小花棘豆中毒对家兔脑组织α-甘露糖苷酶的影响

探讨小花棘豆对家兔脑组织α-甘露糖苷酶(AMA)的影响,进一步揭示小花棘豆的毒性作用机理。将24只家兔随机分为4组,即对照组和试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组。将小花棘豆全草粉碎后,按试验Ⅰ组添加15%,试验Ⅱ组添加30%,试验Ⅲ组添加45%的比例制作混合饲料,饲喂至典型临床症状出现为止。攻毒后第14、35、70 d每次每组随机采集2只家兔的全脑,检测家兔不同脑区AMA活性及表达的变化。结果显示,小花棘豆中毒可不同程度地导致家兔脑组织AMA活性和表达下降,从第14d起,所有试验组小脑AMA活性及mRNA表达量均显著低于对照组(P﹤0.05),试验Ⅲ组家兔大脑和丘脑AMA活性及mRNA表达量均显著低于对照组(P﹤0.05),但3个试验组海马和脑干AMA活性及mRNA表达量与对照差异均不显著(P﹥0.05)。结果表明,不同剂量小花棘豆均可降低家兔脑组织AMA活性及其mRNA表达量,小脑、大脑和丘脑是其主要作用的靶区,而且小脑的变化较大脑和丘脑明显。     

microRNA-34c在不同发育时期雄性小鼠脑组织中的表达分析

【目的】研究microRNA-34c(简称miR-34c)在出生后不同发育时期小鼠嗅球、大脑皮质、小脑皮质及海马中的表达情况,并分析其与小鼠行为活动之间的相关性。【方法】以出生后0,3,7,14,21,28,60和90d的雄性昆明小白鼠为试验动物,以5SrRNA为内参基因,运用荧光实时定量PCR技术,检测miR-34c在小鼠出生后8个不同发育时期嗅球、大脑皮质、小脑皮质和海马中的相对表达量以及在成年鼠脑组织中4个不同部位的相对表达量。【结果】随着小鼠的发育,miR-34c在嗅球、大脑皮质、小脑皮质及海马中的相对表达量均呈现不同程度的递增趋势。在成年鼠中,miR-34c在嗅球、大脑皮质、小脑皮质、海马中的相对表达量差异显著,其中海马中最高,小脑皮质次之,嗅球最低。【结论】miR-34c在出生后不同发育时期小鼠嗅球、大脑皮质、小脑皮质及海马中的表达趋势,与小鼠各种行为活动的出现具有一定的相关性。     

年龄对SAMP8小鼠不同脑区NSF含量的影响

采用免疫印迹技术检测NSF蛋白和内参蛋白GAPDH在SAMP8小鼠背侧海马、腹侧海马、额叶、顶叶和嗅球的表达。结果显示在背海马、额叶和顶叶中,13月龄SAMP8小鼠NSF的相对含量显著高于5月龄(Ps<0.05),且13月龄背侧海马NSF含量也高于9月龄鼠(P<0.05),而在腹海马和嗅球NSF的含量在各个年龄段间差异无统计学意义(Ps>0.05)。以上结果提示在正常衰老过程中,SAMP8小鼠NSF含量在脑内某些区域呈现年龄相关性增高。     

NAD~+抑制脂多糖诱导海马炎症因子的表达

采用1 mg·kg~(-1)脂多糖(LPS)腹腔注射30 min后进行烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD~+,腹腔注射100、300mg·kg-1)干预,并在LPS注射3和6h后,采用实时定量PCR方法检测海马中白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA表达量,探讨NAD~+干预对LPS诱导的C57BL/6雄性小鼠海马炎症因子IL-1β和TNF-αmRNA表达量变化的影响。结果表明:LPS诱导海马中IL-1β和TNF-αmRNA表达量明显升高;LPS注射3h后,NAD~+(100、300mg·kg~(-1))均显著抑制了LPS诱导的海马中IL-1βmRNA表达量的升高;LPS注射6h后,NAD+(100mg·kg~(-1))明显抑制了LPS诱导的海马中TNF-αmRNA表达量的升高。说明NAD+抑制LPS诱导的海马炎症因子的表达,提示NAD+可用于由脑部炎症引起的脑疾病早期干预治疗。     

