抗菌肽基因转化产辣椒的研究

以“雪峰”为转基因材料,建立了以子叶为外殖体,直接分化成苗的离体再生体系,其各阶段的培养基分别为：（1）芽分化培养基：MS＋BA3－5mg/L IAA2mg/L;（2）芽伸长培养基：MS＋BA1－2mg/L;(3)生根培养基：1／2MS＋IAA0.5-1mg/L。利用农杆菌介导的三亲交配法将抗菌肽基因CecropinB,CecropinD导入辣椒,获得了再生植株,经PCR和Southern杂交检测,表明目的基因已整合到辣椒核基因中,获得了转基因植株。     

抗菌肽基因转化辣椒的研究

以"雪峰"为转基因材料,建立了以子叶为外殖体,直接分化成苗的离体再生体系,其各阶段的培养基分别为:(1)芽分化培养基:MS+BA 3～5 mg/L+IAA 2 mg/L;(2)芽伸长培养基:MS+BA 1～2 mg/L;(3)生根培养基:1/2MS+IAA 0.5～1 mg/L.利用农杆菌介导的三亲交配法将抗菌肽基因Cecropin B,Cecropin D导入辣椒,获得了再生植株,经PCR和Southern杂交检测,表明目的基因已整合到辣椒核基因组中,获得了转基因植株.     

辣椒不同品种与不同分化批次的再生植株对其基因转化频率的影响

在建立了高效辣椒子叶离体培养植株再生体系的基础上,通过含有 pCDB Ⅱ双价重组转化质粒的农杆菌LBA4 40 4将抗菌肽B,D基因导入四个辣椒品种,并对各品种同一外植体的三个分化批次转基因再生植株的基因转化频率进行调查统计。结果显示,辣椒品种间在PCR检测水平上呈显著差异,分化批次间无显著差异;在Southern杂交检测水平上辣椒品种间和分化批次间都无显著差异     

辣椒不同品种与不同分化批次的再生植株对其基因转化频率的影响

在建立了高效辣椒子叶离体培养植株再生体系的基础上,通过含有pCDB-Ⅱ双价重组转化质粒的农杆菌LBA4404将抗菌肽B,D基因导入四个辣椒品种,并对各品种同一外植体的三个分化批次转基因再生植株的基因转化频率进行调查统计。结果显示,辣椒品种间在PCR检测水平上呈显著差异,分化批次间无显著差异;在Southern杂交检测水平上辣椒品种间和分化批次间都无显著差异。     

黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因转化辣椒的研究

以辣椒品种'B162'为试材,探讨了通过根癌农杆菌介导法将黄瓜花叶病毒外壳蛋白(CMV-CP)基因转化辣椒的适宜条件.结果表明,将辣椒带柄子叶进行预培养2 d后,用D600 nm为0.3的根癌农杆菌菌液浸泡7 min,再经过共培养2 d后转移到筛选分化培养基中进行培养,有利于获得辣椒抗性不定芽.通过对获得的10株抗性不定芽进行PCR检测,其中有2株扩增出目的条带,初步证明CMV-CP基因已经转入辣椒不定芽中.     

辣椒组织培养再生体系的影响因素研究

以早熟辣椒、红线辣椒、茄门大辣椒(绿辣椒)3个品种为材料,研究了辣椒组织培养再生体系的影响因素。结果表明:红线辣椒为最佳基因型,辣椒离体再生最适外植体为茎段、子叶。诱导茎段愈伤生成的最佳培养基为MS+0.10 mg/L 6-BA+2.0 mg/L NAA;子叶愈伤生成的最佳培养基为MS+0.10 mg/L6-BA+4.0 mg/L NAA;高效不定芽分化培养基为MS+5.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IAA;高效不定根分化培养基为MS+0.5 mg/L IBA+0.1 mg/L NAA。     

