基于响应面分析对坚强芽胞杆菌-CX10发酵黄芪多糖的条件筛选与优化

以黄芪为原料,采用二级因子最陡上升/下降法、单因素试验和响应面法,以新分离白蚁源坚强芽胞杆菌-CX10为发酵菌种,对黄芪发酵多糖(Fermented Astragalus Polysacharin,FAPS)质量分数进行研究。对11个重要的发酵培养基因素及其发酵条件进行筛选,如化学因素(葡萄糖、蛋白胨、酵母提取物、乳清粉、KH_2PO_4、NaCl和黄芪粉)、物理因素(温度、pH和时间)和生物因素(接种量),用二阶因子(Plackett-Burman Design,PB)筛选关键因素,以发酵黄芪多糖质量分数显著性影响为中心指标,通过单因素试验考察碳源、氮源、pH、接种量、时间和温度6因素对多糖质量分数的影响,用中心复合设计(BOX-Benken Design,BBD)优化4个重要的发酵参数,如发酵pH、发酵时间、发酵温度和接种量,以获得更高的黄芪多糖的质量分数。最佳发酵条件为:pH 7.35、发酵时间37.54 h、发酵温度37.45℃、接种量10.60%。试验验证在最佳发酵条件下黄芪多糖质量分数为(69.3±0.013)%,理论预测值为71.77%,结果与预测值基本相符,证明该优化条件有效。     

不同年限秦艽产量及各部位活性成分质量分数的动态变化

通过测定宁夏隆德地区不同生长年限秦艽根干质量,利用高效液相色谱(HPLC)对不同年限秦艽的产量和不同部位活性成分质量分数的动态变化研究,确定秦艽的最佳采收期,探索其全草的药用价值。结果表明,地下营养器官(根)是秦艽有效成分的主要积累部位,质量分数可达9.43%,地上部分有效成分质量分数依次为花(4.90%)叶(3.96%)茎(3.84%)。对2a生、3a生和4a生栽培秦艽根的进一步研究发现,在一个生长季节中龙胆苦苷与马钱苷酸质量分数呈现不同的变化规律。研究表明,4a生秦艽在9月采收最佳,其花、茎、叶有效成分质量分数较高,值得开发利用。     

牡丹鳞芽诱导与增殖过程中影响因子研究

以牡丹鳞芽为外植体,研究不同品种类型、基本培养基种类、取材时间、暗处理、植物生长调节物质种类及其质量浓度、继代周期等因素对鳞芽诱导与增殖的影响.结果表明,影响鳞芽诱导的主要因子是品种和采集时间,鳞芽适宜的采集时间为01-02月;不同GA_3质量浓度、暗处理和基本培养基对鳞芽诱导的影响较小;牡丹试管苗增殖中,4种基本培养基类型相比较,MS+Ca~(2+)效果明显;培养基中添加6-BA和IAA对试管苗增殖率有一定影响,最佳培养基组合为:MS+Ca~(2+)6-BA 2.0 mg·L~(-1)+IAA 0.3 mg·L~(-1),增殖培养适宜的继代周期为35 d.     

卫矛茎段组织培养中消毒方法及不定芽诱导

以卫矛(Euonymus alatus(Thunb.)Sieb.)茎段为外植体,通过在4—9月不同时间取材,并采用升汞和次氯酸钠不同处理时间、升汞结合吐温、紫外线照射等消毒方法,筛选外植体最佳取材时间和最佳消毒方法;同时,研究了不同质量浓度的激素和琼脂对不定芽诱导的影响,并采用L_9(3~4)正交试验设计,探讨MS、B5、White不同培养基和不同质量浓度的6-BA、NAA、GA_3对不定芽增殖的影响,筛选出不定芽诱导和增殖的最佳培养基。结果表明:5月中旬为茎段的最佳取材时间;HgCl_28 min并加入两滴吐温-20为消毒的最佳方法;MS+6-BA2.0 mg/L+NAA0.05 mg/L+琼脂7.0 g/L是卫矛茎段不定芽诱导的最佳培养基,诱导率高达70.67%;在正交试验的9个处理中,以MS+6-BA0.5 mg/L+NAA0.05 mg/L的增殖系数最高为19.25,通过极差分析得出MS+6-BA1.0 mg/L+NAA0.05mg/L是卫矛不定芽增殖的最佳培养基,增殖系数为23.51。     

