羊生长激素的提取及生物化学和生物活性的测定

600 g 冰冻羊垂体经过酸性溶液提取、硫酸铵的分级分离和 DEAE-纤维素柱层析得纯品(1),其得率为0.08g/kg,最后将部分纯品(1)过 Sephadex G-100分子筛,得到高纯的羊生长激素[纯品(2)]。提取的羊生长激素具有相当高的理化均一性,纯品(2):聚丙烯酰胺凝胶电泳呈现一条主带和二条酸性小带;聚丙烯酰胺等电聚焦电泳呈现二条带,其等电点分别为 pH7.35和 pH7.40,SDS—电泳呈现二条很难分开的带,其平均分子量为20 100道尔顿;用DNS-CI 法测得的 N-末端氨基酸是2个,丙氨酸和苯氨酸。纯品(1)理化均一性稍差:SDS—电泳较纯品(2)多出两条分子量低的带;等电聚焦电泳多出六条酸性小带。除此之外,其他理化性质同纯品(2)。用大白鼠胫骨实验测定生物活性,测得纯品(1)可使垂体大白鼠胫骨软骨盘的宽度相对增加79%。未对纯品(2)进行生物活性测定。用羊催乳素放射免疫药盒测定,纯品(1)和纯品(2)与羊催乳素均无交叉反应。     

鸡胰多肽、猪胰多肽的提取、纯化和鉴定研究

本实验利用磷酸钙吸附法从猪胰脏、鸡胰脏中分别得到了鸡胰多肽(APP)、猪胰多肽(PPP)粗提液,用sphadex G-50柱层析脱盐后制备出了APP、PPP粗品;并用Folin-酚试剂法测得自制APP、PPP粗品的肽含量;用SDS-PAGE电泳法对自制APP、PPP粗品进行了鉴定。结果表明:用Folin-酚试剂法测得自制APP粗品的肽含量为:24.52 mg.g-1;PPP粗品的肽含量为:8.15 mg.g-1。从电泳图像可见,经Sephadex G-50层析后的APP、PPP纯度较高,APP和PPP的分子量在4.2KD范围内,与Kimmel等报道的结果以及市售APP纯品的分子量是一致的。     

黑曲霉TH-2蔗糖酶的分离纯化及部分性质研究

实验室保存的菌种黑曲霉TH-2经柠檬酸-磷酸缓冲液抽提,DEAE-Sepharose离子交换层析和Superdex-200凝胶过滤层析,得到电泳纯的蔗糖酶.纯化后的蔗糖酶比活为135.90 U/mg,回收率为37.7%,提纯倍数为20.3倍.测得酶的相对分子质量为1.29×105,最适温度为65℃,最适pH值为4.4.以不同浓度蔗糖为底物测得Km值为23.1 mmol/L.Ag+对其活性有很强的抑制作用,而Zn2+,Cu2+,Mn2+对其有激活作用.     

黑曲霉TH-2蔗糖酶的分离纯化及部分性质研究

实验室保存的菌种黑曲霉TH-2经柠檬酸-磷酸缓冲液抽提,DEAE-Sepharose离子交换层析和Superdex-200凝胶过滤层析,得到电泳纯的蔗糖酶.纯化后的蔗糖酶比活为135.90 U/mg,回收率为37.7%,提纯倍数为20.3倍.测得酶的相对分子质量为1.29×105,最适温度为65℃,最适pH值为4.4.以不同浓度蔗糖为底物测得Km值为23.1 mmol/L Ag+对其活性有很强的抑制作用,而Zn2+,Cu2+,Mn2+对其有激活作用.     

短小芽孢杆菌碱性蛋白酶的提纯与性质研究

将短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)Zkud202-4液体的发酵液离心去菌体,用硫酸铵盐析得粗酶,透析除盐后进行Sephadex G-75柱层析得到电泳纯碱性蛋白酶,用该法提纯的碱性蛋白酶比活力从粗酶液的155.5 U/mg提高到了954 U/mg,回收率为27.6%.该酶水解酪蛋白的最适反应温度为50℃,最适作用pH为10,且该酶具有较高的热稳定性和耐碱性.经SDS-PAGE测定,其分子质量约为2.5 ku.     