农杆菌介导甜橙遗传转化的初步研究

为改良柑桔品种，以普通溆浦甜橙（Citrussinensiscv Xupu）实生苗上胚轴为外植体，建立了农杆菌介导的遗传转化体系，并把chit42基因和phyB基因导入其中．上胚轴经农杆菌工程菌液浸染后，在共培培养基（MS＋3mg／LBA）上培养3d，然后分别转移到含有100mg／L Kan（卡那霉素，Kanamycin）和500mg／L Cef（头孢噻肟霉素，Cefotaxime）的选择培养基上培养14d后，上胚轴开始分化抗性芽，chit42基因和phyB基因的抗性芽再生率分别为27．8％和35．6％．将抗性芽在筛选培养基上培养30d后用茎尖微芽嫁接成苗．目前，嫁接苗在温室中生长良好，经PCR鉴定为转化植株．     

辣椒组培外植体及不定芽诱导培养基的筛选

对辣椒杂交种陇椒3号和陇椒5号在不同培养基、不同激素水平下不定芽分化情况进行了研究,结果表明,B5培养基优于MS培养基,更能促进外植体的分化及再生;子叶的分化能力高于下胚轴,是辣椒离体组培的优良外植体;当B5培养基中激素配比组合为在6-BA 5.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L时,有利于陇椒3号和陇椒5号的分化再生,最早形成丛生芽。     

几丁质酶基因转化番茄的研究

以金丰一号亲本JM、JF为转化材料，建立了以子叶为外植体的离体再生体系，其芽分化培养基为MS ZT 2．0mg/L IAA0．2mg／L，生根培养基为MS。借助植物双元表达载体pROK，用农杆菌(LBA4404)与番茄子叶外植体共培养，把几丁质酶基因和抗除草剂BAR基因转化到番茄上。经过卡那霉紊和Basta的筛选和再生培养，获得转化再生植株。采用浓度为1000mg/L的Basta除草剂溶液涂抹再生植株后代叶片，表现明显抗性。对转化再生植株进行了PCR检测、Southern检测，表明上述基因已整合进番茄基因组中。     

雄性毛白杨离体叶片再生及抗虫基因转化

用雄性毛白杨试管植株无菌叶片作外植体，筛选出诱导不定芽分化、增殖和生根培养基。在组培室的光照条件下培养３７ｄ，平均每片叶产生２５个不定芽。已建立雄性毛白杨最佳转化和再生系统。用含有完全改造的Ｂｔ抗虫基因表达载体ｐＢ４８．７和部分改造的Ｂｔ抗虫基因表达载体ｐＢ４８．６转化雄性毛白杨，经在含有卡那霉素的培养基上选择和ＰＣＲ检测，已获得初步确定的转基因植株。     

辣椒子叶和下胚轴的离体培养及高效再生体系的建立

采用 9 个辣椒品种(Capsicum annuum L.)的子叶和下胚轴,分别离体培养在附加不同激素及化合物的MB5培养基上,对苗龄、基因型、不同外植体、激素组合和 AgNO3等对外植体不定芽诱导分化和芽伸长的影响进行研究。结果表明,苗龄对外植体不定芽分化的方式有直接影响;AgNO3的加入可使芽分化率平均提高 20 %～30 %,并缩短外植体再生时间;子叶的不定芽分化率高于下胚轴;B5维生素有利于芽的生长和芽伸长率的提高。通过结果比较,筛选出了辣椒子叶和下胚轴离体再生的较好芽分化培养基为 MB5+5 mg/L、6-BA+0.5 mg/L、IAA+4 mg/L、AgNO3+30 g/L、蔗糖+5 g/L 琼脂;芽伸长培养基为 MB5+3 mg/L、6-BA+1 mg/L、IAA+2 mg/L、GA3+4 mg/L、AgNO3+30 g/L、蔗糖+5 g/L 琼脂;生根培养基为 1/2 MS+0.2 mg/L、IAA+0.1 mg/L NAA。     

辣椒胞质雄性不育系(CMS)子叶培养植株再生(英文)

