红景天愈伤组织的诱导及细胞悬浮培养

红景天的细胞培养是充分利用该树种优良特性的生物工程基础.试验以红景天的茎为外植体,研究愈伤组织诱导和细胞悬浮培养的技术体系.结果表明愈伤组织诱导的最适培养基为MS 1.0mg/L6-BA 0.2mg/L NAA 0.1 mg/L2,4-D,在此培养基上诱导的愈伤组织生长速度快、质地均一疏松;愈伤组织最佳生长培养基为MS-t0.6mg/L6-BA 0.1mg/LNAA 1.0mg/L2,4-D;且选择松散型愈伤组织和3.0×105个/ml的起始细胞浓度,25℃黑暗培养18d为红景天细胞最适悬浮培养体系.     

海巴戟天愈伤组织诱导及细胞悬浮培养试验

以海巴戟天叶脉作为外植体,在B5 培养基上诱导出淡黄色、疏松愈伤组织,通过增殖后接种到液体培 养基中,建立细胞悬浮培养体系,并对影响细胞悬浮培养的培养基种类、接种量、pH 值、蔗糖含量等因素进行了研 究。结果表明院B5 + 1 mg/L 2,4-D + 0.1 mg/L 6-BA 能诱导出淡黄色、质地疏松的愈伤组织;较佳愈伤组织增殖培养 基为B5 + 2 mg/L NAA + 0.2 mg/L KT;细胞在B5 + 2 mg/L NAA + 0.2 mg/L KT 培养基中悬浮培养,接种量60 g/L（细 胞鲜重）、蔗糖4%、pH 值5.8、100 r/min、27益下暗培养,海巴戟天悬浮细胞比生长速率为0.0836 d-1,总蒽醌含量 367.8 mg/L,培养周期27~30 d。     

葡萄悬浮细胞系的建立

【目的】建立适合葡萄悬浮细胞系快速稳定生长的培养体系。【方法】以鲜食葡萄巨峰的果皮为材料,以B5为基本培养基,通过选择合适的激素配比及浓度、pH、蔗糖浓度等建立并优化葡萄愈伤组织培养体系及细胞悬浮培养体系。【结果】在B5+0.5 mg/L 6-BA+NAA条件下,NAA最适质量浓度为1 mg/L;在B5+0.5 mg/L 6-BA+2,4-D条件下,2,4-D最适质量浓度为1.0~2.0 mg/L;在B5+1 mg/L NAA+6-BA条件下,6-BA最适质量浓度为0.5~1.0 mg/L;在B5+2 mg/L 2,4-D+KT条件下,KT的最适质量浓度0.2 mg/L。在最佳蔗糖质量浓度30g/L、最适pH 5.5~5.8培养基条件下,建立了能快速生长的均一、稳定的巨峰葡萄细胞悬浮体系,优化了培养条件。【结论】适合葡萄愈伤组织生长的培养体系为:B5+250 mg/L水解酪蛋白+0.1 mg/L NAA+0.2 mg/L KT+30 g/L蔗糖+6 g/L琼脂;适合葡萄细胞悬浮培养的体系为:B5+1 mg/L NAA+0.5 mg/L 6-BA+30 g/L蔗糖和B5+250mg/L水解酪蛋白+0.1 mg/L NAA+0.2 mg/L KT+30 g/L蔗糖。     

当归愈伤组织诱导及其细胞悬浮培养的研究

为了建立当归愈伤组织的诱导及其细胞悬浮培养的技术体系,采用正交试验法研究不同植物生长调节剂对当归叶柄、根尖和叶片愈伤组织诱导的影响,以及采用植物细胞悬浮培养技术研究当归不同外植体细胞的生长特性及其活性成分的积累规律.结果显示,叶柄最易诱导出愈伤组织,其次是根尖和叶片,2,4-D对当归不同外植体愈伤组织的诱导均具有极显著的效果,其中诱导叶柄和根尖愈伤组织形成的最佳组合均为1.0 mg/L 2,4-D+ 0.2 mg/LNAA+ 0.4 mg/L 6-BA,诱导率达到80％以上.此外,当归根尖和叶柄细胞分别悬浮培养至15、21 d时,细胞量分别为926.7、990.6 mg/L;根尖细胞悬浮培养至21 d时,阿魏酸和藁本内酯的含量分别达到为96.6、167.5μg/g.结论为,当归叶柄和根尖均是诱导愈伤组织形成的适宜外植体和应用于细胞悬浮培养的最佳细胞来源.     