抗猪IgG单克隆抗体的研制

采用饱和硫酸铵盐析、离子交换柱层析技术从猪血清中提纯IgG. 经SDS-PAGE电泳鉴定, 纯化的IgG达到电泳纯. 以此纯化的IgG, 采用长程免疫法免疫BALB/c小鼠, 取4次免疫后的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞用PEG-1500进行细胞融合, 融合率为90.3%. 建立间接ELISA, 用于检测杂交瘤细胞上清中的单克隆抗体. 初检阳性率为13.9%. 经2次亚克隆反复筛选获得了2株能稳定分泌抗猪IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞株, 命名为6B4、 4B8. ELISA证实所获得的单抗是特异性针对IgG, 6B4、 4B8经反复冻存, 复苏及多次传代, 仍能分泌高效价抗体, 分泌抗体均属IgG1、κ型. 本研究所获得的单克隆抗体将对检测猪抗体水平及IgG提纯发挥重要作用.     

薄荷幼叶蔗糖酶的分离纯化与部分性质

经10 KD的膜超滤, DEAE-Sepharose离子交换柱层析, Sephacryl S-200凝胶过滤纯化, 从薄荷(Mentha haplocalyx Briq)幼叶中分离纯化出电泳纯的转化酶, 该酶提纯倍数为186.3倍, 比活力为67.06 U/mg. 酶学性质和动力学性质研究表明: 该酶不可逆催化蔗糖生成果糖和葡萄糖, 最适pH值为5.0, 最适温度为55 ℃, 米氏常数Km值为12.25 mmol/L.     

黑曲霉Uγ-2胞外菊粉酶的分离纯化

黑曲霉(Aspergillus niger)Uγ-2 菊粉酶经超滤浓缩,硫酸铵分级盐析,DEAE-纤维素离子交换层析,SephadexG-100凝胶过滤,提纯得到单一组分,经电泳鉴定达到电泳纯。测定比活力为220 5 U mg,提纯倍数为7 71。     

抗猪IgG单克隆抗体的研制

采用饱和硫酸铵盐析、离子交换柱层析技术从猪血清中提纯IgG.经SDS-PAGE电泳鉴定,纯化的IgG达到电泳纯.以此纯化的IgG,采用长程免疫法免疫BALB/c小鼠,取4次免疫后的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞用PEG-1500进行细胞融合,融合率为90.3%.建立间接ELISA,用于检测杂交瘤细胞上清中的单克隆抗体.初检阳性率为13.9%.经2次亚克隆反复筛选获得了2株能稳定分泌抗猪IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为6B4、4B8.ELISA证实所获得的单抗是特异性针对IgG,6B4、4B8经反复冻存,复苏及多次传代,仍能分泌高效价抗体,分泌抗体均属IgG1、κ型.本研究所获得的单克隆抗体将对检测猪抗体水平及IgG提纯发挥重要作用.     

薄荷幼叶蔗糖酶的分离纯化与部分性质

经10 KD的膜超滤,DEAE-Sepharose离子交换柱层析,Sephacryl S-200凝胶过滤纯化,从薄荷（Mentha haplocalyx Briq）幼叶中分离纯化出电泳纯的转化酶,该酶提纯倍数为186.3倍,比活力为67.06 U/mg.酶学性质和动力学性质研究表明：该酶不可逆催化蔗糖生成果糖和葡萄糖,最适pH值为5.0,最适温度为55℃,米氏常数Km值为12.25 mmol/L.     

