率分别为73.00%、50.00%、6.70%,均呈下降趋势;3种愈伤体胚成熟的时间也存在显著差异,继代培养时间越长,体胚分化成熟过程越慢,愈伤组织形成子叶胚的时间最短为46 d,最长为74 d。因此,抗性黑松胚性愈伤组织在继代培养过程中胚性逐步降低,体胚发生和植株再生能力下降,短期培养的胚性愈伤组织(0.5 a)为抗性黑松体胚发生较为理想的初始材料,且愈伤组织继代培养时间不宜超过1.5 a。     

籼稻离体胚培养中体细胞胚胎发生的研究

成熟稻胚在含2,4-D的MS培养基上产生胚性愈伤组织以及在胚性愈伤组织表面形成许多瘤状突起的原胚状体,组织学研究表明在诱导培养的不同时期,胚性愈伤组织的细胞分裂产生单核胚性细胞、2细胞、4细胞、多细胞及球形胚。随后移到不含2,4-D的分化培养基上培养,胚性愈伤组织产生与水稻合子胚结构相似的成熟体细胞胚状体。结果表明:2,4-D是胚性愈伤组织诱导的必要激素,但抑制球形胚的发育成熟。不同激素处理结果:Br明显抑制植株再生。研究生理生化指标结果表明:在愈伤组织生长分化过程中不同激素处理Br抑制氧化物酶活性;体细胞胚状体在形成、成熟阶段,酶活性及酶带相应增强和增多;当胚状体萌发形成植株时,酶活性及酶带相应下降和减少,随诱导培养时间延长植株再生率降低。     

棉花组织培养植株再生技术的研究

以陆地棉珂字２０１３日龄无菌苗的下胚轴为外植株，建立了棉花体细胞胚发生和植株再生的培养程序。大多数激素或其组织均能诱导获得胚性愈伤组织和非胚性愈伤组织，其中ＴＤＺ的诱导效果较好，正确选择胚性愈伤组织进行继代培养，有利于提高胚的获得率和缩短培养周期；液体悬浮培养是获得大量发育同步胚的关键技术。胚的萌发有３种类型，且受激素的调控，其中０．１ｍｇ／ＬＮＡＡ最有利于体细胞胚萌发成苗。     

华重楼种子休眠解除及愈伤组织诱导

为提高华重楼种子的萌发率和建立其愈伤组织培养体系,研究不同处理方式对种子萌发以及不同激素配比对华重楼植物幼苗的子叶、胚轴和胚根外植体进行愈伤组织诱导的影响。结果表明,去外种皮的华重楼种子经适宜浓度的H2 O2与GA溶液处理后,可有效解除种子的休眠,从而大大缩短种子的萌发时间。选取华重楼植物的胚根、胚轴和子叶为外植体进行愈伤组织诱导培养60 d,以子叶为外植体可诱导产生出愈伤组织,其诱导率为22．35％,而胚轴和胚根外植体不能诱导出愈伤组织。     

薇甘菊组织培养及体细胞胚胎发生的研究

研究了4种外植体、10种不同浓度激素组合对薇甘菊(Mikania micrantha H.B.K.)离体再生的影响,并对胚性愈伤组织中的体细胞胚发生发育过程进行了组织细胞学观察.结果表明,所用不同浓度激素组合的培养基均能诱导薇甘菊外植体产生愈伤,培养基以MS+6BA 1 mg/L为最宜;不同种类的愈伤组织再分化结果有明显差异,生长良好的胚性愈伤组织转入分化培养基后可诱导体细胞胚的发生.薇甘菊体细胞胚胎发生的形式为单细胞内起源.体细胞胚起源于胚性愈伤组织的胚性细胞,胚性细胞经过一次不均等分裂产生两个细胞,即胚细胞和胚柄细胞.然后依次经过具胚柄的多细胞原胚,再经过球形胚、心形胚、鱼雷胚阶段,发育成具有子叶的成熟胚状体,然后长成为再生植株.     