益母草转化酪醇合成红景天苷的研究

红景天苷是红景天属植物中一种重要的次生代谢产物,因其具有多种生理功能而广受人们的青睐。目前,红景天苷需求量不断增长,传统的天然提取和化学合成已难满足市场需求,因而亟待新方法解决这一困境。前期研究发现,益母草具有转化酪醇合成红景天苷的能力,故本研究对益母草水培和悬浮细胞培养转化酪醇生成红景天苷的条件进行探讨。结果显示,以喷洒0.5%(36.2 mmol·L^-1)酪醇溶液为主,再辅之以低浓度(<2 mmol·L^-1)的酪醇水培液,可较好地促进益母草转化酪醇生成红景天苷。另外,对于益母草悬浮细胞系,3 mmol·L^-1的酪醇浓度是最佳的培养浓度,对其转化48 h后可达红景天苷最高转化率(63%),而且相较水培方式,益母草悬浮细胞在转化时间和空间上都有较好的优势。综上所述,益母草转化酪醇合成红景天苷的研究,不仅进一步证明益母草具有转化酪醇生成红景天苷的能力,而且还为红景天苷的生物转化,以及益母草相关医药保健产品的开发奠定了基础。     

胡杨悬浮细胞系的建立

[目的]建立快速稳定生长的胡杨(Populus euphratica Oliver)细胞悬浮系,为进一步制备胡杨原生质体及林木抗旱耐盐体细胞杂交育种研究奠定基础.[方法]以胡杨胚性愈伤组织为材料,建立胡杨悬浮细胞系,利用正交试验法优化悬浮细胞系的培养条件,在优化培养条件下测定细胞的生长特性.[结果]以胡杨胚性愈伤组织成功地建立了胡杨悬浮细胞系,正交优化试验表明:MB+0.1 mg/L 2,4-D+0.2 mg/L 6-BA+50 g/L蔗糖+300mg/L CH+146 mg/L Gln为最优培养基组合,接种量为30 g(FW)/L时,干重增长速率最高,达 2.44 g/(L·d).胡杨悬浮细胞系生长曲线基本呈S形,生长周期为10 d,其中3～7 d为对数生长期.在一个生长周期内,培养液pH变化趋势是先下降,后上升并逐渐趋于平稳.[结论]在上述优化培养条件下,胡杨悬浮细胞系干重增长速率最快,细胞生长状态最佳.     

台湾金线莲细胞悬浮培养及其培养条件优化的研究

[目的]研究台湾金线莲细胞悬浮培养B5培养基的配方.[方法]以新鲜叶片为材料,经过初代培养、固体培养和继代培养,建立悬浮细胞培养体系,正交设计试验优化培养基配方.[结果]B5培养基中,影响悬浮培养因素的大小依次为大量元素浓度、6-BA、2,4-D、蔗糖、IAA.[结论]选用2％蔗糖、0.5 mg/L 6-BA、0.2 mg/L IAA、0.6 mg/L 2,4-D、1/2浓度大量元素的B5培养基培养悬浮细胞,15 d后吸光度达4.425.     

鸡骨草悬浮细胞系建立与植株再生研究

以鸡骨草（Abrus cantoniensis Hance）茎段为试材,进行了细胞悬浮培养及植株再生诱导的研究。结果表明：MS＋2.0mg/L 2,4-D＋1.5mg/L 6-BA培养基适合从茎段诱导生长迅速、质地疏松的愈伤组织;将获得的愈伤组织置于MS＋2.0mg/L 2,4-D＋0.1mg/L NAA＋1.5mg/L 6-BA液体培养基中振荡培养,建立细胞悬浮培养体系,随后继代4次,分化出芽;分化芽诱导生根后形成小植株。     

