绵羊微卫星300U和FecB基因的多态及连锁分析

旨在阐明微卫星座位300 U与小尾寒羊高繁殖力主效基因FecB之间的连锁关系,为绵羊高繁殖力的标记辅助选择提供科学依据。分析与绵羊高繁殖力主效基因FecB紧密连锁的微卫星座位300 U在高繁殖力绵羊品种(小尾寒羊和湖羊)和低繁殖力绵羊品种(特克塞尔和多赛特)中的遗传多态性,同时探讨该微卫星座位与小尾寒羊FecB基因的连锁不平衡关系。微卫星座位300 U在4个绵羊品种的472个个体中共检测到14个等位基因和52种基因型,最小等位基因为124 bp,最大等位基因为162 bp;小尾寒羊(n=316)、湖羊(n=60)、特克塞尔(n=48)、多赛特(n=48)和小尾寒羊的BB型(n=156)、B+型(n=124)、++型(n=36)以及湖羊的BB型(n=48)、B+型(n=12)群体中优势等位基因分别是160、148、160、150、160、160、138以及148和148 bp,其频率分别为0.294、0.958、0.750、0.271、0.327、0.282、0.236以及0.959和0.958。连锁不平衡分析显示小尾寒羊FecB基因B等位基因与300 U座位160 bp等位基因之间存在一定的连锁不平衡(D′=...     

绵羊微卫星471U和FecB基因多态性及连锁分析

以高繁殖力(小尾寒羊和湖羊)及低繁殖力(特克塞尔和道塞特)4个绵羊品种为研究对象,分析与绵羊高繁殖力主效基因FecB紧密连锁的微卫星基因座471U在高繁殖力和低繁殖力绵羊品种中多态性,探讨该微卫星基因座与小尾寒羊FecB基因的连锁不平衡关系。结果表明:高繁殖力品种小尾寒羊和湖羊在骨形态发生蛋白受体IB(BMPRIB)基因编码序列第746位碱基处发生了FecB突变(A746G),而在低繁殖力的特克塞尔和道塞特绵羊中未检测到该突变;小尾寒羊BB、B+、的基因型频率分别为0.494、0.392和0.114,湖羊BB、B+的基因型频率分别为0.815和0.185。471U基因座在4个绵羊品种的466只个体中共检测到3个等位基因和5种基因型;小尾寒羊(316只)、湖羊(54只)、特克塞尔(48只)、道塞特(48只)和BB型(156只)、B+型(124只)、型(36只)小尾寒羊以及BB型(44只)、B+型(10只)湖羊群体中优势等位基因大小分别为200、204、200、200、200、200、200、204、204bp,其频率分别为0.767、0.926、1.000、0.625、0.808、0.730、0.722、0.943、0.850。连锁不平衡分析显示,小尾寒羊FecB基因B等位基因与471U基因座200bp等位基因以及+等位基因与471U基因座204bp等位基因均存在一定的连锁不平衡(D′分别为0.430、0.444)。     

绵羊抑制素A基因外显子1多态性及其与高繁殖力关系的研究

采用PCR-SSCP技术检测抑制素A（inhibin A,INHA）基因外显子1在高繁殖力绵羊品种（小尾寒羊和湖羊）和低繁殖力绵羊品种（多赛特羊、特克塞尔羊和德国肉用美利奴羊）中的单核苷酸多态性,同时研究该基因对小尾寒羊高繁殖力的影响。结果表明,在所有5个绵羊品种中都存在2种基因型（AA和AB）。高繁殖力的小尾寒羊和湖羊等位基因B的频率分别为0.21和 0.47,低繁殖力的多赛特、特克塞尔和德国肉用美利奴3个绵羊品种B等位基因频率分别为0.07、0.10和0.02。测序表明AB型和AA型相比在INHA基因外显子1中第877位发生T→C的碱基突变。独立性检验表明高繁殖力绵羊品种与低繁殖力绵羊品种之间INHA基因型分布差异显著（P<0.05）。AB型小尾寒羊平均产羔数比AA型多0.57只（P<0.01）。     