用光遗传方法激活前额叶皮层对脑区c-Fos表达的影响

通过光遗传学手段激活不操作行为任务大鼠前额叶皮层锥体神经元,用免疫组织化学方法观察皮层和皮层下脑区c-Fos表达情况。结果表明:用光照射带有光敏感离子通道的锥体神经元后,前额叶皮层锥体神经元的动作电位发放增多,表达c-Fos的神经元个数显著增多;眶额叶皮层、前扣带皮层、运动皮层和感觉皮层c-Fos表达显著增多;下丘脑背内侧核和丘脑室旁核c-Fos表达明显增多;纹状体、海马、杏仁核和小脑这些脑区均未见c-Fos阳性信号。这一研究表明激活前额叶皮层锥体神经元可以增强前额叶神经元的活动,激活相关皮层和皮层下结构,为研究前额叶皮层调控认知功能的回路机制奠定基础。     

延边黄牛和延黄牛脂肪组织FASN基因mRNA表达水平与肉质的关系

为了探讨不同品种牛不同脂肪沉积部位FASN基因mRNA表达水平与肉质的关系,采用荧光定量PCR技术检测延边黄牛和延黄牛皮下脂肪、腹部脂肪、肾周脂肪与其他器官的FASN基因mRNA表达水平。结果表明,2个牛品种的FASN基因mRNA在不同脂肪组织中表达量均高于背最长肌,而延黄牛皮下脂肪和腹部脂肪中FASN基因mRNA表达量都高于延边黄牛。通过对肺、小肠、肾脏、肝脏和心脏中FASN基因mRNA研究发现,延边黄牛和延黄牛肺中FASN基因mRNA的表达量高于其他脏器。由此可见,FASN是影响脂肪酸合成的关键酶,与肉质相关,其中皮下脂肪和腹部脂肪是脂肪酸合成的主要部位。     

640层容积CT低剂量全脑灌注评价正常脑血流动力学改变的可行性研究

目的评价640层容积CT联合低管电压低浓度对比剂扫描计划对正常脑血流动力学测定的可行性。方法收集临床拟行全脑灌注成像(whole-brain perfusion CT,WB-CTP)的患者120例,选取灌注正常者60例,记录有效辐射剂量(effective dose,ED),同时由2位熟练使用脑灌注后处理软件的影像医师对原始数据进行处理分析,在全脑额叶皮质、颞叶皮质、枕叶皮质、顶叶皮质、额叶白质、颞叶白质、枕叶白质、顶叶白质、基底节区、丘脑分别选取感兴趣区(ROI)由软件自动生成灌注参数,包括局部脑血流量(regional cerebral blood flow,rCBF)、局部脑血流容积(regional cerebral blood volume,rCBV)、平均通过时间(mean transiting time,MTT)、峰值时间(time to peak,TTP),最后进行统计学分析。结果有效辐射剂量为(4.56±0.011)mSv,2名医师测得的各兴趣区的rCBF、rCBV、MTT、TTP值差异无统计学意义(P0.05)。结论 640层容积CT全脑灌注辐射剂量低、灌注参数稳定、可重复性较好,对于全脑血流动力学的评价较为全面可靠,可为临床提供更加准确的诊断依据。     

牦牛SLC25A6基因的CDS序列及其表达蛋白生物信息学分析

通过RT-PCR技术克隆牦牛SLC25A6基因的cDNA序列,并利用DNAMAN、MAGA 6、SWISS-MODEL、ExPASy等生物信息学软件系统对其进行分析。结果表明,扩增出的牦牛SLC25A6基因的编码区长897 bp,编码298个氨基酸;与普通牛、绵羊和人的相应基因核苷酸序列进行比对,序列一致性分别为99.33%、98.22%、91.86%;其编码蛋白分子量为32.821 ku,含多个修饰位点。     

