奶牛流产病因探究及新孢子虫病PCR检测方法的建立

[目的]探究新疆某奶牛场奶牛流产病因.[方法]采集的19份血清样品和4份牛流产胎儿脑组织进行布氏杆菌病凝集实验、弓形虫PCR检测和新孢子虫病ELISA方法检测,参考GenBank登录的犬新孢子虫种Nc-5序列[1],设计引物,建立新孢子虫病的PCR检测方法.[结果]调查结果显示该牛场布氏杆菌病与弓形虫病感染均呈阴性,新孢子虫病感染率为14.3;(2/19).新孢子虫PCR诊断方法的最佳退火温度为57℃,灵敏度为35 pg/μL.用建立后的PCR方法检测流产胎儿,感染率为50.0;(2/4).[结论]新孢子虫病是导致该厂奶牛流产的重要原因之一,为今后新疆地区有效预防和治疗新孢子虫病提供了一定的科学依据.     

规模场奶牛新孢子虫病感染调查

本调查旨在初步了解安阳市奶牛新孢子虫病流行情况,于2017年3月至2017年9月应用ELISA技术对安阳市6个奶牛养殖场按20.0%随机采集438份血液样品进行奶牛新孢子虫病血清抗体检测。结果显示,418份血液样品中有63份检测为新孢子虫病血清抗体阳性,平均阳性率为15.07%,6个奶牛场血清抗体阳性率为8.06%～19.05%;不同年龄阶段奶牛新孢子虫病血清抗体阳性率存在一定差异,流产奶牛较未流产奶牛阳性率高。结果表明,奶牛新孢子虫病感染在安阳市广泛存在,应引起养殖户重视。     

奶牛新孢子虫病的巢式PCR诊断及ELISA检测

为确定焦作某奶牛场奶牛流产是否与新孢子虫感染有关,对采自该奶牛场流产奶牛的胎牛组织进行新孢子虫Nc5基因巢式PCR检测诊断,并用ELISA方法对该奶牛场不同年龄阶段奶牛血清样品进行新孢子虫抗体检测。结果显示,在4例流产胎牛样本中有3例检出新孢子虫DNA;新孢子虫血清抗体阳性率达44.80%(112/250),其中,经产奶牛阳性率为55.40%(77/139),未经产奶牛或犊牛阳性率为31.53%(35/111);经产奶牛中有流产史的阳性率为73.17%(30/41),其余未发生过流产的阳性率为47.96%(47/98)。综上推断,新孢子虫是导致该奶牛场奶牛流产的主要病原。     

奶牛乳清和血清中布氏杆菌抗体的检测

为探索动物布氏杆菌病自然感染与人工免疫的鉴别诊断方法,从免疫奶牛群采集血清和鲜乳,以半胱氨酸或2-巯基乙醇处理血清样本,以20%的胃蛋白酶消化分离乳清样本,用试管凝集试验检测布氏杆菌抗体,结果表明:血清和乳清样本的布氏杆菌抗体水平存在明显差异,血清抗体阳性率高迭61.7%(37/60),而乳清抗体阳性率仅为10.0%(6/60);乳清中布氏杆菌抗体效价比血清的低1～3个滴度.     

晋北地区奶牛布氏杆菌病发病情况调查及防控建议

奶牛布氏杆菌病是由布氏杆菌引起的一种人畜共患传染病,具有传染性强、传播速度快的特点。奶牛是布氏杆菌病最易感动物,近年来随着奶牛业的迅猛发展,人畜感染布氏杆菌的阳性病例明显增加,严重威胁着我国奶牛业的健康发展,并危害人类健康。晋北地区是山西省奶牛养殖密集区域,研究开展了晋北地区奶牛布氏杆菌病发病情况调查,确诊阳性率达到13.79%,远高于全国布氏杆菌感染阳性率(3.57%)。因此,加强对晋北区域布氏杆菌病的防控极为必要。     

贵州省家畜布氏杆菌病血清学检测

为了解贵州省各地区布氏杆菌病流行情况,采用试管凝集试验对部分地区牛血清(706份)、羊血清(180份)、猪血清(720份)共计1606份进行了试验检测.结果表明:牛阳性血清7份,阳性率0.99%(7/706);羊阳性血清2份,阳性率1.11%(2/180);猪阳性血清3份,阳性率0.42%(3/720).贵州部分地区存在布氏杆菌病感染的可能.     