香根草外植体的选择及植株再生试验

为建立香根草组织培养及植株再生体系,分别选取生长健壮无病虫害的植株茎杆、根、叶和幼嫩芽不同部位进行外植体选择及愈伤组织诱导,以及香根草外植体消毒方法和激素处理及培养基对丛生芽诱导的影响试验.结果表明,茎杆、根、叶作为外植体,诱导不出愈伤组织.幼嫩芽是最佳香根草外植体的选择.0.1％升汞对各部位处理效果成功率在65％以上,幼嫩芽消毒浸泡8 min成功率达88％.在MS＋6-BA 1.5 mg/L＋NAA 0.1 mg/L的培养基上培养25 d幼芽愈伤组织诱导率为100％.在MS＋6-BA 0.8 mg/L＋NAA 0.2 mg/L培养基上培养20 d诱导丛生芽效果最好,增殖系数为6.4.生根培养基选用1/2 MS＋NAA 0.3 mg/L＋IAA 0.1 mg/L为最佳,生根率达90％以上.     

蒙古黄芪对N、P、K的肥效响应

采用三因素二次D-饱和最优设计,研究N、P、K及其配比对沙地1a生蒙古黄芪的株高、根长、根直径、根干质量等生物学特性及皂苷、黄酮、多糖次生代谢物和Fe、Mn、Cu、Zn微量元素质量分数的影响,利用主成分分析其最佳施肥用量。结果表明:氮肥有助于黄芪株高的增高,但施肥量过高黄芪株高反而降低,以氮钾配施处理(N2K2)的株高最高,较对照增加51.93%;磷肥和钾肥能促进根的生长发育,其中氮、磷、钾施肥量分别为79.41、150和225kg/hm~2处理(N1P3K3)的效果最佳,其根直径与根干质量分别较对照增加58.42%和43.87%。施肥能显著提高蒙古黄芪皂苷和多糖的质量分数,以氮、磷、钾施肥量分别为225、150和79.41kg/hm~2处理(N3P3K1)的效果最好,其皂苷和多糖的质量分数分别较对照增加118.52%和13.14%;单施氮肥(N3)和单施磷肥处理(P3)均不利于黄酮的积累,其黄酮质量分数分别较对照降低7.56%和6.46%。对于微量元素,施肥能促进黄芪Mn的积累,对Cu、Zn影响不大,单施钾肥处理(K3)使得黄芪Fe元素质量分数降低。此外,结合蒙古黄芪的次生代谢物及微量元素的主成分分析,最终得出该地区蒙古黄芪的最佳施肥用量为氮(N)、磷(P2O5)、钾(K)分别为79.41、150和225kg/hm~2。     

影响长寿花离体培养及植株再生的几个因素

对长寿花茎段培养 7～ 8d ,部分茎段腋芽萌动。 30d培养结果表明 ,芽诱导的最佳培养基是 :MS 6 -BA1 0mg/L NAA0 5mg/L ;芽伸长的最佳培养基是 :1/ 4MS ;形成有效节的最佳培养基是 :MS。继代培养中各培养基上无叶茎段均较带叶茎段萌芽率高。在 5、 6、 7号培养基上 ,叶片培养 9d时 ,从叶柄基部开始形成不定芽 ,在其它培养基上 ,14d才开始有不定芽形成。 30d培养结果还表明 ,诱导叶片再生不定芽的最佳培养基是 :1/ 2MS 6 -BA1 0mg/L。诱导根生长的最佳培养基是 :1/ 4MS     