绵羊BMP15基因FecXL突变的检测

【目的】旨在寻找与产羔数相关的遗传标记,为绵羊高繁殖力的标记辅助选择提供科学依据。【方法】以控制Lacaune绵羊高繁殖力的骨形态发生蛋白15(bonemorphogenetic protein15,BMP15)基因为候选基因,采用PCR-SSCP方法在绵羊(Ovisaries)高繁殖力品种(小尾寒羊和湖羊)和低繁殖力品种(多赛特、特克塞尔、考力代、杜泊、南非肉用美利奴和中国美利奴绵羊)中检测BMP15基因的FecXL突变,同时研究该基因突变对小尾寒羊和湖羊高繁殖力的影响。【结果】这8个绵羊品种都没有发生与Lacaune绵羊相同的FecXL突变(C53Y)。【结论】BMP15基因中影响Lacaune绵羊高繁殖力的突变位点对小尾寒羊和湖羊的高繁殖力都没有显著影响。     

4个绵羊品种PTGS2基因部分片段的多态性分析

设计2对引物,采用PCR-SSCP和PCR-RFLP技术检测前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)基因在小尾寒羊、湖羊、多赛特羊、萨福克羊4个绵羊品种304个个体中的单核苷酸多态性.结果表明,PTGS2基因引物1扩增片段在4个绵羊品种中不存在PCR-SSCP多态性.引物2扩增片段存在PCR-RFLP多态性,在4个绵羊品种中都检测到2种基因型(AA、AB),都没有检测到BB基因型.A等位基因频率明显高于B等位基因频率.小尾寒羊与多赛特羊、萨福克羊、湖羊之间PTGS2基因型分布差异显著(P＜0.05),其余品种之间PTGS2基因型分布差异都不显著(P＞0.05).     

湖羊高繁殖力候选基因ESR的研究

利用 PCR-SSCP技术对高繁殖力绵羊品种湖羊雌激素受体（estrogen receptor,ESR）基因第一外显子的部分序列进行单核苷酸多态性研究。结果表明,湖羊ESR基因中存在 3 种基因型 AA,BB,AB,且A等位基因频率为0.554,B 等位基因频率为0.446。经测序,BB型与AA型相比在外显子 1 第 363 位发生 1 处C→G的碱基突变。据产羔数统计,AB 基因型和 BB 基因型的湖羊产羔数分别比 AA 基因型多0.98只（P<0.01）、1.47只（P<0.01）。说明ESR基因可能是控制湖羊多羔性能的一个主效基因或与之存在紧密遗传连锁的一个标记。     

FecB基因连锁微卫星在小尾寒羊中的多态性及其与产羔数的相关性

选用位于绵羊第6号染色体上与多羔基因FecB紧密连锁的微卫星座位LSCV043,300U和BMS2508,对32只小尾寒羊的多态性和产羔性状进行了研究,结果发现:3个微卫星座位在小尾寒羊中的等位基因数分别为11、8和10;3个微卫星座位的多态信息含量、遗传杂合度和有效等位基因数分别为0.851/0.878/7.39,0.822/0.853/6.24,0.858/0.885/7.75.LSCV043的基因型139 bp/115 bp对应的小尾寒羊产羔数最小二乘平均值最高,为3.67只/胎;300U的基因型172 bp/156 bp对应的最小二乘平均值最高,为4.00只/胎;BMS2508的基因型178bp/166 bp对应的最小二乘平均值最高,为4.00只/胎.     

5个绵羊群体的BMPR-IB基因多态性分析

选择骨形态发生蛋白受体IB基因(BMPR-IB)作为一种侯选基因.采用PCR-RFLP方法检测其在杜泊绵羊、湖羊、小尾寒羊及杜湖、杜寒杂交F1代群体中的多态性分布规律.结果显示:在杜泊绵羊中只存在1种基因型,即野生型( );在湖羊和小尾寒羊中检测到两种基因型,纯合突变型(BB)和杂合突变型(B );湖羊中BB、B 基因型频率分别为0.909和0.091,小尾寒羊中BB、B 基因型频率分别为0.563和0.437;在杜湖和杜寒杂交绵羊中发现两种基因型(B 和 ),杜湖羊B 和 基因型频率分别为0.875和0.125;杜寒羊B 和 基因型频率分别为0.786和0.214.BMPR-IB分子标记可作为一种新颖的辅助技术用于评估杜泊绵羊与湖羊或小尾寒羊杂交后代的繁殖力.     

