2株红树内生真菌共培养产生的甾醇类化合物的分离鉴定

将来自南海红树林的内生真菌E33和K38混合发酵共培养,从菌丝体中分离到9种代谢产物,利用波谱技术确定它们为:24-甲基胆甾-5,24(28)-二烯-3β,15β,19-三醇(化合物1)、24-甲基胆甾-5,24(28)-二烯-3β,19-二醇(化合物2)、3β,11α-二羟基麦角甾-8,24(28)-二烯-7-酮(化合物3)、(22E,24R)-麦角甾-5,22-二烯-3β-羟基-7-酮(化合物4)、(22E,24R)-6β-甲氧基麦角甾-7,22-二烯-3β,5α-二醇(化合物5)、22E,24R-25α,6α-环氧麦角甾-8(9)22-二烯-3β,7α-二醇(化合物6)及麦角甾醇、过氧化麦角甾醇和(22E,24R)-麦角甾-7,22-二烯-3β,5α,6β-三醇,其中化合物1、2为首次从海洋红树林真菌里分离得到.化合物1～6以往未从单独发酵的两菌中分离得到.     

去氢表雄酮生物转化及产物的波谱学结构表征

利用毛霉516对去氢表雄酮进行生物转化,得到三个转化产物。利用IR、ESI-MS 2D NMR等波谱方法检测化合物结构,确证其分别为3β,7α-二羟基-雄甾-5-烯-17-酮(2)、3β-羟基-雄甾-5-烯-7,17-二酮(3)和3β,7α,17β-三羟基-雄甾-5-烯(4)。通过DEPT和~1H-~1HCOSY,HSQC,HMBC等2D NMR技术对产物~(13)C NMR数据进行了全归属,详细地解析了化合物4的结构。     

林生毛霉对孕甾烯醇酮的生物转化研究

利用林生毛霉对孕甾烯醇酮进行生物转化,得到了三个转化产物。经波谱学方法(IR、MS和2D NMR)分别鉴定为3β,7α-二羟基孕甾-5-烯-20-酮(2)、3β,7α,11α-三羟基孕甾-5-烯-20-酮(3)和3β,7α,9α-三羟基孕甾-5-烯-20-酮(4)。通过2D NMR技术对产物13C NMR数据进行了全归属,详细地解析了化合物4的结构。     

海南油楠叶的化学成分

[目的]明确海南油楠叶的化学成分。[方法]采用硅胶柱色谱对海南油楠叶的正己烷提取物和醋酸乙酯提取物进行分离,根据理化性质及波谱分析确定结构。[结果]分离得到9个化合物,鉴定为木栓酮(1)、3β-3-壬氧基-12-齐墩果烯(2)、8R,9R-环氧-β-石竹烯(3)、蒲公英萜醇(4)、豆甾烷-5烯-3-醇(5)、麦角甾-5-烯-3-醇(6)、2α,3β,-二羟基-24-去甲基-4(23)-12-齐墩果烯(7)、齐墩果酸(8)和邻苯二甲酸二戊酯(9)。[结论]化合物1~9均为首次从该植物的树叶中分离得到。     

亚稀褶黑菇的化学成分研究

利用硅胶、RP-18和Sephadex LH-20等现代色谱分离手段,从亚稀褶黑菇(Russula sub-nigricans Hongo)子实体的甲醇提取物中分离纯化得到4个甾醇类化合物,1个神经酰胺类化合物,通过理化性质、波谱分析及与文献值分析对照,鉴定出它们分别是麦角甾-5,22-二烯-3β-醇、麦角甾-7-烯-3β-醇、5α,8α-过氧化麦角甾-6,22-二烯-3β-醇、麦角甾-3β,5α,9α-三羟基-7,22-二烯-6-醇、(2S,3S,4R,2′R)-2-(2′-hydroxytetracosanoylamino)octadecane-1,3,4-triol。     