大蒜体细胞胚发生及不同发育阶段的形态解剖学特征

为了诱导大蒜外植体形成体细胞胚、明确大蒜体细胞胚发生过程及不同阶段的形态解剖学特征,以大蒜品种 ‘二水早’ 为材料,探讨不同外植体和植物生长调节剂对大蒜胚性愈伤组织诱导和体细胞胚成熟萌发的影响,观察大蒜体细胞胚发生过程中形态、组织和超微结构变化。结果表明：大蒜花序轴、鳞茎盘和发芽叶基胚性愈伤组织诱导最适宜的2,4-D质量浓度分别为3.0、2.0、2.0和3.0 mg/L,诱导率分别为82.22%、 89.21%、82.52%和83.40%。在2,4-D 0.25 mg/L + 6-BA 0.5 mg/L条件下,体细胞胚的萌发系数最高,达35.56个/g。以花序轴为外植体,依据形态和组织学特征,可将体细胞胚发生早期过程划分为外植体、愈伤组织、初期胚性愈伤组织、后期胚性愈伤组织和球形胚5个阶段：外植体-花序轴顶端形成一层半透明的物质,表面不光滑,为愈伤组织,组成愈伤组织的细胞为典型的薄壁细胞。在愈伤组织局部形成明显的表面光滑的颗粒状突起,为初期胚性愈伤组织,解剖学观察发现薄壁细胞中产生了胚性细胞团。当颗粒状突起几乎完全覆盖外植体,表明形成大量胚性愈伤组织,为后期胚性愈伤组织,其由大量胚性细胞组成。球形胚为表面光滑、半透明的球状组织,组成球形胚的细胞呈分生细胞状态。由大蒜体细胞胚萌发形成的植株,培养90 d后可形成试管鳞茎,将其播种在由草炭、珍珠岩、蛭石按2∶1∶1体积比配制的复合基质中,试管鳞茎的出芽率为70.73%,试管鳞茎苗的成活率达96.55%。     

羽毛针禾组织培养方法研究

[目的]筛选适合于羽毛针禾种子发芽的培养基及愈伤组织诱导培养基。[方法]以羽毛针禾种子为基础材料,以MS培养基为基本培养基,研究不同激素浓度配比条件下种子发芽率及愈伤组织的诱导效果。[结果]6-BA对羽毛针禾种子的萌发作用不太明显,但加入6-BA后有利于种子个体的生长发育;GA3对羽毛针禾种子的萌发起着关键性的作用。种子发芽最适培养基为1/2 MS+GA32.0 mg/L,可诱导出结构致密、绿色颗粒状胚性愈伤组织。较高浓度的2,4-D可促进愈伤组织较快发生,但浓度过高对胚性愈伤组织的诱导有抑制作用且容易导致愈伤组织的褐化现象,只有当2,4-D浓度为2.0 mg/L时,胚性愈伤组织的诱导率达最大值,得到最好的培养效果。种子愈伤组织的诱导以MS+2,4-D 2.0 mg/L+6-BA 0.5 mg/L为宜。[结论]为完善羽毛针禾的高频再生体系和基因转化奠定了基础。     

茶树幼胚培养萌发率与再生途径影响因素研究

从激素浓度与组合、基本培养基和蔗糖浓度等几个方面进行了茶树幼胚培养中萌发率和再生途径的影响因素研究。试验结果表明，茶树幼胚的萌发需要有一定量的生长素的刺激作用，但较强烈的细胞分裂素的作用对茶树幼胚的萌发有抑制作用；所使用的激素种类对于胚的再生途径有较大的影响，在MS＋KT2．0＋IBA0．1＋GA31．0mg／L培养基上，80％以上的幼胚可以继续发育成熟并萌发成苗；而高糖浓度则会诱导产生较多的胚性愈伤组织并从而导致不定胚的形成。     

