牛活体采卵及其在体外受精中的应用

利用超声波活体采卵技术(ovumpick-up,OPU)对奶牛的活体采卵技术进行了研究,探讨活体采卵频率以及用FSH处理后对卵母细胞回收的影响,并对比了活体采卵与屠宰场采卵体外受精后胚胎的发育。结果表明:每周采2次与每周采1次可获卵母细胞数差异显著;用FSH在采卵前3d处理不发情母牛和发情母牛,发现两组平均获卵数差异不显著,且回收率和优质卵母细胞率差异不显著;活体采卵和屠宰场采卵的优质卵母细胞数和囊胚率差异显著。     

活体采卵技术在荷斯坦奶牛繁殖中的应用

[目的]为提高优质奶牛的繁殖力,保证低成本的情况下大量生产优质胚胎,对荷斯坦奶牛采用活体采卵的方式采集卵母细胞。[方法]将4头荷斯坦奶牛分为超排组和非超排组2组,超排组对试验牛注射FSH,非超排组对对照牛不采取任何处理。对荷斯坦奶牛进行活体采卵,并对卵母细胞数进行统计。[结果]共采集到12枚卵母细胞,经过受精培养后有8枚受精卵发育良好。[结论]采用优化的活体采卵程序并配合超排技术,能够更好地利用良种奶牛,以达到动物胚胎生产和辅助生殖的目的。     

奶牛活体采卵的研究

对6组抽吸负压为50～300mmHg（每组按50mmHg递增）的奶牛活体采卵效果进行了对比试验。试验证明100mmHg为最佳吸卵负压（卵母细胞回收率为37.2%,优质卵母细胞率为89.5%）;青年和成年母牛每周1次采卵,平均可获得卵母细胞分别为2.4和1.9枚;每周2次采卵平均可获卵母细胞分别为4.4和5.4枚;每周1次和2次采卵的回收率分别可达48.0%和51.7%,而优质卵母细胞率可达93.5%和85.1%;对两头成年母牛每周采卵2次,连续采13周,共53头次,平均每头次采卵数为2.7枚,回收率为52.5%,优质卵母细胞率为85.1%;采用PMSG(500IU)和FSH(0.7mg)处理母牛后,再进行采卵,其结果分别为:每头次可采卵泡数为2.3和4.4个,可获卵母细胞数为1.1和2.3枚;3头母牛在发情第一天平均每头次可采卵泡数为8个,平均可获卵母细胞5.7枚。     

影响小鼠超数排卵的若干因素

分析了激素剂量、激素注射间隔时间、发情周期、季节和温度等因素对小鼠超排效果的影响。结果表明:PMSG与HCG剂量为10IU时,见栓小鼠平均获卵数(39.6枚),显著高于5IU(27.2枚)和15IU(25.5枚)激素剂量;PMSG与HCG注射间隔时间46h与48h见栓小鼠平均获卵数(分别为35.7枚和38.0枚)差异不显著;当激素注射时间间隔为50h时,见栓小鼠平均获卵数(20.3枚)显著下降;发情周期不同阶段开始超排效果不同,发情前期开始超排,其见栓率(82％)、见栓小鼠平均获卵数(37.9枚)均显著高于其他情期;当环境温度维持在(20±5)℃时,不同季节小鼠超排效果无显著差异;冬季鼠房温度在(20±2)℃时,小鼠超排见栓率(77％)和见栓小鼠平均获卵数(33.2枚)均极显著高于环境温度为(10±2)℃的超排效果。     

青年奶牛活体取卵技术的研究

本文利用B超活体取卵技术(ovumpickup,OPU)对青年荷斯坦奶牛活体取卵,探讨影响活体取卵的因素及对青年奶牛发情周期的影响。4头青年荷斯坦奶牛在连续观察两个发情周期后,进行连续的一周一次OPU操作,持续16周,然后观察OPU后的发情周期特征及卵巢状况。结果显示:在数量上,个体间穿刺卵泡的总数和回收卵母细胞的总数不完全一致,但卵泡直径的百分比构成个体之间无显著差异(P>0.05),回收率相似;在质量上,各级卵母细胞的构成在各个体间没有显著差异(P>0.05);OPU期间奶牛出现情期延长的趋势,且发情表现减弱,但停止OPU后发情基本正常。研究表明:利用活体取卵技术对青年荷斯坦奶牛进行每周一次的长期连续取卵,在一定的条件下,能够达到较为稳定的回收率和获得一定数量和质量的卵母细胞,但会导致奶牛发情周期的改变,而在停止OPU后能较快恢复。     