快速简便地制备猪生长激素

 将猪垂体在酸性（pH5.5）条件下制备垂体匀浆液，经硫酸铵分级分离后，用Sephadex G-100凝胶柱层析纯化，得到电泳纯的分子量为21.7KD的猪生长激素，产率为1.22g/kg新鲜垂体。胫骨法测定具有促生长活性，其氨基酸组成、氮末端氨基酸及电荷不均一等性质均与文献报道基本一致。此法较之前人的方法有简便易行、周期短的优越性，活性组分集中，得率也较高，是制备有活性的猪生长激素较为理想的方法。     

烫漂、亚硫酸氢钠对速冻蔬菜过氧化物酶活性的影响

本文研究了经烫漂、亚硫酸氢钠加各种不同的化学试剂烫漂的蔬菜，在－４０℃下速冻，在－１８℃条件下冻藏一年后分别测定并比较了产品中残余过氧化物酶活力；同时用聚丙烯酶胺凝胶电泳分离了蚕豆过氧化物酶同工酶并进行了比较，结果表明：烫漂可明显抑制过氧化物酶活性，产品残留过氧化物酶活性明显降低；亚硫酸氢钠加各种不同化学试剂烫漂抑制效果都优于单纯烫漂处理，产品过氧化物酶活性都明显低于单纯烫漂处理；其中亚硫酸氢钠加钙盐烫漂效果最佳，产品残余过氧化物酶活力降到最低，产品的感官质量好。速冻产品的感官质量与产品过氧化物酶残余活力密切相关，残余酶活愈低，产品质量愈好。经烫漂、亚硫酸氢钠加各种化学试剂烫漂冻藏一年后的蚕豆过氧化物酶同工酶谱与新鲜蚕豆和只经冻藏的蚕豆相比有明显的差异，而且各处理其酶谱的强弱也不相同。     

3种禽血抗凝剂效果及其对DNA提取质量的影响

通过3种不同血液抗凝剂对禽血抗凝,提取新鲜的和经冷冻保存一段时间后的抗凝血DNA,运用紫外分光法、凝胶电泳和PCR扩增技术检测提取的DNA样品质量,探讨不同抗凝剂的抗凝效果及其对提取DNA质量的影响。结果表明:3种抗凝血提取的DNA纯度和浓度相近。新鲜抗凝血比冷冻保存一段时间后的抗凝血提取的DNA质量好。ACD抗凝血在冷冻一段时间后出现凝血块,EDTA抗凝血液放置时间过长也影响抗凝效果,但两者在加入裂解液后则可长时间保存。75%乙醇抗凝剂抗凝效果较好,可长时间保存,适合远距离采血。由3种抗凝禽血提取的DNA分子片段完整,能满足常规分子生物学试验研究。     

海滨木槿叶片蛋白质双向电泳体系的建立

为建立一套适合海滨木槿叶片蛋白质组学分析的双向电泳体系,以海滨木槿无性系叶片为材料,分别采用裂解液法、三氯乙酸一丙酮沉淀法、改良酚抽法分离纯化蛋白质,选用24empH3—10的IPG胶条,并对不同上样量、等电聚焦程序、平衡时间等电泳条件进行优化。结果表明：采用改良酚抽法提取蛋白质,上样量为每IPG胶条1000μg,总聚焦功率90kV·h,平衡时间15min,胶体考马斯亮蓝染色,可得到蛋白质点数目多、分辨率高的双向电泳图谱。重复性试验结果显示,该体系具有很好的稳定性及可重复性,可满足海滨木槿蛋白质组学研究的要求。     

水稻氨基酸含量的品种间差异及与遗传密码数的关系

分析了同一环境条件下,正季收获的59个早籼品种(组合)糙米的17种氨基酸含量和蛋白质含量,结果表明:糙米中8种必需氨基酸与9种非必需氨基酸的绝对含量与相对含量,品种(组合)间存在明显差异;各品种氨基酸的绝对含量都与其蛋白质含量呈正相关;各氨基酸绝对含量的品种间变幅与变异系数均大于其相对含量的变幅与变异系数;糙米蛋白质质量也存在明显的品种间差异,赖氨酸是水稻的第一限制性氨基酸,少数水稻品种缺乏苏氨酸、胱氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸等氨基酸;水稻蛋白质中各种氨基酸相对含量和平均值与其对应的遗传密码数达到显著水平的正相关。     