两种愈伤组织生理生化特性和形态结构比较

为了解愈伤组织形成单细胞克隆体系的关键因素,以青睐苜蓿为试材,比较了两种形态的愈伤组织的生理生化指标和形态结构变化。结果表明,两种类型的愈伤组织细胞膜透性和丙二醛含量无明显差异;细胞内可溶性糖含量和过氧化物酶POD活性差异较大,其中可溶性糖含量为:松散型巨大型,松散型是巨大型的2.09倍;POD酶活性:巨大型松散型,巨大型是松散型的1.35倍;巨大型愈伤组织细胞较大、组织排列疏松、细胞高度液泡化、细胞质较稀薄,而松散型愈伤组织细胞较小、组织排列松散、细胞液泡较小、细胞质较浓。巨大型与松软型愈伤组织细胞的膜代谢程度相同,但松散型愈伤组织细胞中糖积累多,细胞代谢旺盛;而巨大型愈伤组织糖积累少,细胞衰老。     

中药白芍愈伤组织的培养及其中芍药苷的测定

[目的]建立中药白芍愈伤组织培养的方法,并测定其中芍药苷的含量。[方法]以白芍叶、茎为外植体,接种于不同的愈伤诱导培养基和继代培养基上培养愈伤组织,并提取愈伤组织中的芍药苷,用TLC和HPLC法测定愈伤组织中芍药苷的含量。[结果]适合白芍茎的诱导愈伤培养基是1/2MS+0.2 mg/L 2,4-D+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA,叶的最适诱导培养基是1/2MS+1.0 mg/L 2,4-D+1.5 mg/L 6-BA,白芍愈伤继代培养适合培养基为1/2MS+0.1 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L ZT+0.5 mg/L NAA。经HPLC测定每克干白芍愈伤组织中的芍药苷含量为0.068 9 mg。[结论]中药白芍的叶和茎可诱导形成愈伤组织,且形成的愈伤组织中含有芍药苷。     

甘草2种类型愈伤组织的细胞学显微结构观察

[目的]比较甘草茎段愈伤组织和根段愈伤组织在细胞学显微结构方面的差异。[方法]以有再分化能力的甘草芽愈伤组织和无再分化能力的甘草根段愈伤组织为试验材料,利用非生物制片技术与生物制片技术对二者培养24d,再用涂片法和石蜡法分别进行线粒体和细胞骨架的活体染色观察。[结果]观察发现,2种愈伤组织中都存在运动型线粒体,且2种不同类型的愈伤组织细胞中运动型线粒体数目存在显著差异。芽的细胞具有运动活性的线粒体数目多于根细胞,芽较根细胞的细胞骨架网状结构较密集,说明芽诱导的愈伤组织细胞中各项生理活动旺盛,启动分化所需的能量充足,易进行再分化,而胚根诱导的愈伤组织则相反。[结论]2种类型愈伤组织脱分化结构的差异对其再分化有一定影响。     

银杏细胞对抗生素的耐受性研究

用MS培养基诱导银杏胚产生愈伤组织．分别在MS培养基中加入不同浓度的卡那霉素、潮霉素和杀稻瘟菌素，将银杏愈伤组织转接到含抗菌素的培养基上继续培养11d之后得到以下结果：MS培养基中含潮霉素25mg／L时，银杏愈伤组织变成褐色，停止生长；MS培养基中含同样浓度的杀稻瘟菌素时，银杏愈伤组织变成浅褐色生长变慢；MS培养基中合同样浓度的卡那霉素时，银杏愈伤组织生长良好．银杏细胞对潮霉素的耐受性很弱，可以作为筛选转基因银杏树种的抗生素使用。     