脯氨酸对缢蛏高盐耐受性的影响

脯氨酸是生物体内重要的有机调节物质,对海洋贝类适应盐度变化具有重要影响。为了研究脯氨酸对缢蛏(Sinonovacula constricta)高盐耐受性的影响,本实验对缢蛏进行高盐(32)胁迫,并在高盐条件下添加外源氨基酸,对比不同条件处理下缢蛏脯氨酸含量、可溶性蛋白含量以及脯氨酸转运基因表达水平。高盐胁迫下,三种游离氨基酸显著上升(P<0.05),其中,脯氨酸含量积累最多,并始终处于高水平合成状态(P<0.05)；可溶性蛋白含量显著降低、排氨率升高；脯氨酸转运基因SLC6A7-1和SLC6A7-2表达显著上升。当添加外源脯氨酸后,脯氨酸含量积累更多,在72h时达到了峰值；可溶性蛋白含量开始显著增加,排氨水平显著下降(P<0.05)；脯氨酸转运基因SLC6A7-1表达先上升后下降,而SLC6A7-2一直处于高表达状态,在24h时表达量达到峰值。结果表明,脯氨酸可以促进缢蛏体内大分子蛋白合成,为缢蛏高盐适应性生存提供更多能量,为深入探究脯氨酸调控海洋贝类高盐适应性提供了重要理论依据。     

黄牛实验性急性食盐中毒的研究

为查清黄牛急性食盐中毒的中毒剂量及其浓度、临床和血清特征、病理和组织学变化,选健康黄牛6头进行了试验。试验组分A、B两组。给盐量均以2.2克/公斤体重计。A组给6％盐水,B组给10％的盐水,盐后禁饮。结果A组观察38小时未见发病;B组观察14小时、16小时出现典型中毒症状:烦渴频尿、以肌肉痉挛及体位平衡失调为主的神经症状、血清钠剧增;胃溃疡、小肠炎、脑组织出血与水肿。未见嗜酸性白细胞浸润。     

牛myf6基因真核表达载体的构建及在成肌细胞中的表达

【目的】构建牛myf6基因真核表达载体,并观察myf6真核表达载体转染鲁西黄牛成肌细胞后基因的表达和细胞形态的变化。【方法】在质粒pIRES2-EGFP的多克隆位点插入myf6基因构建真核表达载体pIRES2-EGFP-myf6,用脂质体技术转染鲁西黄牛成肌细胞,通过G418 筛选出稳定转染的细胞株。利用Western印记、Real-time PCR技术检测成肌细胞转染前后myf6基因、肌肉肌酸激酶基因和肌球蛋白轻链基因的表达量。【结果】与对照组相比,转染质粒的成肌细胞myf6蛋白和mRNA的表达量提高（P＜0.01）,肌肉肌酸激酶基因和肌球蛋白轻链基因的mRNA表达量提高（P＜0.01）。细胞形态观察显示成肌细胞融合为肌管。【结论】构建的真核表达载体pIRES2-EGFP-myf6能在成肌细胞中高效表达,myf6基因促进了成肌细胞向肌肉细胞分化。     

阉割对延边黄牛脂肪沉积的影响及相关基因表达研究

本试验通过研究阉割对延边黄牛脂肪沉积的影响及相关基因的表达,试图探索肉牛脂肪沉积的影响因素和分子机制。选择年龄、体重相近,相同条件下饲养的延边黄牛公牛和阉牛各15头,育肥至36月龄屠宰,测定脂肪沉积相关性状,并分析ANGPTL4、DGAT2和FABP4基因mRNA的表达变化。结果表明,延边黄牛阉牛肌内脂肪含量显著高于公牛(P0.05),背膘厚极显著高于公牛(P0.01),大理石花纹等级显著高于公牛(P0.05),说明阉割处理后的延边黄牛胴体和肌内脂肪沉积量显著增加。阉牛的ANGPTL4和DGAT2基因的mRNA表达量显著高于公牛,FABP4基因mRNA表达量极显著高于公牛(P0.01),说明阉割处理的延边黄牛ANGPTL4、DGAT2和FABP4基因的mRNA表达量增加,促进了脂肪沉积。     