曼地亚红豆杉细胞悬浮培养体系的建立

【目的】建立曼地亚红豆杉的愈伤组织细胞悬浮培养体系,为紫杉醇生产提供参考。【方法】以曼地亚红豆杉幼茎诱导的愈伤组织为材料,以B5培养基为基本培养基,利用单因素试验或正交试验,研究愈伤组织接种量、蔗糖质量浓度、激素类型及配比和防褐化试剂对曼地亚红豆杉细胞生长的影响。【结果】曼地亚红豆杉细胞悬浮培养的最佳培养基和培养条件为:B5+2,4-D 0.6mg/L+NAA 0.8mg/L+KT 1.0mg/L+柠檬酸220mg/L+PVP350mg/L+水解乳蛋白450mg/L+蔗糖30g/L(pH=5.8),接种量0.1g/mL,在培养箱中110r/min、25℃暗培养。【结论】曼地亚红豆杉愈伤组织细胞在所建立的培养体系中经过多次继代后,生长状况良好,表明该细胞悬浮体系比较稳定,可以用于大规模培养红豆杉细胞。     

海南粗榧细胞悬浮培养体系的建立

以海南粗榧愈伤组织进行悬浮培养,考察了培养基、维生素、蔗糖浓度、pH值、接种量对海南粗榧细胞悬浮培养体系建立的影响,并利用HPLC技术检测海南粗榧悬浮细胞和培养基中生物碱的含量.结果表明:海南粗榧悬浮细胞系培养的最适条件:MS为基本液体培养基、添加蔗糖35 g/L+VB1 10 mg/L、接种量6％、初始pH值5.5～7.0;发酵过程中每5d调节pH值至6.0,有利于细胞的生长和产物的合成;细胞的生长呈“S”型曲线,细胞生长周期为30 d,产物含量在培养25 d时达到最大;细胞活力呈先急剧上升后缓慢下降的趋势.     

藤茶植株叶果与组培物中二氢杨梅素含量的比较研究

为比较藤茶经组织培养后不同组织中二氢杨梅素的含量,采用高效液相色谱法(HPLC)测定藤茶叶片、果实、悬浮培养液、嫩叶、愈伤组织、老叶中二氢杨梅素的含量。结果表明:嫩叶、叶片、老叶、果实、愈伤组织、悬浮培养液中二氢杨梅素的含量分别为:25.528%、13.709%、13.337%、6.255%、11.616%、0.829%。愈伤组织中二氢杨梅素含量与叶片接近,悬浮液中含量最低,可以尝试运用愈伤组织培养法生产二氢杨梅素。     

不同理化因子对黄芩悬浮细胞系的影响

采用植物组织培养手段建立了稳定的黄芩细胞悬浮系,通过正交试验筛选出最佳的MS液体培养基为:NH4+/NO3-30/40 mmol/L,Ca2+3 mmol/L,pH值5.4,蔗糖3%.研究了碳源、肌醇、激素、水解酪蛋白(CH)和水解乳蛋白(LH)对悬浮系中黄苓甙含量的影响.结果表明:复合碳源、较低浓度肌醇对悬浮细胞系中黄芩甙的积累和胞外释放具有促进作用,2.0 mg/L NAA+0.5 mg/L Kt最有利于悬浮系中黄芩甙的积累;水解酪蛋白和水解乳蛋白对黄芩甙的生成没有促进作用,反而起到了一定的抑制效应.     

超声波提取红景天鞣质工艺的优化

[目的]对红景天[Rhodiola crenulata（Hook.f.etThoms.）H.Ohba]鞣质超声波提取工艺进行优化。[方法]在单因素试验的基础上,采用正交试验优化红景天鞣质提取的工艺;采用干酪素法测定鞣质含量。[结果]红景天鞣质的提取最佳工艺条件为：70%丙酮溶剂,料液比为1∶10,超声功率为450 W,提取时间15 min。在最佳工艺条件下,红景天鞣质提取率为5.17 mg/m。l[结论]该研究为红景天鞣质的进一步开发利用提供了理论依据。     

豆粕粒度及容器堆料对地衣芽孢杆菌实验室固态发酵效果的影响

[目的]对地衣芽孢杆菌的豆粕固态发酵实验室小试工艺中豆粕的粒度和容器内堆料条件进行优化。[方法]在建立豆粕内活菌的有效计数方法的基础上,分析不同混匀方式对发酵豆粕中菌量计数的影响,并研究不同发酵容器、豆粕粒径和堆料厚度对发酵豆粕菌浓度的影响。[结果]发酵后豆粕在PBS振荡1 min能最大程度地释放其中的细菌,以便后续计数;以4层报纸封口的50 m L离心管为发酵容器,采用经80目筛孔的豆粕颗粒和1.5 cm堆料厚度能获得最优的实验室小试发酵效果,菌浓度能达到1.65×1010~1.76×1010CFU/g。[结论]研究为发酵豆粕实验室小试方法提供了技术支持。     