孕酮受体基因多态性及其与小尾寒羊产羔数的关系

设计15对引物,采用PCR-SSCP技术检测孕酮受体(progesterone receptor,PGR)基因全部9个外显子在小尾寒羊、湖羊、特克塞尔和多赛特中的单核苷酸多态性,同时研究该基因对小尾寒羊产羔数的影响.只有引物P9扩增片段具有多态性.对于P9扩增片段,在小尾寒羊、湖羊和多赛特中均检测到AA、AG和GG型,...     

绵羊高繁殖力候选基因类固醇21-羟化酶（CYP21）的研究

通过采取PCR-SSCP和限制性内切酶酶切的方法检测类固醇21-羟化酶（steroid 21-hydroxylase,CYP21）基因的10个外显子在高繁殖力绵羊品种（小尾寒羊)、中等繁殖力品种(湖羊)和低繁殖力品种(多赛特羊和特克塞尔羊)间的单核苷酸多态性,同时研究该基因对小尾寒羊高繁殖力的影响。结果显示,在所设计的10对引物中,仅引物P8扩增的片段存在多态性。对于P8扩增得到的片段,经HinPⅠ1酶切后,可在小尾寒羊、湖羊和多赛特羊中检测到AA和AB型,而在特克塞尔羊中只检测到AA型;经BcnⅠ酶切后,在小尾寒羊、湖羊、多赛特和特克塞尔羊中均检测到CC和CD型。测序结果显示AB型与AA型相比在2340位发生了A→G突变,但并未引起所编码的氨基酸发生改变;CD型与CC型相比在2376位发生了G→A突变,也未引起所编码氨基酸的变化。AB型小尾寒羊产羔数最小二乘均值比AA型的多0.96只（P<0.05）,CC型和CD型小尾寒羊产羔数差异不显著（P>0.05）。研究结果初步表明CYP21基因的B等位基因是提高绵羊产羔数的一个候选DNA标记。     

小尾寒羊和湖羊高繁殖力候选基因BMP15的研究

以控制Romney Inverdale绵羊和Romney Hanna 绵羊高繁殖力的骨形态发生蛋白15(bone morphogenetic protein 15,BMP15)基因为候选基因,采用PCR-RFLP方法检测BMP15基因在高繁殖力绵羊品种(小尾寒羊、湖羊)以及低繁殖力绵羊品种(道赛特羊、萨福克羊)中的多态性,同时研究该基因对小尾寒羊高繁殖力的影响.结果表明,BMP15基因在小尾寒羊、湖羊、道赛特和萨福克绵羊中既没有发生与Inverdale绵羊相同的V31D突变,也没有发生与Hanna 绵羊相同的Q23Ter突变.还表明BMP15基因中影响Inverdale绵羊和Hanna 绵羊高繁殖力的突变位点对小尾寒羊和湖羊的高繁殖力没有显著影响.     

Prediction of the Best Three-Breed Hybridized Combination of Imported Meat Sheep Using Genetic Polymorphism of Microsatellite DNA

The allelic frequency, the polymorphic information contents （PIC）, the number of effective alleles, the heterozygosity, and the genetic distances were studied in three imported meat sheep （Suffolk, Dorset, Texel） and their F1 crossbred obtained from those crossed with indigenous Small Tail Hun Sheep （Suffolk♂× Small Tail Hun Sheep, SH; Dorset ♂× Small Tail Han Sheep♂, DH; Texel♂× Small Tail Hart Sheep ♀, TH） using six microsatellite DNA loci. The perpormences of three-breed crossbred （Suffolk ♂× DH ♀, Suffolk ♂× TH ♀, Texel ♂× SH ♀, Texel ♂× DH ♀, Dorset ♂× TH ♀, and Dorset ♂× SH ♀ ） were tested. The results indicated that there were genetic polymorphisms at six microsatellite loci in six sheep populations. Six microsatellite loci could be used for genetic diversity evaluation in sheep populations. The order of three-breed heterosis by the analysis of genetic relationship from large to small was Texel ♂× DH ♀, Suffolk ♂× DH ♀, Suffolki ♂× TH ♀, Texel ♂× SH ♀, Dorset ♂×TH ♀, and Dorset ♂× SH ♀, which was in accordance with the testing results on actual heterosis. These results showed that prediction of the best three-breed hybridized combination among sheep breeds by microsatellite DNA polymorphism was feasible, which will have an important value on the reasonable utilization of introduced meat sheep and sheep breeding in our country in the future.     

