红车轴草异黄酮的生理及药理作用的研究进展

红车轴草所含异黄酮成分,以鹰嘴豆芽素A(Biochanin A)、芒柄花素(Formononetin)、染料木素(Genistein)、大豆素(Daidzein)等4种为主,对近年来国内外关于红车轴草异黄酮的生理及药理作用的相关研究报道进行了分析整理,表明红车轴草异黄酮具有弱的雌激素样作用、防止骨质疏松、抗癌、促进动物生长、抗氧化、提高机体免疫力等多种药理作用.但是,在对妇女更年期综合症等研究中得出的结论有不同之处,有待深入研究.     

芒柄花素对大鼠血压和心电的影响

芒柄花素(Formononetin)是从豆科植物三叶草中分离提纯得到的一种植物雌激素类物质,属异黄酮类化合物。芒柄花素和其它异黄酮类物质对家畜繁殖力有明显作用,对生长发育及泌乳的影响,也开始引起注意。本研究室发现,芒柄花素对离体蟾蜍心脏有强心作用。为了解芒柄花素对于哺乳动物心血管系统的作用及其机制,作者对大鼠进     

紫雀花清除自由基活性研究

探究紫雀花(Parochetus communis)不同溶剂提取物及主要异黄酮的体外抗氧化活性。采用清除DPPH·法测定紫雀花石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水提物以及芒柄花苷、刺芒柄花素、维生素C的体外抗氧化活性。紫雀花的乙酸乙酯(IC_(50)=0.016 2 mg/m L)和正丁醇提取物(IC_(50)=0.045 9 mg/m L)显示显著的抗氧化活性,水提物其次,石油醚提取物最差;乙酸乙酯提取物的主要异黄酮刺芒柄花素和正丁醇提取物的主要异黄酮芒柄花苷的抗氧化活性微弱。紫雀花乙酸乙酯和正丁醇提取物具有显著的抗氧化活性,而主要异黄酮刺芒柄花素和芒柄花苷不是两个提取物清除DPPH·的有效活性成分。     

茉莉酸甲酯和水杨酸对膜荚黄芪芒柄花苷积累的影响

芒柄花苷为黄芪中黄酮类化合物的代表成分，有促进皮肤生长、增强免疫力等功效。不定根培养是获取植物活性成分的有效途径之一。该研究以膜荚黄芪不定根为材料，研究了茉莉酸甲酯(MeJA)和水杨酸(SA)对芒柄花苷积累的影响。结果表明：MeJA处理显著增加了芒柄花苷的积累，最佳条件为向培养32 d的不定根中加入0.2 mmol/L MeJA、处理6 d,与对照相比增加了540%;SA处理虽然不能直接诱导芒柄花苷积累，但0.1 mmol/L的SA有助于MeJA诱导芒柄花苷的积累，较MeJA单独处理提高了39%。     

野葛异黄酮糖苷的分离纯化及体外清除自由基活性的研究

以野葛的根样为试材,依次通过总黄酮提取、有机溶剂分级分离和柱色谱法进行分离纯化,获得4种异黄酮糖苷组分,依据核磁共振谱和质谱分析结果分别鉴定为葛根素、大豆苷、芒柄花苷和染料木苷。采用1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH·)的有机自由基体系和超氧阴离子(O2-·)的无机活性氧自由基体系,对上述4种异黄酮糖苷化合物的体外清除自由基能力和抗氧化活性进行测定。结果表明,4个异黄酮糖苷组分对DPPH·自由基和O2-·自由基均具有一定的清除活性,清除能力的大小与处理浓度均成正相关关系,对DPPH·自由基的清除效果由高到低依次为染料木苷、大豆苷、葛根素和芒柄花苷,抑制O2-·自由基能力由强到弱依次为葛根素、大豆苷、染料木苷和芒柄花苷。     