细毛羊羔羊超数排卵及体外胚胎生产移植

[目的]研究羔羊日龄、羔羊体重、超排方法、精卵共孵育时间对细毛羔羊超排效果及卵母细胞体外受精效果的影响.[方法]用国产FS3H对4.～9周龄羔羊进行两种超排方法处理,回收可用卵母细胞1 032枚,体外受精后移植受体98只,产羔25只.[结果]不同周龄羔羊只均获卵数和可用卵数之间差异显著(P＜0.05);不同激素方案处理组的发育卵泡两种处理方案在发育卵泡数上无显著差异(P＞0.05),但在回收率和可用卵数上差异显著(P＜0.05);不同体重组只均发育卵泡数和可用卵数之间差异显著(P＜0.05).[结论]4～6周龄的细毛羊羔羊超排获得卵母细胞数目较多;重复超排的羔羊超排效果不理想;同时,将受精液pH值调为7.5 ～7.6,并将精卵共孵育时间控制在22 ～26 h,卵母细胞体外受精及发育效果较好.     

影响牛活体取卵(OPU)的因素

在B超扫描监视下进行牛的活体取卵（OPU）,根据获得卵母细胞的数量、质量和试验牛的繁殖力对OPU的效果进行评估,并分析影响OPU效率的因素。结果表明,OPU的效率受季节、品种（鲁西黄牛和荷斯坦奶牛）、个体差异和吸卵压力的影响。但是重复每周进行1次OPU操作,对获得卵母细胞的数量、质量和试验牛的繁殖力并无影响。因此,OPU技术可为体外生殖的研究和高质量胚胎的生产提供充足而理想的卵母细胞的一种有效途径。     

羔山羊卵泡诱导发育及活体采卵研究

注射外源FSH诱导羔山羊卵泡发育并活体采卵,比较不同来源FSH、不同采卵间隔时间、不同重复采卵次间的实验效果.结果显示:1)用5 mg新西兰产FSH(Ovagen)处理后每只羊卵巢上平均有(18.3±3.5)个可用卵泡,较中科院产FSH效果(14.9±6.7)好.2)间隔7 d或14 d进行卵泡诱导发育及活体采卵,实验效果无显著性差异.3)羔山羊共4次用5 mg FSH(Ovagen)重复诱导卵泡发育并活体采卵,随次数增加,可用卵泡数和回收可用卵母细胞数呈下降趋势;不同重复次间卵泡直径、回收卵母细胞的可用率无显著性差异(P＞0.05).4)间隔7 d多次重复采卵过程中,平均每次采卵获可用卵8.4枚,COCs回收率和可用率分别为74.2%、78.5%;不同个体间卵母细胞回收率和可用率无显著性差异(P＞0.05).结论:新西兰产FSH(Ovagen)比中科院产FSH诱导羔山羊卵泡发育效果好;手术法活体采卵可获得稳定的卵母细胞回收率和可用率,羔山羊可以进行手术法重复活体采卵且最短采卵间隔时间宜为7 d.     

奶牛体内性控胚胎生产的研究

为探讨奶牛合理的超排方法,采用分离的X冻精对17头超数排卵的荷斯坦奶牛进行人工授精,生产体内性控胚胎。结果表明,处理Ⅰ组在头均获卵数、可用胚及退化胚几个方面都低于处理Ⅱ组,但差异不显著(P>0.05);头均黄体数和未受精数,Ⅰ组高于Ⅱ组(P>0.05);青年牛头均获卵数、可用胚和退化胚方面都高于经产牛组,但差异不显著(P>0.05);青年牛头均未受精卵数显著高于经产牛(P<0.05),头均黄体数低于经产牛,但差异不显著(P>0.05)。     

杜泊羊体外胚胎生产效率的影响因素

为了将绵羊体外胚胎发育技术应用于生产,采用活体采卵-体外受精的方法,对准备淘汰的杜泊羊进行外源激素处理,并对可能影响体外胚胎发育及移植后受胎效率如FSH剂量、公羊个体、获取卵母细胞方式等因素进行研究,结果发现:(1)每只供体注射FSH 240IU或420IU剂量对获得卵母细胞数、胚胎数及体外受精卵裂率没有明显影响(P0.05);(2)不同公羊个体对卵母细胞体外受精效率有显著影响,但胚胎移植后受胎率没有明显影响(P0.05);(3)活体采卵与屠宰场采卵方式相比,对卵母细胞的回收没有影响(12.24vs 13.84,P0.05),但活体采集卵母细胞受精后的平均胚胎数显著低于后者(7.50vs 11.17,P0.05),卵裂率极显著低于屠宰场采卵方式(60.92%vs 81.75%,P0.01);(4)上述几组试验对受胎率都没有影响(P0.05)。由此可见,供体使用240IU的FSH,选择受精效率好的公羊,能显著提高杜泊羊体外胚胎生产效率;离体采集卵母细胞体外发育效率高于活体采卵。     

