甘蓝夜蛾核型多角体病毒某些生化特性的测定

本文报道不连续系统的 SDS-PAGE 法对甘蓝夜蛾核型多角体病毒(Mamestrabrassicae nuclear polyhedrosis virus MbNPV)的多角体蛋白,病毒粒子结构多肽进行分析。结果表明,经热处理和温和碱解的多角体蛋白呈现一条带,分子量为28.2×10~3±500道尔顿。病毒粒子至少有15种多肽.MbNPV 多角体蛋白富含天门冬氨酸、谷氨酸。未检出色氨酸、限制性内切酶 ECoR Ⅰ,HindⅢ,BamH Ⅰ和 Pst Ⅰ分别把 MbNPV-DNA 酶解成15,13,7和10个限制性片段.由片段积加法计算得平均分子量为95.905±2.164Kbp.     

泡桐灰天蛾颗粒体病毒形态结构的初步研究

应用电子显微镜技术对泡桐灰天蛾颗粒体病毒进行观测，结果表明，其包涵体呈椭圆形或卵圆形，大小较均匀，为224－276nm×373－522nm;病毒粒子呈香蕉状，大小约为66nm*269nm;包涵体蛋白结构呈晶格状点线型，病毒粒子单粒包埋，病毒粒子直接释放的核酸呈开环或闭环状分子，为双链DNA，平均长度约为23．86×10^-6m，分子量约为47×106道尔顿。     

分月扇舟蛾颗粒体病毒的形态和限制性内切酶图谱分析

将从自然罹死的分月扇舟蛾Closteraanastomosis (L .)幼虫中分离到的一种颗粒体病毒 (简称CaL GV)置于电子显微镜下观察 ,其形态为椭圆形 ,大小为 (30 4 .5 3× 139.0 9)nm ;经碱解病毒粒子为杆状 ,大小为(2 4 6 .2 1× 6 1.36 )nm ;经酚∶氯仿∶异戊醇 (2 5∶2 4∶1)抽提 ,氯仿∶异戊醇 (2 4∶1)洗涤 ,2倍体积无水乙醇沉淀 ,抽提的核酸经EcoRⅠ ,HindⅢ ,NcoⅠ ,PstⅠ限制型内切酶酶解 ,1×TAE缓冲液 ,0 .8%琼脂糖凝胶电泳 ,获得CaLGV核酸酶解图谱。以λDNA HindⅢ酶解片段在凝胶中的迁移率与相应片段分子量的对数值做标准曲线 ,求得CaLGV平均分子量为 10 0 .4 8kb ,核酸含量为OD2 60 /OD2 80 =1.89。     

泡桐灰天蛾颗粒体病毒包涵体蛋白及其DNA的研究

为了充分利用泡桐灰天蛾颗粒体病毒资源，为开展害虫生物防治提供依据，对首次在湖南分离到的泡桐灰天蛾颗粒体病毒进行了研究。采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ垂直板依电泳，测得此病毒包涵体蛋白分子量为３×１０＾４ｕ；用电镜法观察，其ＤＮＡ呈松弛的闭环状双链，平均长度约为２３．９μｍ，分子量为４７×１０＾６ｕ；用ＤＮＡ限制性内切酶分析其分子量为４５．４×１０＾６ｕ。     

日本沼虾输卵管上皮细胞内病毒粒子的超微结构观察

研究了日本沼虾输卵管上皮细胞中的病毒,结果表明病毒粒子球状,直径约100 nm,外有膜包被,其包涵体直径1-3μm,有2种类型,第1种包涵体内充满高电子致密物及多层膜状物,第2种包涵体内电子致密颗粒均匀,边缘有病毒粒子黏附。在输卵管中发现该病毒对研究甲壳动物病毒病的发病机制具有重要价值。     