新梨七号茎段组织培养再生植株的研究

从植物生长调节物质的不同配比、不同部位诱导不定芽以及炼苗移栽等几个方面对新梨七号离体茎段再生进行研究,获得茎段产生愈伤组织及不定芽再生的适宜培养基,分析以上因素对新梨七号再生体系建立的影响。结果表明,新梨七号的茎段最适宜愈伤诱导培养基为MS+2,4-D 1.0mg/L+6-BA 0.5mg/L,愈伤组织诱导率为100%;茎段诱导不定芽的最佳培养基为MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.5mg/L,诱导率为95%,增殖倍数为7.29;最适宜不定芽生根培养基为1/2MS+IBA 2.5mg/L+蔗糖15g/L,生根率为90%;封口炼苗时间14d为最好,移栽时间7月最佳。     

不同因素对红王子锦带愈伤组织诱导的影响

以红王子锦带叶片、幼嫩茎段为材料,研究了不同因素对红王子锦带愈伤组织诱导的影响。结果表明:愈伤组织诱导和增殖的最佳培养基为MS1;附加激素组合为NAA1.0 mg/L 6-BA3.0 mg/L时,愈伤质地紧实,颜色鲜艳,且伴有不定芽分化;以室内叶背面向上和幼嫩茎段纵切面向上接种时,愈伤组织诱导率可达95%以上,生长良好;暗培养25 d后再进行光培养可以提高愈伤组织诱导速度和愈伤质量。     

三尖杉无菌增殖培养技术的研究

对同一时期三尖杉(Cephalotaxus fortunei)取材以及不同时期取材的灭菌效果进行对比试验,结果表明带芽茎段取材时期以3月中旬为最佳,此时萌发的新梢污染率较低、存活率较高,以75%酒精浸泡1 min,0.1%HgCl2灭菌12 min处理,存活率最高为63.3%,达到较好的灭菌效果。不同培养基与激素组合对三尖杉茎段腋芽诱导及增殖培养效果的试验,结果表明:6-BA质量浓度对带芽茎段启动速度、芽体诱导率影响极显著,改良MS+6-BA3.0 mg.L-1+IBA0.5 mg.L-1为三尖杉带芽茎段启动培养芽体分化的最佳培养基组合,芽体诱导率为82.8%;改良MS+6-BA2.0 mg.L-1+IBA0.2 mg.L-1为增殖培养最佳培养基组合,增殖系数为3.9。     

黄芪多糖的提取工艺及含量测定研究

[目的]研究黄芪根中多糖的含量。[方法]采用分光光度法测定膜荚黄芪中多糖的含量,以葡萄糖为对照品,以苯酚-浓硫酸为显色剂,在波长486 nm处测定样品溶液的吸光度。[结果]标准曲线为A=51.654C＋0.0372,r=0.9998,RSD1为1.28%,RSD2为1.50%。[结论]该方法操作简单,灵敏度高。     

外源刺激物质对茶树扦插繁殖的影响研究

采用6种外源刺激物质3种浓度的两因素完全随机设计,研究各因素及其组合处理对茶树扦插繁殖的6个生长性状的影响,并运用主成分分析法对各组合处理的育苗效果进行了综合评价。结果表明:2个主因素中,外源刺激物质种类对茶树扦插繁殖的部分性状有显著影响,而外源刺激物质浓度对茶树扦插繁殖的6个生长性状无显著影响;6种外源刺激物质中,IBA处理在存活率、生根率、最长不定根长、平均根长、不定根数量等性状上表现最佳,为其扦插育苗的理想生根剂,GA_3处理总体效果最差,不宜用于其扦插育苗;外源刺激物种类×浓度交互效应对存活率有显著影响,最佳浓度因外源刺激物质种类而异。主成分综合评价表明,100 mg/L IBA处理为最佳组合。     