活体采卵时间间隔对牛克隆胚胎发育的影响

采用活体穿刺技术（ovum pick up,OPU）,分别间隔3／4（1周2次）、5、7、10、14d对同一批荷斯坦奶牛进行穿刺采卵,根据优势卵泡直径和所有卵丘细胞-卵母细胞复合体的状态确定采卵时卵泡所处的发育阶段,从而确定卵泡波的发育动态变化。并以间隔不同时间采卵获得的卵母细胞成熟后进行体细胞核移植（somatic cell nuclear transfer,SCNT）制备克隆牛胚胎。重构胚体内培养7d后,通过比较克隆囊胚的发育率判定卵母细胞质量的差异,从而确定最佳的采卵时间间隔。结果显示：①穿刺采集所有直径超过3min的卵泡后,可起始1个新卵泡波,大约5d后从属卵泡开始进入凋亡阶段,7d后进入晚期凋亡阶段,第7～10d又起始1个新的卵泡波,第14d时第2个卵泡波中的从属卵泡起始凋亡。②间隔不同时间组克隆囊胚发育率存在差异,间隔3／4d（1周2次）为23．1％,间隔5d组为15．0％,间隔7d组为10．9％,间隔10d组为4．9％,间隔14d组为29．0％。结果显示：间隔不同的时间采卵,卵泡所处的发育状态存在差异。并对卵母细胞质量具有显著的影响。     

奶牛重复超排试验观察

为探讨中国荷斯坦牛多次重复超排的效果,对9头供体奶牛进行6次重复超排,每次超排间隔3个月左右,采胚47头次,生产可用胚胎292枚,平均每头次冲胚获可用胚6.2枚。每批获可用胚胎数依次为49,50,46,48,55,44枚。可用胚胎数并未随超排次数的增加而呈现下降趋势,说明荷斯坦牛以3个月的间隔多次重复超排是可行的。     

卵丘细胞对活体取卵来源的裸卵在体外成熟中的作用

本文探讨了卵丘细胞对活体取卵(ovumpickup,OPU)来源的裸卵在体外成熟中的作用。实验分3组:自然裸卵组(NO),裸卵独自成熟培养;共成熟组(CM),自然裸卵与A级卵丘卵母细胞复合体(Cumulus oocyte complexes,COCs)共成熟培养;非裸卵组(NN),正常AB级COCs成熟后,去除卵丘再进行体外受精与体外培养。结果显示:NN组的成熟率最高,其卵裂率及囊胚率高于NO组,但与CM组相似;CM组的成熟率与NO组没有显著差异,但卵裂率和囊胚率均比NO组高。表明OPU来源的裸卵和A级COCs共成熟能显著改善裸卵的发育能力;卵丘细胞对卵母细胞的促成熟作用可直接作用于裸卵,促进裸卵的成熟及随后的发育。     

波尔山羊活体采卵与卵母细胞体外受精技术

对10只不孕不育波尔母山羊采用超数排卵、活体采卵、卵母细胞体外成熟培养以及体外受精等技术方法,探讨其是否能正常繁育后代。试验中6只供体经超数排卵处理,在发情前利用特制的采卵装置进行活体采卵,共采集到30枚形态学正常的卵母细胞。经过体外成熟培养,有21枚成熟卵母细胞进行了体外受精处理和培养,获得16枚2 细胞胚胎,移植到4只同期发情的当地山羊受体输卵管内,经妊娠检验,有两只受体受孕,其中1只受体产出正常羔羊2只。该技术经进一步改进完善后可望作为不孕不育波尔山羊繁殖后代的辅助生育技术。     

安徽省奶牛寄生蠕虫感染情况调查

对安徽省的１０个奶牛场８１４头奶牛寄生蠕虫的感染情况进行了调查。结果发现,有５６．３％的奶牛的粪样中含有寄生蠕虫卵,经鉴定为１３种蠕虫;有４８．３％的奶牛为混合感染（２～８种）。     

体细胞核移植克隆牛的遗传物质鉴定

应用活体取卵(OPU)技术采集遗传背景清晰的卵母细胞作为受体细胞,与不同来源的供体细胞核进行体细胞核移植(SCNT)。通过微卫星DNA及线粒体DNA检测,分别对5头克隆牛核内和核外DNA进行了分析。结果表明克隆牛的微卫星DNA与核供体牛完全一致,而线粒体DNA则全部来源于卵母细胞。