吉林省西部地区牛新孢子虫病流行病学调查

为了解吉林省西部地区牛新孢子虫病的流行情况,应用ELISA试剂盒对采自吉林省西部地区洮南市、洮北区、通榆县、宁江区和乾安县等5个县市区共计208份牛血清样本进行了牛新孢子虫病抗体检测,并对不同地区、不同饲养方式、不同类别、不同性别及不同年龄段的208份牛血清样本进行了统计学分析。结果表明:不同地区之间通榆县与洮北区牛新孢子病抗体阳性率差异显著(P0.05),而其他地区之间差异不显著(P0.05);放养牛和圈养牛之间牛新孢子病抗体阳性率差异显著(P0.05);黄牛和肉牛之间牛新孢子病抗体阳性率差异不显著(P0.05);公牛与母牛之间牛新孢子病抗体阳性率差异不显著(P0.05);1~3岁牛和4~6岁牛之间牛新孢子病抗体阳性率差异显著(P0.05)。试验证实,吉林省西部地区也是牛新孢子病的流行地区,为吉林省西部地区牛新孢子病防控提供了科学的流行病学资料。     

NcSAG1和NcSRS2抗原检测羊和马罹患新孢子虫病的调查研究

为了调查巴州部分地区黑头羊和伊犁部分地区马新孢子虫病感染情况,运用Nc SAG1和Nc SRS2重组蛋白作为包被抗原,对采自巴州部分地区180份黑头羊血清样品和伊犁地区三个马场的270份血清样品进行了新孢子虫病r ELISA方法检测。检测结果显示:两种抗原检测出羊新孢子虫平均阳性率为16.94%,阳性符合率为84.85%;检测出马新孢子虫平均阳性率为9.81%,阳性符合率为82.76%。通过本次实验,基本掌握了当地部分牧场羊和马新孢子虫感染情况,为今后新孢子虫病的调查和预防提供了科学依据和理论支持。     

新疆天山马鹿布氏杆菌病流行病学调查

采用平板凝集试验、试管凝集试验对采自新疆3个集约化养殖鹿场、1个散养鹿群的410份血清样本进行布氏杆菌特异性抗体检测;采用分子生物学方法,根据Gen Bank公布的布氏杆菌外膜蛋白Omp25c的基因序列设计特异性引物,对疑似布氏杆菌阳性的10份羊水病料进行PCR扩增,并将扩增产物克隆到p GEM-T Easy Vector进行测序。结果表明,血清稀释比例为1∶25时,平板凝集试验、试管凝集试验的抗体阳性率分别为15.1%、14.6%,4份羊水样本的PCR扩增产物在1.2%琼脂糖凝胶上均观察到预期149 bp大小的扩增条带,BLAST比对分析显示该扩增序列与布氏杆菌基因组的核苷酸序列同源性为100%,从而判定新疆集约化养殖的天山马鹿存在布氏杆菌病的感染。     

新孢子虫病rELISA抗体检测试剂盒的应用

[目的]研发一种成熟稳定的新孢子虫病rELISA抗体检测试剂盒.[方法]在新孢子虫病rELISA检测方法建立的基础上,组装检测新孢子虫病的rELISA抗体检测试剂盒,对试剂盒的敏感性、保存期、特异性和重复性进行评价,并与两种商品化试剂盒进行对比试验,应用自制的试剂盒检测来自新疆各地州新孢子虫疑似病例区血清,共1329份.[结果]成功组装了新孢子虫病rELISA抗体检测试剂盒,且该试剂盒敏感性高、保存期长、特异性强、重复性较好.与两种进口商品化诊断试剂盒比较,其符合率均在90;以上.在1 329样品血清中157份是阳性,其平均阳性率为11.8;.[结论]该试剂盒可以取代商品化试剂盒进行新孢子虫病诊断,为新孢子虫病的防治工作提供技术和产品支撑.     

新疆部分地区奶牛(牦牛)流产病因分析研究

[目的]诊断分析和静县巴伦台镇牦牛与博乐市郊区奶牛流产病因.并以商品试剂盒检测结果为标准,对比常用犬新孢子虫病的诊断方法.[方法]分别使用N .caninum Antibody Test kit、自建rELISA检测方法和PCR检测方法,进行犬新孢子虫病检测.同时使用虎红平板凝集试验、试管凝集试验,检测该地区布鲁氏病流行情况.[结果]和静县巴伦台镇牦牛流产病因主要为布鲁氏杆菌感染,其感染率为72.7;.博乐市郊区奶牛流产病因主要为新孢子虫病感染,其感染率为25;.[结论]应用GST-NcSAG1t抗原蛋白的rELISA检测法和PCR诊断技术为灵敏度高,特异性较强.和静县巴伦台镇牦牛与博乐市郊区奶牛流产病因分别为布鲁氏杆菌和新孢子虫感染引起,应加强防范.     