生物药剂防治两色绿刺蛾的研究

应用浸渍法选用5种不同浓度的白僵菌和苏云金杆菌,分别对两色绿刺蛾2龄初幼虫进行致病力测定,结果表明：白僵菌对2龄初幼虫致病力回归线方程为y=3.2363＋0.2729x,其LC50为2.90×106孢子.ml-1,且5×10^6、5×10^7、5×10^8、5×10^9、5×10^10孢子.ml-1不同浓度的LT50分别为8.62d、7.72d、7.25d、6.07d和5.66d。苏云金杆菌对2龄初幼虫致病力回归线方程为y=3.2889＋0.2919x,其LC50为7.28105伴孢晶体.ml-1,且8×106、8×107、8×108、8×109、8×1010伴孢晶体.ml-1不同浓度的LT50分别为7.62d、5.87d、4.84d、4.33d和4.21d。根据正交试验均值最大值的组合原理,混合生物药剂的最佳组合为c1b2a3,即1%阿维菌素5000倍液＋白僵菌20倍液＋苏云金杆菌3000倍液;而混合生物与化学药剂的最佳组合为A1C2B2,即20%杀灭菊酯8000倍液＋1%阿维菌素10000倍液＋白僵菌20倍液,经林间应用防治效果较好。     

3种免疫增强剂对黄颡鱼非特异性免疫机能的影响

[目的]研究酵母细胞壁、黄芪多糖、芪参散这3种免疫增强剂对黄颡鱼非特异性免疫功能的影响,为其在水产养殖中的推广和应用提供参考。[方法]制备含有不同剂量酵母细胞壁、黄芪多糖、芪参散药饵连续投喂42天,并在试验的0、7、14、28天检测黄颡鱼血清的非特异性免疫指标,分析其对黄颡鱼免疫功能的影响。[结果]酵母细胞壁、黄芪多糖、芪参散这3种免疫增强剂对黄颡鱼血清补体C3、SOD、溶菌酶、血清白蛋白均有不同程度提高。免疫攻毒试验表明3种免疫增强剂均有一定的免疫保护作用,其大小次序为:酵母细胞壁组黄芪多糖组芪参散组,其中2和4 g/kg的黄芪多糖和酵母细胞壁组保护率最高,为50%。[结论]饲料中添加酵母细胞壁、黄芪多糖和芪参散均对黄颡鱼的非特异性免疫功能具有一定的促进作用。     

黄芪多糖提取及对小叶杨幼苗叶绿素含量的影响

[目的]研究黄芪多糖最佳提取工艺,及其对小叶杨幼苗叶绿素含量的影响.[方法]运用水煎法提取黄芪多糖,采用固液比、提取溶剂、提取温度和提取时间4个试验条件,进行单因素试验,并利用正交试验设计对提取工艺进行优化,所得黄芪多糖处理小叶杨幼苗,探究黄芪多糖对其叶绿素含量的影响.[结果]单因素试验最终获得最佳提取工艺为以5％醇碱为提取溶剂,固液比为1∶15,提取温度为60℃,提取1.5h.正交试验得出优化提取工艺为以5％醇碱为提取溶剂,固液比为1∶10,提取温度为60℃,提取1.0h.10 mg/ml的黄芪多糖能够显著提高小叶杨叶绿素a和总叶绿素的含量,而0.1 mg/ml黄芪多糖能够显著提高小叶杨叶绿素b的含量.[结论]黄芪多糖能够提高植物叶绿素含量,进而促进植物的生长发育.     