北方地区养分调控对蒙古黄芪生长及药用成分的影响

大田试验条件下,通过N、P、K单因素试验和L9(3^4)正交试验,分析1年生蒙古黄芪在不同因子水平及多因子配施下植株表观生长量(株高、地径、根粗、根长、地上鲜质量、地下鲜质量、冠根比)和根系药用成分(毛蕊异黄酮苷、刺芒柄花苷、毛蕊异黄酮、多糖)质量分数变化。结果表明:不同氮素水平,N3的株高、根粗(R0,R1)、地下鲜质量与N2差异不显著,但显著高于N1和CK(P<0.05),N2的毛蕊异黄酮苷、刺芒柄花苷、毛蕊异黄酮质量分数显著最高,多糖却最低(P<0.05)。不同磷素水平,除根长、冠根比外,其他表观生长量差异不显著(P>0.05);P3的毛蕊异黄酮苷质量分数显著最高,毛蕊异黄酮和多糖质量分数P2显著较高(P<0.05)。不同钾素水平下,株高、地上鲜质量表现为K2与K3差异不显著,但显著高于K1和CK(P<0.05),根粗、地下鲜质量、多糖质量分数K2显著高于其他处理(P<0.05),其他药用成分差异不显著(P>0.05)。N、P、K配施条件下,株高、根粗(R1)、地下鲜质量主要受N素影响显著,而根长生长受K素的影响最为显著;毛蕊异黄酮苷和刺芒柄花苷质量分数受N、K元素影响显著,而多糖质量分数受N、K、P影响均达显著水平(P<0.05),影响效果由大到小的顺序为N、K、P。单元素施肥时, N2、P2、K2对蒙古黄芪植株生长及药用成分积累均有显著促进作用;三元素配施时,处理5(N2P2K3)有利于蒙古黄芪植株生长及根系多糖积累,而处理9(N1P2K2)有利于黄酮类物质的积累;建议种植生产中,根据目标收获物进行定向施肥管理。     

HPLC-UV法测定经典名方当归补血汤中5种化学成分含量

本研究旨在建立高效液相色谱-紫外检测法,同时测定当归补血汤中阿魏酸、洋川芎内酯Ⅰ、毛蕊异黄酮苷、毛蕊异黄酮及芒柄花苷的含量。采用Diamonsil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇(B):0.4%甲酸水(A)梯度洗脱,检测波长280 nm。阿魏酸、洋川芎内酯Ⅰ、毛蕊异黄酮苷、毛蕊异黄酮和芒柄花苷分别在0.091～1.824、0.015～0.308、0.092～1.848、0.036～0.728、0.082～1.656μg/mL质量范围内线性关系良好,r> 0.999;定量限分别为0.091、0.015、0.092、0.036、0.082μg/mL;检测限分别为0.027、0.005、0.028、0.011、0.025μg/mL。该方法精密度、重复性、稳定性、加样回收试验的RSD均小于5%;回收率分别为99.68%、99.40%、100.24%、101.04%和100.88%。所建立的测定方法操作简单,分析灵敏快速,结果准确,可用于当归补血汤的含量测定及质量控制。     

基于HPLC法测定不同产地黄芪总黄酮和异黄酮的含量

[目的]探讨不同产地药材黄芪中总黄酮及异黄酮含量的差异。[方法]采用HPLC法测定了16个不同产地黄芪样品中总黄酮和4种异黄酮(毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素)的含量,比较其差异性,并采用主成分分析法进行分析。[结果]不同产地黄芪中总黄酮及4种异黄酮含量均存在差异,蒙古黄芪和膜荚黄芪中总黄酮和4种异黄酮含量差异不显著(P0.05)。16份样品中有5份样品的毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量符合药典不少于0.020%的要求。主成分综合得分结果显示,山西代县得分最高,其次为山西广灵、山西浑源泽清岭,且均为蒙古黄芪。SIMCA-P主成分分析可将16个不同地区的药用黄芪分为3类。[结论]膜荚黄芪与蒙古黄芪均可作为药材黄芪的基原物种。不同产地药材黄芪中总黄酮及异黄酮含量差异明显。应选择有效成分含量符合国家要求的地区进行黄芪的区域化种植。     