3β,7α,11α-三羟基-孕甾-5-烯-20-酮-20-肟的合成

利用毛霉516对孕甾烯醇酮进行生物转化,得到了两个转化产物。通过IR、MS、1HNMR、13CNMR和2DNMR等波谱方法检测化合物结构,确证其结构分别为3β,7α,11α-三羟基-孕甾-5-烯-20-酮(2)和3β,7α,-二羟基-孕甾-5-烯-20-酮(3)。对生物转化产物(2)进行化学修饰,得到一个新化合物,通过波谱学方法,确证其结构为3β,7α,11α-三羟基-孕甾-5-烯-20-酮-20-肟(4)。     

一株苦槛蓝内生真菌Trichoderma sp.09抗植物病菌产物的研究

从一株苦槛蓝内生真菌Trichoderma sp.09中寻找有抗植物病原菌活性的化合物,利用硅胶柱层析分离到6个化合物,用波谱技术分别鉴定为N-2’-羟基-3'E-十八碳烯酰基-1-O-β-D-吡喃葡萄糖基-9-甲基-4E,8E-sphingadiene (1),(4E,8E)-1-O-(β-D-吡喃葡萄糖)基-2-(2’-羟基-(E)-3’-十七碳烯酰胺)-3-羟基-9-甲基-4,8-十九碳二烯(2),麦角甾-7,24(28)-二烯-3β-醇(3),胆甾-4-烯-3-醇(4),正癸酸甲酯(5),正十六碳酸甲酯(6).化合物1、2为首次从Trichoderma sp.中分离得到,生测结果表明,在0.5μmol/mL浓度下化合物1对小麦赤霉、香蕉炭疽和柑橘青霉有中度抗菌活性,化合物2对小麦赤霉、香蕉炭疽有中度抗菌活性,对柑橘青霉具有轻度抗菌活性.     

HPLC法分离狐尾葛甾体成分研究

[目的]研究狐尾葛的化学成分。[方法]系统溶剂萃取及硅胶柱层析后,HPLC纯化获得单体,通过特征反应及波谱数据鉴定化合物的结构。[结果]从狐尾葛中分离鉴定了2个甾体类化合物,即6-羟基-豆甾-4-烯-3-酮（I）和6-羟基-豆甾-4,22（E）-二烯-3-酮（II）。[结论]化合物I、II均首次从该植物中分离得到。     

火木层孔菌的脂溶性成分

采用硅胶柱层析法进行分离纯化,从火木层孔菌(Phellinus igniarius)子实体的石油醚提取物和氯仿提取物中得到6种化合物.根据波谱数据,化合物1-6结构分别被鉴定为:9,12-十八烷二烯酸甲酯、3-酮-环菠萝蜜烷、麦角甾-4,6,8,22-四烯-3-酮、麦角甾醇过氧化物、麦角甾-7,22-二烯-3-酮和啤酒...     

木蹄层孔菌子实体的化学成分分析

采用硅胶柱、Sephadex LH-20凝胶柱、半制备高效液相等色谱方法对木蹄层孔菌子实体中的化合物进行分离纯化,并通过核磁波谱数据结合理化性质鉴定化合物结构,采用Ellman法测定化合物抑制乙酰胆碱酯酶活性、PNPG法测定α-葡萄糖苷酶抑制活性、DPPH法清除DPPH自由基抗氧化活性和96孔板微量法测定抑菌活性。从木蹄层孔菌子实体乙酸乙酯萃取部分分离得到11个化合物,分别鉴定为:3,4-二羟基苯甲酸乙酯(1)、3,4-二羟基苯甲醛(2)、4-(3,4-二羟苯基)-3E-丁烯-2-酮(3)、2,4-二羟基-3,5-二甲基苯乙酮(4)、对羟基苯甲醛(5)、4-羟基苯乙酮(6)、麦角甾-7,22-二烯-3β-醇(7)、麦角甾-7,22-二烯-3-酮(8)、4-(4-羟基苯基)-3E-丁烯-2-酮(9)、1,5-2(3,4-二羟基苯基)-1,4-戊二烯-3-酮(10)、3,4-二羟基苯乙酮(11)。活性测试结果表明:化合物2,10,11具有α-葡萄糖苷酶抑制活性,化合物3,4,9,10,11具有乙酰胆碱酯酶抑制活性,化合物1～11均有DPPH自由基清除活性,化合物10具有抑菌活性。     