THE ISOLATION IN PURE FORM OF THE INTERSTITIAL CELL-STIMULATING (LUTEINIZING) HORMONE OF THE ANTERIOR LOBE OF THE PITUITARY GLAND

Interstitial cell-stimulating (luteinizing) hormone was isolated from swine pituitary glands. This protein hormone, having a molecular weight of about 90,000 and an isoelectric point of pH 7.45, was shown to be pure by tests in the electrophoresis apparatus of Tiselius and in the ultracentrifuge as well as by its constant solubility. The hormone stimulated the interstitial tissue of the testis or ovary and caused the formation of corpora lutea provided that maturing follicles were present. Under the conditions described, its minimal effective total dose in hypophysectomized immature male rats was about 1 microgram of nitrogen or 6.7 micrograms of hormone. Extracts of swine pituitary with purely follicle-stimulating effects did not cause oestrus in immature hypophysectomized female rats unless luteinizing hormone was also administered.     

柑桔冻害情况调查及其分析

本文据实地调查报道了江西省1991年冬柑枯冻害的天气状况和冻害面积、程度、损失等,并分析了致冻天气、冻害症状、冻害因素等特点,为进一步研究柑桔冻害规律,避免或预防冻害,促进柑桔生产稳定发展提供理论依据。     

奶牛白细胞介素-2基因的克隆及序列分析

根据GenBank上发表的牛IL-2(M13204)基因序列,应用Primer Premier5引物设计软件自行设计一对引物,以ConA刺激培养24 h的奶牛外周血淋巴细胞为材料,从总RNA中扩增出奶牛IL-2基因,然后测序.结果表明克隆的奶牛IL-2基因大小477 bp,编码158个氨基酸,与GenBank上发表的牛IL-2基因序列比较,其核苷酸的同源性99.4%,与马、猪、猫、狗、山羊、绵羊的核苷酸的同源性分别为31.8%,32.0%,31.6%,30.3%,30.8%,31.0%.     

不同营养水平对民猪及哈白猪生长影响的研究——III在饥饿与补偿状态下能量与蛋白质代谢及体成分间的比较

纯种东北民猪、哈白猪由活重30公斤始施以一个饲粮三个水平的处理:自由采食,作为对照;维持组,能量按165—0.8(体重—20)体重~(0.75)供给;低维组,能量供给为前者的60％。当自由组达到50公斤时,其余两组同时转入自由采食,直至活重70公斤结束全部试验。处于饥饿状态时,民猪全期减重少于哈白猪1.1公斤;析因分析能量、蛋白、脂肪也是民猪减得少。民猪维持需要比哈白猪低,前者为76.8千卡/公斤。~(0.75),后者为91.2千卡/公斤~(0.75)。消化能沉积脂肪,蛋白的部分效率也以民猪高,在维持需要之上,民猪每食入l兆卡消化能沉积脂肪39.96克,蛋白21.70克;哈白则为33.98克与18.88克。饲料可消化粗蛋白的沉积效率,民猪为52％,哈白猪为45％。消化能日增重效率哈白为143.78克/兆卡消化能,民猪为159.78克/兆卡消化能。限食后民猪血红蛋白、血清总蛋白含量以及α—球蛋白百分比例均比哈白高。限食并不显著改变两个品种的体灰分百分比及其日沉积量。饲料能量及其它养分的消化率也不因限食而有所改变。限食转入自由采食后,两品种都表现出明显的补偿作用,表现出日增重快以及限食时血糖α、γ、球蛋白,血清总蛋白低的差异消失。补偿期间哈白水分沉积多,故两个品种的饲粮利用总效率相仿。能量及其它养分的消化率也无品种间差异。