发情相关基因在小尾寒羊性腺轴组织中的表达谱研究

[目的]探究绵羊发情相关基因KITLG、MAPK1、NOTCH4和NR5A2在小尾寒羊性腺轴组织(大脑、小脑、下丘脑、垂体、子宫、卵巢、输卵管)中的表达差异,为阐明绵羊高繁殖力的分子机理提供理论依据。[方法]以FecB BB型小尾寒羊为研究对象,利用实时荧光定量PCR检测上述4个基因在小尾寒羊发情周期(黄体期和卵泡期)性腺轴相关的7种组织中的表达差异。[结果]KITLG基因在小尾寒羊卵泡期输卵管组织中的表达量最高,其在黄体期小脑与垂体中的表达量显著高于卵泡期(P<0.05);MAPK1基因在小尾寒羊卵泡期大脑组织中的表达量最高且极显著高于黄体期(P<0.01),其在黄体期下丘脑和小脑组织中的表达量显著高于卵泡期(P<0.05),而其在卵泡期输卵管组织中的表达量显著高于黄体期(P<0.05);NOTCH4基因在小尾寒羊黄体期下丘脑中的表达量最高,而其在黄体期子宫中的表达量显著高于卵泡期(P<0.05);NR5A2基因在小尾寒羊黄体期卵巢组织中的表达量最高,其在黄体期子宫组织中的表达量显著高于卵泡期(P<0.05)。[结论]KITLG、MAPK1、NOT...     

脑红蛋白在成年牦牛脑中的表达研究

【目的】探寻脑红蛋白(Neuroglobin,NGB)在成年牦牛脑不同部位中的分布特征。【方法】选择健康成年牦牛8只,宰杀后取其大脑皮质、小脑皮质、海马、延髓、纹状体及嗅球等部位的脑组织,利用免疫组织化学染色SP法和实时荧光定量PCR技术,对NGB在成年牦牛脑不同部位中的分布特征及定量关系进行观察与检测。【结果】NGB在成年牦牛脑不同区域的表达强弱有明显差异,在大脑皮质中NGB基因的相对表达量(262.69±9.19)极显著高于小脑皮质(137.00±7.29)、海马(1.00±0.22)、延髓(3.43±0.76)、纹状体(7.65±0.61)及嗅球(2.14±1.22)。【结论】NGB在成年牦牛脑不同部位中高表达,提示NGB在脑组织的氧利用及功能活动中发挥着重要作用。     

PrPc重组蛋白脑内接种金黄地鼠对mRNA表达的影响

为明确将牛PrPc重组蛋白接种金黄地鼠脑内是否引起异常临床表现、脑组织病理学变化及对其mRNA表达产生影响,为进一步研究PrPc蛋白与异构体PrPsc 的结构转换机制提供基础数据,将纯化的牛PrPc重组蛋白磷酸盐缓冲液制剂进行地鼠颅内接种,约3 μL/只,对照接种磷酸盐缓冲液（PBS）;102 d后取出脑组织：一部分福尔马林固定后进行常规H.E.染色观察, 另一部分提取脑组织总RNA,进行实时荧光定量RT-PCR检测.结果表明：处理未见临床异常表现;大脑、小脑、脑干组织病理学检测未见海绵状空泡变性和淀粉样斑;大脑PrPc mRNA表达水平无显著性差异.上述结果表明,用PrPc重组蛋白接种,在检测时间102 d内未引起金黄地鼠行为和脑组织的异常改变.     