网师园古树树体现状和症状及保护技术措施研究

调研了网师园现存古树的生长现状与病状,得知网师园现有古树6株,分别属5科5属,树龄为120～920年。网师园古树总体得到了一定的保护,6株古树中树势生长正常,只需进行常规管理的古树有3株,分别为白皮松、罗汉松、紫藤（殿春簃南庭院）;需要重点保护的古树有3株,分别为木瓜、圆柏、紫藤,其中树干需要进行防腐、填充保护措施的古树有2株,需进行树势复壮综合技术措施的古树有1株。基于需重点保护的3株古树的病症,笔者提出木瓜的保护措施为：①清理、消毒洞穴,涂抹防腐蚀保护剂,②填补洞穴,③封实洞口;紫藤的保护措施为：①清理腐烂木质部,②对树干进行防腐消毒处理,③涂抹防腐保护剂;圆柏的保护措施为：①清除附属攀缘植物,②清理腐烂木质,③填补洞穴,④改良根际环境及树体复壮。     

药用园林植物紫萼的化学成分

百合科玉簪属的紫萼 （Ｈｏｓｔａｖｅｎｔｒｉｃｏｓａ）常应用于园林造景、美化绿地,也是常用的室内观赏植物。作为一种药用植物,紫萼主要用于治疗吐血、崩漏、湿热带下、咽喉肿痛、胃痛、牙痛等。为全面了解和综合利用紫萼资源,笔者对其全草的化学成分进行了研究。运用 Ｄ１０１大孔树脂、ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ－２０和硅胶等柱层析及半制备 ＨＰＬＣ等分离手段,对其化学成分进行了分离纯化,根据波谱数据对其结构进行了鉴定。从紫萼７０％甲醇提取物中分离得到 ６个化合物,分别鉴定为 α－羟基香荚兰乙酮 （１）,７－羟基香豆素 （２）,反式对羟基桂皮酸 （３）,（２５Ｒ） －２α,３β－二羟基 －５α－螺甾 －９（１１） －烯 －１２－酮 （４）,（２５Ｒ） －２α,３β－二羟基 －５α－螺甾 －９（１１） －烯 －１２－酮 ３－Ｏ－ ｛Ｏ－β－Ｄ－吡喃葡萄糖基 － （１→２） －Ｏ－ ［β－Ｄ－吡喃木糖基 －（１→３）］ －Ｏ－β－Ｄ－吡喃葡萄糖基 － （１→４） －β－Ｄ－吡喃半乳糖苷｝ （５）和 （２５Ｒ） －３β－羟基 －５α－螺甾 －９（１１） －烯 －１２－酮 ３－Ｏ－ ｛Ｏ－β－Ｄ－吡喃葡萄糖基 － （１→２） －Ｏ－ ［β－Ｄ－吡喃木糖基 － （１→３）］ －Ｏ－β－Ｄ－吡喃葡萄糖基 － （１→４） －β－Ｄ－吡喃半乳糖苷｝ （６）。这些化合物均为首次从该种植物中分离得到。     

木瓜挥发物的分析及其对桔小实蝇的触角电位反应

木瓜是桔小实蝇的寄主植物,采用气质联用仪测定了木瓜果实挥发性物质组成,并测定了其对桔小实蝇的触角电位反应。结果表明,鉴定出的木瓜果实挥发性物质主要有7种,物质名称和含量如下:α-法呢烯(37.93%)、里那醇(30.08%)、朱栾倍半萜(18.04%)、氢-吡喃-2,6-(3氢)-二酮(8.48%)、反-2-癸烯醛(3.42%)、朱栾倍半萜1(1.03%)、大根香叶烯(1.02%)。桔小实蝇雌雄成虫在交配前后均对反-2-癸烯醛产生较强的触角电位反应,而对α-法呢烯,朱栾倍半萜,大根香叶烯和里那醇的触角电位反应值则因成虫性别及交配前后而有所不同。     

砂地柏果实中2种二萜类杀虫活性成分的分离

以粘虫幼虫为试虫,采用活性跟踪法,从砂地柏(SabinavulgarisAnt.)果实中分离出2种二萜化合物,经MS,1HNMR和13CNMR鉴定为4-表-松香醛和7,13-松香二烯-3-酮。活性测试结果表明,0.005g/mL4-表-松香醛和7,13-松香二烯-3-酮对3龄粘虫均具有较强的拒食及一定的毒杀活性。     