氮磷肥施用量对红三叶中异黄酮含量的影响

研究了氮磷肥施用量对岷山红三叶生育时期、不同生育时期青干草中异黄酮含量和各异黄酮组分的影响,以及不同生育时期红三叶青干草中异黄酮含量的变化动态。结果表明,氮磷肥分别使分枝期、现蕾期和成熟期最多推迟6、4和5 d。岷山红三叶全株中异黄酮含量分枝期最高(5.096μg/mg),随着生育时期推移,异黄酮含量呈下降趋势。A2B2(N 50 kg/hm2+P2O5120 kg/hm2)和A2B3(N 50 kg/hm2+P2O5240kg/hm2)为红三叶不同生育时期获得较高异黄酮含量的最佳施肥处理。氮磷肥施用量对岷山红三叶中各异黄酮组分有显著影响,刺芒柄花素和鹰嘴豆芽素A是岷山红三叶中2种主要的异黄酮组分。     

响应面法优化黄芪黄酮提取工艺的研究

为确定黄芪中黄酮类成分乙醇回流提取的最佳工艺条件,采用高效液相色谱法对4种黄芪黄酮(毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮苷、芒柄花素和芒柄花苷)的含量进行测定;以黄酮得率为指标,采用响应面法对主要工艺参数进行优化并得到回归模型。方差分析结果表明:回归模型较好地反映了黄芪黄酮得率与浸提时间、浸提温度、乙醇体积分数和液固比的关系;最优工艺条件为,提取温度75℃,提取时间2.5 h,乙醇体积分数88.3%,液固比25 mL/g。此工艺条件下提取黄芪黄酮得率为0.977 mg/g,回归模型的预测值与实测值的相对误差<1%,该回归方程与实际情况拟合较好。     

动物乳腺生物反应器研究进展

动物乳腺生物反应器拥有巨大的开发价值,利用转基因家畜的乳腺生产人类重组蛋白,可以获得安全而有效的药用蛋白。在此,在阐述乳腺生物反应器概念的基础上,探讨了乳腺生物反应器医用蛋白产品、载体构建以及转基因技术等方面的研究现状,并指出了乳腺生物反应器存在的主要问题,展望了发展前景,特别是指出了利用体细胞克隆技术生产乳腺生物反应器的优势及可能性。     

奶山羊乳腺上皮细胞系的建立

乳腺上皮细胞系的建立为乳蛋白基因表达调控机制的研究及乳腺表达载体的检测提供有利条件。本研究建立了正常培养的奶山羊乳腺上皮细胞系。利用胶原酶和透明质酸消化法从奶山羊乳腺组织中分离并获得了纯化的乳腺上皮细胞,利用细胞角蛋白18的免疫荧光染色对乳腺上皮细胞进行了鉴定。通过细胞生长曲线、群体倍增时间、细胞接种存活率、细胞活力检测等生物学性状的检测建立并鉴定了奶山羊乳腺上皮细胞系。结果表明,奶山羊乳腺上皮细胞在添加表皮生长因子、胰岛素样生长因子-1、转铁蛋白-硒钠、10%胎牛血清的DF12培养液中生长状态良好,细胞传至30代时仍保持旺盛的增殖活力。通过细胞传代及反复冻存和复苏实现了细胞系的长期保存,建立了乳腺上皮细胞系,获得了大量的乳腺上皮细胞。从而为开展奶山羊、奶牛等产奶动物乳腺生物反应器及泌乳机制的研究提供了便利条件。     