Forecast of the Heterosis of Imported Meat Sheep by Genetic Polymorphism of Microsatellite DNA

Forecast of the heterosis of Small Tail Han sheep crossed with imported meat sheep by genetic polymorphism of microsatellite DNA was done in different sheep breeds. The gene frequency, the polymorphism information contents, the number of effective alleles, the heterozygosity, and the genetic distances were studied in four imported meat sheep and Small Tail Han sheep using five microsatellite loci. The crossing effects on the Small Tail Han sheep with four imported meat sheep were tested. The results indicate that there are genetic polymorphisms at five microsatellite loci in five sheep breeds. Five microsatellite loci can be used for genetic diversity evaluation in sheep breeds. The genetic variability of Dorset is the highest, and that of the Small Tail Han sheep is the lowest in the five sheep breeds. The order of heterosis from large to small in four imported meat sheep by the analysis of genetic relationship is White-Suffolk, Black-Suffolk, Dorset, and Texel. This accords with the testing results of actual heterosis. It is feasible to forecast the heterosis of Small Tail Han sheep crossed with imported meat sheep by genetic polymorphism of microsatellite DNA, which will have an important value for sheep breeding in the future.     

利用微卫星DNA多态性预测引进肉用绵羊品种杂种优势

【目的】利用微卫星DNA在不同绵羊群体中的多态性预测引进肉用绵羊品种与小尾寒羊的杂种优势。【方法】利用5个微卫星基因座对4个国外引进肉羊品种及小尾寒羊5个群体的等位基因频率、群体多态信息含量、有效等位基因数、杂合度和遗传距离进行了遗传检测，并测定4个引进肉羊与小尾寒的杂交效果。【结果】5个微卫星基因座在白头萨福克、黑头萨福克、道赛特、得克赛儿及小尾寒羊5个群体中存在多态性，可以用于绵羊遗传多样性的评估；从不同品种看，道赛特羊的遗传变异程度最大，而小尾寒羊的遗传变异程度相对较小；经遗传关系分析，在引进的4个肉羊品种中，与小尾寒羊杂交优势由大到小依次为白头萨福克、黑头萨福克、道赛特、得克赛儿，与实际杂种优势测定结果相符。【结论】利用微卫星DNA多态性预测引进肉用绵羊品种与小尾寒羊的杂种优势是可行的，将对今后绵羊育种具有重要的应用价值。     

小尾寒羊AA-NAT基因克隆及其与繁殖性能的关系

根据牛AA-NAT基因DNA序列和绵羊该基因mRNA序列,设计5对引物(P1～P5),每对引物分别扩增随机选取的8只小尾寒羊,PCR产物克隆测序,序列拼接获得小尾寒羊AA-NAT的DNA序列,总长为2 138 bp。序列比对发现P3的扩增产物中存在C617T的沉默突变。根据获得的小尾寒羊AA-NAT基因的DNA序列设计引物P6,利用PCR-RFLP技术分别在常年发情绵羊品种(小尾寒羊、白杜泊)和季节性发情绵羊品种(滩羊、萨福克和特克塞尔)中检测该位点的多态性。结果发现引物P6扩增片段在滩羊、萨福克和特克塞尔中均检测到CC、CT和TT 3种基因型,在小尾寒羊和白杜泊中只检测到CC和CT 2种基因型;该突变位点不同基因型分布在常年发情绵羊品种和季节性发情绵羊品种间存在显著差异(P<0.05);小尾寒羊CC和CT基因型频率分别为0.24和0.76,CC型母羊平均产羔数比CT型多0.48只(P<0.01)。本研究结果初步表明,AA-NAT基因617位点与绵羊的常年发情可能存在一定关联,C等位基因可能是提高绵羊产羔数的一个潜在有效的标记。     