杭州市绿地中常见园林树种果实引鸟特征研究

  目的  分析果实特性,探究鸟类取食行为与秋冬季食源树种果实特性的相关性,为城市引鸟植物景观营建和生物多样性规划提供理论支撑。  方法  定点定时对鸟类取食行为进行周期性观测记录,根据前期观测结果,选择鸟类最为喜好的10种常见园林树种,拍照记录其果实所处的环境和果实形态变化,检测被取食期间果实的可滴定酸、可溶性糖、淀粉和可溶性蛋白的质量分数,并进行相关性分析。  结果  果实所处植物空间可分为3类:①常绿且枝硬舒展,区分明显内外空间;②常绿且枝软密集,稍区分内外空间等;③落叶且枝硬舒展,不区分内外空间。果实所处植物空间特征的安全隐蔽性和起落便捷性会直接影响鸟类是否倾向于取食该果实,同时果实空间环境的内部特点会影响鸟类取食该果实的方式,针对枝软且复杂逼仄的环境,体形较大的鸟类例如领雀嘴鹎Spizixos semitorques等会选择停留于植物顶部取食,体形较小的鸟类例如大山雀Parus major等会选择进入植物内部取食。果实的形态变化特征可分为2类:①果实形态在果熟后60 d内基本不变;②果实形态在果熟后60 d内随时间增加而逐渐枯萎。其果实挂果状态会影响鸟类的取食倾向,新鲜饱满的果实对鸟类更具吸引力,挂果状态保持较差的树种如垂丝海棠Malus halliana等只在果实成熟的早期阶段被白头鹎Pycnonotus sinensis取食,挂果状态保持良好的树种如樟树Cinnamomum camphora等则被白头鹎和乌鸫Turdus merula长期持续取食。果实的内含物会影响鸟类的取食倾向,含糖量高的果实更易吸引白头鹎和乌鸫,白头鹎更倾向于酸质量分数较高的果实而乌鸫更倾向于蛋白质质量分数较高的果实。  结论  为了提升城市绿地中的鸟类多样性,应保证食源树种种植位置的隐蔽性,重点选择具有较好挂果状态保持能力和较高含糖量的常绿高大乔木作为其食源树种。图9表5参27     

海洋真菌Aspergillus sp. SCS-KFD03的化学成分分析

为了研究海洋真菌Aspergillus sp.SCS-KFD03次级代谢产物的活性成分,采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱和高效液相色谱等技术从其发酵液中分离得到7个化合物,运用各种波谱方法鉴定为3β,5α-dihydroxy-(22E,24R)-ergosta-7,22-dien-6-one(1);3β,4α-dihydroxy-26-methoxyergosta-7,24(28)-dien-6-one(2);麦角甾醇(22E,24R)-ergosta-5,7,22-trien-3β-ol(3);leporin B(4);astellolide G(5);astellolide B(6)和astellolide A(7),并测定化合物的抗氧化活性、乙酰胆碱酯酶和α-糖苷酶抑制活性。结果表明:化合物2,3,5和6具有一定的抗氧化活性,化合物2具有较弱的乙酰胆碱酯酶抑制活性,化合物4具有强于阳性药阿卡波糖的α-糖苷酶抑制活性。     