Studies on Genetic Transformatiom of Embryogenic Suspension Cultures of Sweetpotato

Genetic transformation of embryogenic suspension cultures of sweetpotato cv. Lizixiang wasconducted by using Agrobacterium tumefaciens strain A208SE harboring the binary vectors pROA93 with β-glucronidase (GUS) and neomycin phosphotransferase (NPT Ⅱ ) genes. The results indicated that embryogenicsuspension cultures precultured for 1 -3 d were suitable for the transformation. The optimal cocultivation timewas 4 - 5 d. The optimal concentration of kanamycin was 50-75 mg L-1 for suspension culture and 100 mg L-1for embryogenic callus proliferation and plant regeneration. The optimal concentration of carbencillin was 100mg L-1. Transgenic plants identified with GUS assays and PCR analyses were obtained.     

高山红景天不同继代愈伤组织中红景天甙含量研究

[目的]研究在离体培养条件下红景天甙合成的特征。[方法]以高山红景天的种子和试管苗的茎、叶为外植体诱导愈伤组织,继代培养6次,测定每代愈伤组织中红景天甙的含量。[结果]以不同部位作为外植体诱导的愈伤组织中所含红景天甙的含量不同,茎诱导的愈伤组织中红景天甙含量最高,达6．2100mg／g,其次为种子诱导的愈伤组织,以叶为外植体诱导的愈伤组织中红景天甙含量最小。仅0．9968mg／g;红景天甙的含量在各继代培养的愈伤组织中的含量不同,在1～2代较低,3～5代最高,第6代明显下降。[结论]高山红景天中红景天甙含量与外植体和继代次数有关。     

壳聚糖诱导子促进喜树培养细胞喜树碱积累的研究

[目的]探讨壳聚糖诱导子对喜树悬浮培养细胞喜树碱积累的影响。[方法]在壳聚糖诱导的喜树悬浮培养体系中,测定培养细胞的干重、喜树碱的产量、过氧化氢和丙二醛的含量。[结果]在喜树悬浮培养细胞第20天加入最终浓度80mg/L的壳聚糖诱导子刺激36h后,喜树碱的总产量达到15.21mg/L,是未作处理的喜树碱总产量最大值（在细胞培养的第20天达到）的6.18倍。同时,受到诱导的培养细胞内过氧化氢和丙二醛的含量都急剧增加。[结论]壳聚糖诱导子的刺激能显著地促进喜树悬浮培养细胞喜树碱的生物合成。     

乌拉尔甘草离体根尖培养方法的建立

建立甘草的离体根尖培养体系有助于研究甘草的根系营养、形态建成以及某些次生代谢产物的合成、代谢等。为建立乌拉尔甘草的离体根尖培养体系,对影响乌拉尔甘草离体根尖生长的培养基、激素以及维生素等因素进行了研究,并对其中的药用有效成分进行分析。结果表明：在培养基中附加0．10mg／L的IBA,可诱导乌拉尔甘草离体根尖伸长并产生较多的侧根;B,大量元素＋B5微量元素和1/3MS大量元素＋1／3MS微量元素适宜乌拉尔甘草离体根系的生长。表现为主根和侧根发达而均匀,具有较强的生长活力;培养基中附加0．50mg/L的VB1可显著促进乌拉尔甘草离体根系鲜重的增加;液体悬浮培养适于乌拉尔甘草离体根尖的培养。在悬浮培养条件下甘草离体根中甘草总黄酮物质的含量为0．75％,但没有检测到甘草酸的产生。     

康卫氏皿扩散法测定荞麦粉的水分活度

[目的]测定不同粒度荞麦粉的水分活度,为荞麦粉这种食品原料的储存和加工提供基础数据。[方法]运用康卫氏皿扩散法测定荞麦粉的水分活度。[结果]用氯化镁、碳酸钾、氯化钠、氯化钾4种盐的饱和溶液构成的四元体系,试验数据标准偏差较小,精密度高。荞麦粉的水分活度会随着粒度的变小逐渐增大,但增大幅度较小。[结论]在25℃,经过2 h的水分交换平衡,测定出粒度为80、100、120目的荞麦粉的水分活度分别为0.585、0.599和0.608。