奶牛布鲁氏菌病的诊断

对某养牛小区5头流产等疑似布鲁氏菌病奶牛的病料和血清分别进行微生物学诊断和血清学诊断,结果 5份病料中分离出2株布鲁氏菌,5份血清全部呈阳性,阳性率100%。试验结果表明,该养牛小区的奶牛流产原因是布鲁氏菌病所致,牛群中流行布鲁氏菌病,必须有效控制该病的进一步发展和蔓延。     

牛流产病例的诊断报告

为确诊牛频繁发生流产的病因,将30份牛血清分别用试管凝集反应和虎红平板凝集反应检测牛布氏杆菌抗体.结果表明,虎红平板凝集反应检测的阳性率为93.3%(28/30),试管凝集反应检测的阳性率为93.3%(28/30),2种检测方法结果一致,可初步诊断为布氏杆菌病.     

延边地区延边黄牛布鲁氏菌病的流行病学调查

[目的]为布鲁氏菌病的防制与治疗提供科学依据。[方法]通过虎红平板凝集试验对延边地区延边黄牛进行布鲁氏菌病检测。[结果]对采集到的304份牛血清进行检测,其中43份血清呈阳性,阳性率达14.47%。[结论]延边地区延边黄牛中布鲁氏菌病得到了较好控制。     

布鲁氏菌病对荷斯坦牛泌乳性能的影响

[目的]研究不同产犊季节、胎次及泌乳阶段布鲁氏菌病对奶牛泌乳性能的影响。[方法]收集南方地区某奶牛场297头奶牛2014年的DHI生产性能测定记录,采用多因素方差法分析布鲁氏菌病阴性与阳性奶牛不同产犊季节、胎次和泌乳阶段对奶牛泌乳性能(日产奶量、体细胞数、体细胞评分、奶损失、尿素氮、产奶高峰日、90 d产奶量)的影响。[结果]不同产犊季节、胎次和泌乳阶段对奶牛的体细胞数、体细胞评分、奶损失、高峰日的影响达到极显著水平(P0.01),而对其他泌乳性能无显著影响。布鲁氏菌病对荷斯坦奶牛的日产奶量、体细胞数、体细胞评分、奶损失、产奶高峰日具有极显著影响(P0.01),对尿素氮和90 d产奶量的影响达到显著水平(P0.05),不同产犊季节、泌乳阶段、胎次、测定季节等对奶牛的生产性能均有一定的影响。[结论]该研究结果可为提高奶牛的泌乳性能及牛奶质量提供可靠的理论依据。     

奶牛布鲁氏杆菌的分离与鉴定

[目的]为布鲁氏杆菌的分离与鉴定提供依据。[方法]时某奶牛场进行布病调查,采集血清、血液、牛奶等样品通过硫化氢产,生试验、染料抑菌试验和热凝集试验进行布鲁氏抒菌的分离与鏊定。[结果]21份牛奶样品在浓度10％CO2培养葙中培养至第4天时,有5份培养基上生长出30～50个0．05～2．00mm大小无色、闪光圆形、湿润、隆起的可疑小菌落。硫化氢产生试验结果表明,5个菌株均可产生硫化氢;染料抑菌试验结果表明,5个菌株确为布鲁氏杆菌;热凝集试验结果表明,该5菌株未发生变异;PCR检测结果表明,相对应的牛奶检测呈阳性。[结论]初步鉴定从布病可疑阳性牛分离出的5个菌株为牛布鲁氏杆菌。     

牛冠状病毒的血清流行病学调查

用血凝抑制试验检测了我国奶牛、黄牛、水牛、牦牛、绵羊、山羊、猪和人共1733份血清中的牛冠状病毒(BCV)抗体,其阳性率分别为80.2%,67%,23.2%,44.3%,5.3%,0%,19%和19.3%。奶牛血清 BCV 抗体有年龄差异,黄牛、水牛、牦牛及人等抗体检出率存在地区性差异。结果表明,BCV 在我国普遍存在,可能为犊牛及成年牛腹泻的重要病原之一。