绵羊SMAD1基因组织表达及其多态性与产羔数关联分析

【目的】绵羊产羔数是一个极其复杂的性状,受诸多因素影响。绵羊排卵数是最重要的因素之一,而SMAD蛋白在哺乳动物卵泡发育和颗粒细胞生长分化过程中发挥着重要作用。因此本文基于前期绵羊基因组重测序数据,深入研究SMAD家族成员1 (SMAD family member 1, SMAD1)基因在不同繁殖力小尾寒羊组织表达模式,并探讨其多态性与绵羊产羔数的关系,以揭示其影响产羔数的机制,为绵羊分子育种提供科学依据。【方法】首先,采用反转录PCR技术检测SMAD1基因在不同繁殖力小尾寒羊群体大脑,小脑,下丘脑,垂体,子宫,卵巢,输卵管,心脏,肝脏,脾脏,肺脏,肾脏,肾上腺,甲状腺,大肠,小肠,胰腺,瘤胃,肾脂 19种组织的表达模式,然后利用实时荧光定量PCR技术检测SMAD1基因在不同繁殖力小尾寒羊下丘脑,垂体,子宫,卵巢,输卵管5种繁殖组织的相对表达量。随后采用Sequenom MassARRAY ^?SNP技术对SMAD1基因5个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP)位点在小尾寒羊（n=380）、湖羊（n=101）、苏尼特羊（n=21）、草原型藏羊（n=161）、策勒黑羊（n=52）、滩羊（n=22）6个绵羊品种中进行基因型检测,计算其群体遗传学指标,利用SPSS19.0软件分析5个SNPs与小尾寒羊产羔数的相关性。【结果】PCR结果显示,SMAD1基因在不同繁殖力小尾寒羊全身性组织均有表达,在小尾寒羊单羔群体卵巢的表达量极显著高于多羔群体（P<0.01）,小尾寒羊单羔群体下丘脑、垂体的表达量显著高于多羔群体（P<0.05）;基因分型结果表明,g.12485895A>G,g.12487558G>A和g.12487190G>T位点在单、多羔绵羊品种中基因型和等位基因频率均差异显著（P<0.05）;而g.12508874T>C和g.12487467A>G位点在单、多羔绵羊品种中基因型和等位基因频率均差异不显著（P>0.05）;群体遗传学分析表明,g.12485895A>G、g.12487558G>A、g.12508874T>C、g.12487467A>G、g.12487190G>T位点在小尾寒羊、湖羊、策勒黑羊、苏尼特羊、草原型藏羊中均为中度多态（0.25<PIC<0.5）,g.12508874T>C位点在滩羊群体表现为低度多态（PIC<0.25）;卡方适合性检验表明,g.12485895A>G和g.12487467A>G位点在小尾寒羊和草原型藏羊中处在Hardy-Weinberg不平衡状态（P<0.05）,g.12487558G>A在小尾寒羊和湖羊群体处于Hardy-Weinberg不平衡状态（P<0.05）,g.12487190G>T位点在草原型藏羊处于Hardy-Weinberg不平衡状态（P<0.05）。其他位点在6个绵羊品种中均处在Hardy-Weinberg平衡状态（P>0.05）;关联分析表明,g.12485895A>G,g.12487558G>A,g.12508874T>C和g.12487467A>G位点与小尾寒羊产羔数无显著关联。g.12487190G>T位点TT基因型母羊前三胎的产羔数均显著高于GT和GG基因型母羊（P<0.05）。将该位点与小尾寒羊FecB（A746G）不同基因型进行组合后发现,AA-GG、AA-GT、AA-TT型母羊产羔数显著低于其他组合基因型母羊（P<0.05）。【结论】SMAD1与小尾寒羊繁殖密切相关,g.12487190G>T可作为小尾寒羊产羔性状选育的潜在分子标记。     

利用微卫星多态性预测绵羊杂种优势

利用6个微卫星标记对无角陶赛特、蒙古羊及小尾寒羊遗传距离进行了遗传检测,测定了无角陶赛特与小尾寒羊和蒙古羊杂一代公羔六月龄前的日增重及杂种优势率.结果表明:无角陶赛特与小尾寒羊的遗传距离大于与蒙古羊,这与实际的测定结果基本相符.