海洋来源杂色曲霉次级代谢产物及其抗植物病原细菌活性

【目的】针对植物细菌病害日趋严重,并缺少有效防治药剂的问题,从前期筛选获得的具有抗菌活性且次级代谢产物丰富的海洋杂色曲霉（Aspergillus versicolor）D5发酵提取物中分离纯化单体化合物,分析鉴定其化学结构,并进行抗菌活性评价,阐明目标真菌的抗菌活性成分,为新颖结构抗细菌生物农药的研发提供先导化合物。【方法】综合运用正/反相硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析和半制备高效液相色谱（HPLC）等方法分离纯化单体化合物,采用核磁、质谱等现代波谱分析方法对单体化合物进行结构鉴定;采用微量稀释法对化合物进行抗6种植物病原细菌燕麦食酸菌（Acidovorax avenae）、胡萝卜软腐欧文氏菌（Erwinia carotovora）、密执安棒形杆菌（Clavibater michiganensis）、丁香假单胞菌（Pseudomonas syringae）、青枯雷尔氏菌（Ralstonia solanacearum）和野油菜黄单胞菌（Xanthomonas campestris）活性评价,获得活性化合物的最小抑菌浓度（MIC）。【结果】从海洋杂色曲霉D5马铃薯葡萄糖液体发酵培养基乙酸乙酯提取物中分离鉴定了12个化合物,包括4个2-羰基-4-苯基喹啉生物碱,viridicatin（1）、3-O-methylviridicatin（2）、3,6-O-dimethylviridicatin（3）和3-O-methylviridicatol（4）;2个双氧代哌嗪生物碱,（+）-cyclopenol（5）和（-）-cyclopenol（6）;3个喹唑啉fumiquinazolines生物碱及其衍生物,versicoloid A（7）、chrysopiperazine C（8）和cottoquinazoline A（9）;以及3个蒽醌类化合物,versiconol（10）、averufin（11）和noraverufanin（12）。抗菌活性结果表明,2-羰基-4-苯基喹啉生物碱3,6-O-dimethylviridicatin（3）具有显著的抗植物病原细菌活性,对青枯雷尔氏菌和野油菜黄单胞菌的MIC分别为50和100 μg·mL^-1。初步的构效关系分析表明,C-6位置的甲氧基可能是该类化合物发挥抗植物病原细菌作用的关键基团。【结论】海洋杂色曲霉D5代谢产物丰富,能够产生结构多样的生物碱和蒽醌类化合物。从其发酵产物中分离鉴定了9个生物碱类化合物和3个蒽醌类化合物,其中3,6-O-dimethylviridicatin（3）对青枯雷尔氏菌和野油菜黄单胞菌具有显著的抗菌活性,有开发成为抗细菌生物农药的潜力。     

The Influence of Co-Suppressing Tomato 1-Aminocyclopropane-1-Carboxylic Acid Oxidase Ⅰ on the Expression of Fruit Ripening-Related and Pathogenesis-Related Protein Genes

The purpose of this study is to explore the influence of co-suppressing tomato ACC oxidase I on the expression of fruit ripening-related and pathogenesis-related protein genes, and on the biosynthesis of endogenous ethylene and storage ability of fruits. Specific fragments of several fruit ripening-related and pathogenesis-related protein genes from tomato (Lycopersicon esculentum) were cloned, such as the 1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid oxidase 1 gene (LeACO1), 1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid oxidase 3 gene (LeAC03), EIN3-binding F-box 1 gene (LeEBF1), pathogenesisrelated protein 1 gene (LePR1), pathogenesis-related protein 5 gene (LePR5), and pathogenesis-related protein osmotin precursor gene (LeNP24) by PCR or RT-PCR. Then these specific DNA fragments were used as probes to hybridize with the total RNAs extracted from the wild type tomato Ailsa Craig (AC++) and the LeACO1 co-suppression tomatoes (V1187 and T4B), respectively. At the same time, ethylene production measurement and storage experiment of tomato fruits were carried out. The hybridization results indicated that the expression of fruit ripening-related genes such as LeACO3 and LeEBF1, and pathogenesis-related protein genes such as LePR1, LePR5, and LeNP24, were reduced sharply, and the ethylene production in the fruits, wounded leaves decreased and the storage time of ripening fruits was prolonged, when the expression of LeACO1 gene in the transgenic tomato was suppressed. In the co-suppression tomatoes, the expression of fruit ripening-related and pathogenesis-related protein genes were restrained at different degrees, the biosynthesis of endogenous ethylene decreased and the storage ability of tomato fruits increased.     

中国沙棘果实黄酮成分的研究

从中国沙棘Hippophae rhamnoides L. subsp. sinensis Rousi果实中分到3种黄酮化合物,经光谱法和化学反应分别鉴定为槲皮素(quercetin,1),山奈酚(Kaempferol,2)和芦丁(rutin,3).