限饲对初情期小鼠乳腺发育的影响及机制

【目的】研究限饲对初情期小鼠乳腺发育的影响及机制,为动物乳腺发育的营养调控提供科学依据。【方法】选用24只4周龄C57BL/6雌性小鼠,分为对照组和限饲组。试验为期4周,每周称体质量并统计采食量和饮水量,在试验结束前对小鼠进行体成像和体组成检测。试验结束后采集小鼠乳腺并称质量。采集血液,测定血清中胰岛素样生长因子(IGF-1)和雌二醇(E2)的水平。采用Whole-mount染色观察小鼠乳腺发育情况,统计小鼠乳腺终末乳芽(TEB)和导管分支数量。利用免疫荧光染色检测乳腺组织中增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。【结果】限饲组小鼠体质量、体增质量、平均日采食量、平均日能量摄入均极显著低于对照组(P0.001),但其饮水量显著高于对照组(P0.05)。限饲对小鼠肌肉含量和脂肪含量无显著影响。限饲使小鼠的乳腺质量降低了29%(P0.05),对乳腺指数无显著影响。Whole-mount染色结果表明,限饲显著抑制初情期小鼠的乳腺发育,其乳腺组织的TEB数量和导管分支数量均显著低于对照组(P0.05)。此外,限饲对血清中E2水平无显著影响,但使血清中IGF-1水平降低了34%(P0.05)。限饲显著抑制了小鼠乳腺组织中PCNA蛋白的表达。【结论】限饲可显著抑制初情期小鼠乳腺发育,这可能与限饲可降低血清中IGF-1水平和乳腺组织中增殖相关蛋白PCNA表达有关。     

人乳铁蛋白基因乳腺特异性表达载体的构建及转染研究

构建了携带人乳铁蛋白(LTF)基因、绿色荧光蛋白(GFP)基因的乳腺特异性表达载体(pEBL),用脂质体法转染泌乳期莎能奶山羊乳腺上皮细胞,转染后于荧光显微镜下观察GFP表达情况。用G 418对转染细胞进行筛选,获得抗性细胞克隆,并对转染细胞进行PCR检测。结果显示,pEBL构建成功,转染6 h后可观察到细胞有GFP表达,PCR检测阳性克隆细胞转有LTF基因。表明pEBL载体已转染山羊乳腺上皮细胞,为进一步建立转基因动物乳腺生物反应器奠定了基础。     

内毒素对山羊乳腺组织中与乳腺炎相关的酶和细胞因子的影响

8只泌乳期的健康睢宁白山羊,产后72 h分别用内毒素和灭菌生理盐水经乳头管灌注左右侧乳房.灌注前及灌注后0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、24 h观察山羊整体及乳房局部变化.灌注24 h后,处死动物,取乳腺组织,部分用Bou in氏液固定,部分用液氮保存.临床症状及病理切片观察均显示,山羊表现典型的急性乳腺炎症状.检测两侧乳腺组织中部分与乳腺炎症相关因子的含量及其基因表达水平的结果表明:与灌注生理盐水对照相比,灌注内毒素侧乳腺组织中N-乙酰-β-D氨-基葡萄糖苷酶(NAGase)、髓过氧化物酶(MPO)、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)的活性及IL-1β、IL-6的含量极显著升高(P<0.01),TNFα-含量显著升高(P<0.05);相同条件下对2种处理组织样中3种细胞因子mRNA表达水平进行PCR扩增,灌注内毒素侧能检到明显的目的条带,对照侧未见明显的目的条带.     

光照对小鼠下丘脑视上核及乳腺组织钟基因Clock表达的影响

分析光照对泌乳期小鼠下丘脑视上核(SCN)及乳腺组织内生物钟基因Clock表达的影响.采用荧光定量RT-PCR法测定不同光照条件下SCN和乳腺组织中Clock基因的昼夜表达规律.试验发现Clock基因的mRNA不但在SCN,而且在乳腺组织也具有昼夜节律性表达.在光照-黑暗交替光制下,SCN和乳腺组织Clock基因的mRNA表达的峰值相位存在约6 h的相位差;在全黑暗条件下,Clock基因的mRNA表达存在昼夜节律,SCN和乳腺组织Clock基因的mRNA表达的峰值相位基本同步.结果显示,Clock基因的昼夜节律表达具内源性特征;光照影响Clock基因mRNA的表达.     