An in vitro shoot regeneration procedure was developed in pepper (Capsicum annuum L.) cytoplasmic male sterility (CMS) lines 9704A and 8214A using cotyledon as explant. The callus and bud cluster derived from cotyledon tissue explants were proliferated on Murashige and Skoog (MS) medium supplemented with different combinations of 6-benzladenine (6-BA), indole-3-acetic acid (IAA), gibberellic acid (GA3) and silver nitrate (AgNO3). From the formula of MS appended with 5.0 mg/L 6-BA, 1.0 mg/L IAA and 5.0 mg/L AgNO3, for the explants callus and bud cluster, the maximum differentiation rates (respectively 100.0% and 58.3%) and average number of adventitious bud from each explant (respectively 18.8 and 13.2) were obtained. The optimum medium combination for the elongation of adventitious bud was determined to be: MS+ 3.0 mg/L 6-BA + 1.0 mg/L IAA+ 5.0 mg/L AgNO3+ 2.0 mg/L GA3, from which the elongation rates of buds from callus and bud cluster were both 100%, and the average number of per explant adventitious bud number reached 6.3 and 5.8, respectively. And all the elongated shoots were successfully rooted on half-strength MS medium supplemented with 0.3-0.5 mg/L IAA.     

黄灯笼辣椒子叶离体培养与植株再生

以黄灯笼辣椒无菌苗子叶为外植体,研究激素对不定芽分化及植株再生的影响。结果表明:6-BA对子叶不定芽的诱导效果最好;IAA与6-BA配合能明显提高子叶不定芽的分化率;在分化培养基中添加4mg/LGA3,有利于不定芽的伸长。不定芽分化的最适培养基为MS 6-BA5mg/L IAA1mg/L AgNO36mg/L,平均诱导率达75%;不定芽伸长的最适培养基为MS 6-BA3mg/L IAA1mg/L AgNO36mg/L GA34mg/L,平均伸长率可达90%;最佳生根培养基为MS IAA0.5mg/L,生根率达95%;建立了辣椒子叶植株再生体系。     

辣椒离体再生体系研究

以5个辣椒(Capsicum annuum L．)品种(系)为材料,针对不同基因型、苗龄、外植体种类、激 素组合等因素对辣椒植株离体再生的影响进行了较为系统的研究,从“农城椒2号”、“农城椒3号”、 “0127”、“0159”、“0171”等5个辣椒品种(系)中筛选出“农城椒2号”、“0127”、“0171”3个再生能力 较强的基因型。确定了辣椒离体再生最适外植体为子叶,最适苗龄为12-14d。筛选出高效不定芽分 化培养基(MS 3％蔗糖 0．6％琼脂 5．0mg/L BA 0．5-1．0mg/L IAA),其不定芽诱导率可达98％。诱导 出的不定芽转入MS 3％蔗糖 0．6％琼脂 3．0mg/L BA 1．0mg/L IAA 2．0mg/L GA3 10．0mg/L AgNO3 芽伸长培养基,不定芽伸长率最高可达47．1％。不定芽伸长后在MS 3％蔗糖 0．6％琼脂 0．2mg/L I- AA 0．1mg/L NAA生根培养基上诱导不定根。待其长成发达根系后移栽大田成苗,建立了辣椒高效 植株再生体系。     

辣椒组织培养再生体系的建立与应用

综述了辣椒再生体系的建立及其转基因等方面的研究进展,以期为进一步建立辣椒高效组织培养再生体系以及开展其在基因工程中的应用研究提供依据。     

干旱胁迫对2种辣椒植株形态可塑性与持水力的影响

为探查辣椒形态可塑性和持水力与其耐旱性之间的关系,以弄口早椒和正椒13号为材料,研究干旱胁迫对2 种辣椒品种植株形态可塑性与器官持水力的影响.结果表明:干旱处理抑制了2 种辣椒的生长,但对弄口早椒的抑制作用更大;干旱促进了同化产物向根系的优先分配,也促进了叶厚和根长的增加,但减少了辣椒叶面积和叶脉间距,这可能是辣椒植株形态对干旱胁迫所产生的适应性反应;干旱胁迫对正椒13号的影响大于弄口早椒,由此计算得出正椒13号形态可塑性明显高于弄口早椒;对叶片和茎持水力的测定表明干旱处理后正椒13号叶片和茎的持水力明显高于弄口早椒.由此推测正椒13号具有较高的形态可塑性和持水力可能是其较弄口早椒更耐旱的原因.     