杉木愈伤组织及再生芽分化的细胞学观察

研究杉木愈伤组织形成及再生芽分化过程中的细胞组织发育规律,为建立杉木遗传转化体系提供科学依据。以杉木茎段为外植体,通过对组织培养条件下产生的愈伤组织进行体视显微镜和石蜡切片观察,分析愈伤组织的结构、形成及再生芽分化过程中的细胞组织变化规律。结果表明:愈伤组织先是由杉木茎段切口处表皮细胞分裂,再由维管束薄壁细胞通过脱分化逐渐形成的;愈伤组织在增殖期间分生细胞会形成不同维管组织;愈伤组织的再生芽分化是由愈伤组织的表皮分生细胞团先分化形成芽原基,再形成肉眼可见的再生芽;不定芽可从茎段直接分化形成,亦可通过愈伤组织再分化形成,两种不定芽发生方式均为外起源。     

新疆雪莲组培苗的染色体观察

[目的]为雪莲的组织培养奠定细胞学基础。[方法]以新疆雪莲无菌苗的根部、下胚轴、真叶及种胚为外植体进行组织培养,观察愈伤组织和不定芽阶段的染色体变异。[结果]4种外植体形成的愈伤组织细胞中有二倍体、少量四倍体、六倍体、非整倍体及其他倍性细胞。以种胚为外植体的愈伤组织中染色体数目异常的频率最高,但愈伤组织不出芽或出芽量极少,且芽形态不正常。以根部、下胚轴和真叶为外植体的愈伤组织出芽比例高,茎尖、根尖细胞染色体大多数为二倍体,少数为嵌合体,嵌合体苗中四倍体细胞比例很小。愈伤组织中存在异常的有丝分裂现象,不定芽中难以发现。[结论]雪莲组织培养中的染色体变异是由激素引起的,非整倍性的愈伤组织细胞分化能力低。     

复叶槭茎段诱导的愈伤组织解剖学观察

利用组织切片技术研究了不同颜色、不同质地的愈伤组织以及茎节在不同时期诱导的愈伤组织的内部结构。结果表明,不同颜色和不同质地的愈伤组织的细胞排列方式、细胞大小等有所不同,浅棕色疏松等浅色系的愈伤组织多为胚性愈伤组织。茎节在不同时期的细胞分裂有一定差异,通过组织学观察到了不定芽的形成过程。     

荔枝、龙眼胚性愈伤组织的细胞组织学观察

通过石蜡切片观察荔枝、龙眼胚性愈伤组织的结构和胚性细胞分裂生长的方式 .结果表明 :荔枝胚性愈伤组织中具有旺盛分裂能力和再生能力的胚性细胞主要分布在外缘 ,胚性愈伤组织的增殖生长为单细胞外起源 ;而龙眼胚性愈伤组织的胚性细胞大多处于内部 ,胚性愈伤组织的增殖生长为内起源 .还对荔枝、龙眼胚性愈伤组织应用于遗传转化等问题进行了探讨     

药用植物灵菊七愈伤组织诱导及其染色体数目稳定性研究

研究了不同植物激素对药用植物灵菊七愈伤组织诱导、继代培养、细胞染色体稳定性的影响。结果表明,灵菊七的愈伤组织诱导、继代培养分别以MS+4.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA、MS+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA为培养基较适宜。培养在MS+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA上的愈伤组织细胞中期分裂相染色体数目稳定,为20条,而培养在MS+2.0 mg/L ZT+0.5 mg/L NAA上的愈伤组织细胞中期分裂相染色体数目不稳定,其中86.7%的细胞含有20条染色体,13.3%的细胞含有10条染色体,表明激素ZT会导致愈伤组织细胞的染色体数目不稳定。在81个被观察的愈伤组织细胞中,超过85%的细胞染色体数目为20,表明灵菊七的体细胞染色体数应为2 n=20。     

黑亚14号不同类型愈伤组织结构的透射电镜观察

黑龙江省农业科学院经济作物研究所利用外源DNA导入技术,采用柱头基部切割滴注法以法国品种范妮（FANY）为供体,黑亚10号为受体育成了品系D93005—15—8,其各产量性状均超过其受体亲本和当前的主栽品种,2003年由黑龙江省品种审定委员会审定通过,命名为黑亚14号（H14）。