平原黄牛和高原黄牛睾丸神经肽Y表达的比较观察

采用免疫组化SP法观察神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)在平原黄牛和高原黄牛睾丸的分布特点,探索其在不同海拔黄牛睾丸组织的分布特征及其与生精功能的关系.结果表明:NPY主要表达在睾丸各级动脉血管周围或血管壁内,在睾丸白膜、间质结缔组织、睾丸小隔和曲细精管周围也有表达.在高原黄牛睾丸血管周围和血管壁内NPY的分布表现出明显的部位差异,头部和体部的表达明显比尾部高.NPY在高原黄牛各级生精细胞中为阳性表达,而在平原黄牛除了初级精母细胞外其他各级生精细胞为阳性表达.平原黄牛睾丸头、体、尾3部分NPY的分布无明显差异,高原黄牛睾丸头部和体部NPY的表达明显比尾部高.不同海拔条件下黄牛睾丸NPY阳性表达部位和分布密度具有一定的差异,提示肽能神经直接参与睾丸内血流调节,直接或间接影响睾丸雄激素生成和精子发生,对不同生活环境黄牛生殖生理的适应性调控具有重要的作用.     

褪黑素受体Mel1a在鸭不同组织中的表达研究

褪黑素是由松果体分泌的吲哚类激素,褪黑素通过与其受体（Mel 1a, Mel 1b and Mel 1c）结合发挥对动物的节律性,生殖调控,抗凋亡和抗氧化等调节作用。为探究Mel1a mRNA和Mel1a蛋白在鸭不同组织中的表达与分布以及在各个组织的相对表达量,研究褪黑素通过Mel1a受体参与鸭的生殖调控作用及其他生物学效应奠定基础,采集鸭心、脾、大脑、小脑、肾、肝、肺、胰和骨骼肌肉组织,利用PCR、免疫组织化学和RT PCR技术研究Mel1a mRNA和Mel1a蛋白在鸭各组织中表达分布以及Mel1a mRNA的相对表达量。研究结果表明：鸭Mel1a mRNA在心、脾、大脑、小脑、肾、肝、肺、卵巢、胰和骨骼肌组织中均存在表达;Mel1a蛋白在大脑、肺、肝、骨骼肌、肾、心和胰组织中均有表达;Mel1a mRNA定量结果表明,各组织中的Mel1a mRNA表达量存在差异,大脑、肺、卵巢、脾、小脑和胰脏的相对表达量较高,而肝、骨骼肌、肾和心的相对表达量较低。褪黑素首先通过与其受体结合而发挥生理调控功能,所以通过研究Mel1a mRNA和蛋白在不同组织的表达分布及其相对表达量,为研究褪黑素及其受体的生理功能如调控昼夜节律,抗凋亡、抗氧化、增强免疫力、卵母细胞成熟以及胚胎的发育探究提供基础。     

温氏土鸡和白洛克鸡胚小肠EAATs mRNA表达差异及发育性变化

 【目的】研究温氏土鸡（WYFC）和隐性白洛克（WRRC）鸡胚小肠酸性氨基酸转运载体EAAT2（SLC1A2）和EAAT3（SLC1A1）mRNA的表达差异和发育性变化。【方法】选取蛋重相近的两品种纯系种蛋各96枚,每个品种随机分为6组,每组16枚,在相同的条件下进行孵化。分别就每个品种在9（E9）、12（E12）、14（E14）、17（E17）和19胚龄（E19）及出壳当天（DOH）选取16枚鸡胚,称重后采集小肠样品,采用real-time RT-PCR方法检测小肠EAATs mRNA的相对表达丰度。【结果】（1）9、12、14、17和19胚龄隐性白洛克胚蛋重量及出壳当天雏鸡体重极显著高于温氏土鸡（P＜0.01）;（2）从发育性变化来看,EAAT2 mRNA在两个品种表达基本一致,即E9—14表达量下调,E17有所上调,随后下调,E12、E17、E19和DOH两品种差异极显著（P＜0.01）,E14差异显著（P＜0.05）;EAAT3 mRNA在两个品种都表现为随胚龄增加而表达上调,E19两品种差异极显著（P＜0.01）,E12差异显著（P＜0.05）;（3）EAAT2和EAAT3 mRNA表达丰度,温氏土鸡鸡胚小肠高于隐性白洛克,不同发育阶段对其都有影响,均存在“品种×胚龄”的互作效应。【结论】EAATs mRNA表达丰度在品种和胚龄间存在差异,不同基因表达的发育模式亦不相同。     