橡胶树黑团孢叶斑病菌培养滤液对薇甘菊的除草活性

[目的]探讨橡胶树黑团孢叶斑病菌培养滤液对薇甘菊(Mikania micrantha H.B.K.)的除草活性。[方法]采用室内生物活性测定方法,研究了7种植物病害真菌培养滤液对恶性入侵杂草薇甘菊种子萌发和幼苗生长的抑制作用,并评价了橡胶树黑团孢叶斑病真菌培养滤液对辣椒和番茄的安全性。[结果]橡胶树黑团孢叶斑病病原真菌培养滤液对薇甘菊种子萌发以及根、茎、幼苗生长均有较强的抑制作用,抑制率分别达72.7%、93.0%、32.4%和54.6%(鲜重)。橡胶树黑团孢叶斑病病原真菌培养滤液对番茄种子萌发和根茎生长均表现安全,而对辣椒种子萌发有抑制作用。[结论]橡胶树黑团孢叶斑病病原真菌毒素培养滤液及其代谢物值得作为生物除草剂进一步开发。     

辣椒离体培养和植株再生体系建立

选3种不同基因型的辣椒(Capsicum annuum L.)材料,建立了辣椒高频离体再生体系,试验结果表明:芽分化的最适培养基为:MS 6-BA 5 mg/L I AA 0.2 mg/L;芽伸长的最适培养基为MS 6-BA 5 mg/L I AA 0.2 mg/L GA3 2 mg/L;生根的最适培养基为MS NAA 0.1mg/L,当植株长到10～12片叶时,进行移栽.     

辣椒水通道蛋白基因CaAQP的克隆与序列分析

 【目的】分析辣椒水通道蛋白基因CaAQP的序列特征,并研究其在抗寒品种P70中经4℃低温胁迫处理后的表达模式,为探讨辣椒的耐寒机理及辣椒品种耐寒性改良积累资料。【方法】利用RACE 技术进行cDNA全长克隆,采用生物信息学软件分析克隆基因的编码蛋白特性,并以4℃低温胁迫处理不同时间的抗寒品种P70为材料,利用Real time-PCR分析所克隆基因在辣椒低温胁迫前后的表达模式,以25℃处理为对照。【结果】在4℃低温胁迫处理后的耐寒辣椒品种P70叶片中分离到与水通道蛋白基因相关的差异表达片段,并利用RACE技术克隆得到该基因的全长cDNA,命名为CaAQP,登录号为GU116569。序列分析表明,该基因大小为1 032 bp,含5′非编码区为69 bp,3′非编码区为210 bp,CDS长753 bp,编码250个氨基酸, 蛋白分子量为25.7 kD。应用生物信息学软件对CaAQP分析表明,CaAQP含有6个跨膜区,有2个NPA单元,其氨基酸残基与MIP家族蛋白保守区序列完全一致。氨基酸序列比对发现,该序列与其它物种TIP类液泡膜水通道蛋白氨基酸序列有很高的同源性。聚类分析表明,CaAQP与番茄液泡膜水通道蛋白遗传距离最近,与禾本科的玉米和大麦遗传距离相对较远。Real time-PCR分析结果证实,该基因在低温胁迫下呈现下调表达的趋势。【结论】利用cDNA-AFLP并结合RACE技术首次在耐寒辣椒品种中克隆了水通道蛋白基因CaAQP,该基因属于MIP蛋白家族的一员,具有其典型的功能域,表达模式分析表明,该基因在低温胁迫过程中具有重要的调控作用,该研究结果为进一步探讨辣椒逆境胁迫过程中基因表达调控机制提供了重要信息。