CpG-DNA对金黄色葡萄球菌诱导的乳腺炎大鼠的保护研究

【目的】建立金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）感染的大鼠乳腺炎模型，并观察CpG-DNA对乳腺的保护作用。【方法】18只雌鼠分3组(n=6)，产后72h分别灌注磷酸盐缓冲液（phosphate buffer solution，PBS）（C组）、2×105CFU•ml-1（L组）和2×1012CFU•ml-1 (H组)金葡菌到第四对乳腺内，24 h处死。L组乳腺病变轻微，H组腺泡结构破坏严重，并有大量嗜中性粒细胞（polymorphonuclear neutrophils，PMN）浸润；H组乳腺组织TNF-α、IL-6水平显著上升。选择2×1012CFU•ml-1为诱发剂量观察CpG-DNA对乳腺的保护作用：72只雌鼠分成对照和试验组(n=36)，对照组产后0 h肌注PBS；试验组肌注CpG-DNA，72 h后灌注金葡菌到第四对乳腺内。分别于灌注前（定义为0 h），灌注后8、16、24、48和72 h（n=6）处死。【结果】感染初期试验组乳腺腺泡内PMN较对照组浸润迅速。试验组乳腺组织白细胞介素-6（interleukine-6，IL-6）在16、24和48 h显著高于对照组。CpG-DNA能显著提高0、24和72 h乳腺组织肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）水平。试验组8、16和72 h的乳腺组织金葡菌数显著低于对照组。CpG-DNA能显著提高乳腺组织中其特异性受体TLR-9（toll-like receptor-9）mRNA表达水平。【结论】CpG-DNA对金葡菌感染诱发大鼠乳腺炎的乳腺有保护作用。     

LPS注射后小鼠乳腺中β-防御素1 mRNA表达的变化

为了研究β-防御素1(β-defensin 1,Defb1)基因在小鼠乳腺发生炎症反应时的表达变化,本试验以小鼠第4对乳腺组织为研究对象,用LPS诱导小鼠乳腺组织发生炎症,半定量RT-PCR法研究了小鼠乳腺中Defb1 mRNA表达的相对丰度。试验结果表明,与对照组相比,LPS诱导后各时期Defb1基因的表达量均显著增加(P<0.05),9 h时达到最高峰。     

麦洼牦牛乳腺上皮细胞系的建立及其生物学特性

为建立麦洼牦牛乳腺上皮细胞的体外培养方法,采用组织块贴壁法及Ⅰ型胶原酶消化法,从麦洼牦牛乳腺组织中成功分离并获得纯化的乳腺上皮细胞,并利用细胞角蛋白18的免疫荧光染色对乳腺上皮细胞进行鉴定。通过细胞生长曲线、群体倍增时间、细胞接种存活率、细胞活力等生物学特性的检测,建立并鉴定麦洼牦牛乳腺上皮细胞系。结果显示,乳腺细胞形态良好,细胞接种存活率达91%,群体倍增时间26.97h,细胞生长曲线呈典型"S"型,细胞传至25代以上仍保持旺盛的增殖活力。可见,通过对细胞传代及反复冻存和复苏已成功建立麦洼牦牛乳腺上皮细胞系,获得大量的乳腺上皮细胞,使麦洼牦牛物种在细胞水平上得以保存,为建立牦牛乳腺生物反应器及泌乳调控机制研究提供基础。     

microRNA在调节乳腺发育和乳腺免疫功能中的作用

miRNAs分子是除了激素之外对乳腺发育以及乳腺免疫功能进行调控的重要分子,综述了miRNAs在乳腺发育以及乳腺免疫中的最新研究进展。