癫痫小鼠颅脑损伤后海马与顶叶皮质中C-FOS蛋白的表达

【目的】探讨具有癫痫基础病变小鼠在遭受颅脑损伤时,海马和顶叶皮质中CFOS表达与损伤的相关性及其在损伤中的意义,为癫痫后颅脑损伤复合病变研究提供理论依据。【方法】用腹腔注射匹罗卡品法构建小鼠（2周龄）癫痫模型,饲养4周后（6周龄）采用自由落体法构建闭合性颅脑损伤小鼠模型和癫痫+闭合性颅脑损伤小鼠模型,同时以正常小鼠为对照,于造模后0.5,3 h及1,3,7 d取小鼠大脑,制备切片,采用尼氏染色、免疫组织化学染色方法,从形态学以及蛋白质水平上研究各组小鼠大脑海马和顶叶皮质中C-FOS的表达情况。【结果】癫痫模型、闭合性颅脑损伤模型及癫痫+闭合性颅脑损伤小鼠模型均构建成功。免疫组织化学染色结果显示,癫痫合并闭合性颅脑损伤小鼠顶叶皮质、海马均有着色深浅不同、数目不等的C-FOS阳性细胞。与对照组相比,单纯癫痫组、单纯闭合性颅脑损伤组、癫痫+闭合性颅脑损伤组C-FOS灰度值均显著（P<0.05）或极显著降低(P<0.01);癫痫+闭合性颅脑损伤组小鼠海马和顶叶皮质C-FOS阳性细胞数均显著（P<0.05）或极显著（P<0.01）高于单纯癫痫组与单纯闭合性颅脑损伤组。【结论】癫痫小鼠颅脑损伤后,海马和顶叶皮质持续高表达C-FOS,从而促进神经细胞凋亡,加重颅脑损伤后的病理变化。     

饲养密度对仔猪血清抗氧化、肝脏NAD+/NADH及嘧啶核苷酸代谢基因表达的影响

研究旨在探讨饲养密度对仔猪抗氧化、嘧啶核苷酸合成和转运的影响,为生猪养殖业中饲养密度合理选择提供理论依据.试验选取31日龄,体重相近(10.32±0.07 kg)“长白×大约克郡”仔猪66头,随机分为3个处理组:低密度组(2头·2 m-2)、中密度组(3头·2m-2)和高密度组(6头·2m-2).每组6个重复,试验期30 d.试验结束后采集仔猪血清、肝脏和肠道样品,分析血清抗氧化指标、肝脏NAD+和NADH比值以及肝脏和肠道中嘧啶核苷酸代谢相关基因mRNA表达.结果 表明,与低密度组相比,高饲养密度组仔猪血清中CAT、GSH-PX以及T-SOD水平显著降低(P＜0.05);仔猪肝脏中NAD+和NADH比值显著升高(P＜0.05);仔猪肝脏中嘧啶核苷酸合成相关酶UMPS的mRNA表达水平显著下调(P＜0.01),RRM的mRNA表达水平显著上调(P＜0.05),空肠嘧啶核苷酸合成相关酶CAD和UMPS的mRNA表达水平显著上调,转运基因SLC28A1、SLC28A2和SLC28A3的mRNA水平显著上调(P＜0.05).综上所述,高饲养密度影响仔猪血清抗氧化能力、肝脏NAD+/NADH以及嘧啶核苷酸合成和转运相关基因表达,可能与高饲养密度引起仔猪应激反应相关.