北方地区养分调控对蒙古黄芪生长及药用成分的影响

大田试验条件下,通过N、P、K单因素试验和L9(3^4)正交试验,分析1年生蒙古黄芪在不同因子水平及多因子配施下植株表观生长量(株高、地径、根粗、根长、地上鲜质量、地下鲜质量、冠根比)和根系药用成分(毛蕊异黄酮苷、刺芒柄花苷、毛蕊异黄酮、多糖)质量分数变化。结果表明:不同氮素水平,N3的株高、根粗(R0,R1)、地下鲜质量与N2差异不显著,但显著高于N1和CK(P<0.05),N2的毛蕊异黄酮苷、刺芒柄花苷、毛蕊异黄酮质量分数显著最高,多糖却最低(P<0.05)。不同磷素水平,除根长、冠根比外,其他表观生长量差异不显著(P>0.05);P3的毛蕊异黄酮苷质量分数显著最高,毛蕊异黄酮和多糖质量分数P2显著较高(P<0.05)。不同钾素水平下,株高、地上鲜质量表现为K2与K3差异不显著,但显著高于K1和CK(P<0.05),根粗、地下鲜质量、多糖质量分数K2显著高于其他处理(P<0.05),其他药用成分差异不显著(P>0.05)。N、P、K配施条件下,株高、根粗(R1)、地下鲜质量主要受N素影响显著,而根长生长受K素的影响最为显著;毛蕊异黄酮苷和刺芒柄花苷质量分数受N、K元素影响显著,而多糖质量分数受N、K、P影响均达显著水平(P<0.05),影响效果由大到小的顺序为N、K、P。单元素施肥时, N2、P2、K2对蒙古黄芪植株生长及药用成分积累均有显著促进作用;三元素配施时,处理5(N2P2K3)有利于蒙古黄芪植株生长及根系多糖积累,而处理9(N1P2K2)有利于黄酮类物质的积累;建议种植生产中,根据目标收获物进行定向施肥管理。     

板蓝根多糖的制备及其对鸡新城疫Lasota疫苗的免疫效果研究

[目的]研究自制的板蓝根多糖对鸡新城疫弱毒疫苗的免疫效果.[方法]将120只健康从肉仔鸡随机分为板蓝根多糖组、黄芪多糖组以及生理盐水对照组,研究板蓝根多糖对鸡新城疫Lasota疫苗的免疫增强作用.[结果]板蓝根多糖组和黄芪多糖组鸡NDV血凝抑制抗体滴度差异不显著,而板蓝根多糖组和黄芪多糖组鸡的免疫器官指数都显著高于生理盐水对照组.[结论]制备的板蓝根多糖可以用作鸡新城疫弱毒疫苗的免疫增强剂.     

紫心甘薯新品种徐紫薯3号配套高效栽培技术

通过正交试验研究徐紫薯3号在9种处理条件下的产量、干物率与花青素含量的变化,为实现该品种的高效栽培提供依据。采用正交试验L9(34),试验因素包括密度(A)、钾肥(K2O)(B)、栽期(C),以及1个密度与钾肥的交互作用因素(A×B),而试验水平则是各个单因素对应下的3种水平。完全随机区组排列,共设9个处理小区,每个处理3次重复,四周有保护行。分别对产量、干物率和花青素含量进行调查,每个重复处理进行2次重复,共计6次重复试验。结果表明,徐紫薯3号的干物率和花青素含量的优组合分别为A3B1C1和AnB3C2(n=1、2或3),并且产量与花青素含量间表现为极显著正相关。为更好地提高徐紫薯3号的产量和花青素含量,选取组合A3B3C2,即密度为60 000株/hm2、钾肥为300kg/hm2、栽期为6月7日左右,作为优组合栽培措施应用于徐紫薯3号的田间生产。     

微波技术在板蓝根多糖提取中的应用

通过正交试验确定微波处理的最佳工艺参数，用水煎煮提取板蓝根多糖，用苯酚－硫酸比色法测定多糖含量。结果表明，微波处理后，板蓝根粗多糖得率达到33．062％，多糖质量分数达到75．211％，优于单独使用水煎煮法。微波处理板蓝根的最佳工艺参数水侵泡1h，微波功率480W，处理时间6min，此工艺参数下，多糖得率和含量均明显提高。     

黄芪多糖除蛋白质方法与条件优化

为研究Sevag法除黄芪粗多糖中蛋白质的最佳条件,并比较Sevag法和反复冻融法的除蛋白质效果,采用单因素试验方法,研究不同溶剂比例、用量、处理时间对蛋白质去除的影响。结果显示,Sevag法除蛋白质最佳条件为氯仿：正丁醇=4：1,多糖溶液：Sevag试剂=2：1,搅拌时间为25min。Sevag法与反复冻融法除蛋白质的最适次数为4次,前者除蛋白质的效果优于后者,从而优化了去除黄芪粗多糖中蛋白质的方法,可为黄芪多糖的研究与生产提供技术参考。