番鸭细小病毒特性的初步研究

将纯化的番鸭细小病毒（ＭＰＶ）在电镜下观察，呈球形或六角形，无囊膜，正二十面体对称，大小为２４～２５ｎｍ，壳粒呈中空管状，直径约３～４ｎｍ，壳粒数为３２。病毒无血凝性，对氯仿、乙醚、胰酶、酸和热不敏感，对紫外线敏感。ＭＰＶ在氯化铯中沉淀时具有３条区带，其密度分别为１．２８～１．３０，１．３２，１．４２ｇ／ｃｍ￣３，其中第３条带具有感染性。病毒具有４种结构多肽：ＶＰ＿１（８９ｋｄ），ＶＰ＿２（６８ｋｄ），ＶＰ＿３（５８ｋｄ）和ＶＰ＿４（４０ｋｄ），其中ＶＰ＿３为主要结构多肽。吖啶橙反应及核酸酶消化试验表明ＭＰＶ核酸为单链ＤＮＡ。     

山西省折带黄毒蛾核型多角体病毒观察

１９８９年，从山西省太谷县采集到的折带黄毒蛾核型多角体病毒（ＮＰＶ）材料经电镜观察，其多角体为三角形，四边形或不规则形。包涵体内的病毒粒子为双粒包埋类型。     

应用大菜粉蝶颗粒体病毒防治菜粉蝶的研究:病毒形态观察与致死中浓度、致死中时测定

经菜粉蝶幼虫增殖的大菜粉蝶颗粒体病毒(PbGV),其包涵体为卵圆至椭圆形颗粒,不易为电子束所透射;病毒粒子略呈杆状,稍弯曲,脂膜内外有电子致密物质沉积;核衣壳杆状,较直。病毒包涵体、病毒粒子和核衣壳的大小分别为335-398×219-259nm、221-260×65-75nm和245-283×51-62nm。 PbGV包涵体经口喂饲菜粉蝶初孵幼虫,其致死中浓度(LC_(50))为1.22×10~3GIB/ml。幼虫饲毒后,致死中时(LT_(50))随病毒浓度提高而缩短;随饲毒时虫龄的增大而延长。病毒感染寄主幼虫的最适温度约为25～30℃,在此温度范围内,LT_(50)明显缩短。     

猪2型圆环病毒间接ELISA检测方法研究

应用PCR扩增得到猪2型圆环病毒ORF2基因的3′端约600 bp,该PCV2 ORF2基因已去除终止子,并分别在其上下游添加Kpn Ⅰ和Hind Ⅲ酶切位点。PCR产物用Kpn Ⅰ和 Hind Ⅲ酶切后,与经同样处理过的 pBAD/g Ⅲ B Vector连接,转化TOP10细胞后挑取阳性克隆,经酶切鉴定和测序验证后用L-arabinose诱导进行融合表达,表达的蛋白主要以包涵体存在。经过镍离子亲和层析柱纯化,SDS-PAGE显示1条约28 ku的目的条带, 纯度达到85％以上。以该28 ku的多肽包被酶标板,建立了PCV2的间接ELISA检测方法。     

兔出血症病毒结构多肽的研究

纯化ＲＨＤＶ经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ,硝酸银染色显示８条多肽,分子量分别为８５．１,７１．２,６４．５,６１．４,５７．３,５４．０,２９．２,２８．１ｋＤ,免疫转印结果确认其中的６条多肽为病毒结构多肽,分子量分别为６４．５,６１．４,５７．３,５４．０,２９．２,２８．１ｋＤ且其相对百分含量分别为６５．８７,３．１７,３．９７,１０．３２,９．５２,７．１４％,表明分子量为６４．５ｋＤ的多态为病毒主要     

PuGV-Ps增效蛋白质基因特征及其整合载体的构建

为了明确增效蛋白质基因特性,获得重组增效苏云金杆菌,本试验通过生物信息学方法分析了转宿主东方粘虫颗粒体病毒(Pu GV-Ps)增效蛋白质基因(En)的特征及二级结构,利用In-fusion技术构建了整合载体。基于Pu GV-Ps增效蛋白质基因进化树显示,颗粒体病毒与多角体病毒为2个明显的分支,美洲粘虫颗粒体病毒(Pu GV)与转宿主东方粘虫颗粒体病毒的增效蛋白质基因遗传距离极小。6种颗粒体病毒增效蛋白质氨基酸序列比对结果显示,增效蛋白质N端相似性较高,均含有锌离子结构域(244位)与催化域(526~565位);增效蛋白质基因二级结构中α螺旋和无规则卷曲占整个片段的73%,且N端以不规则卷曲为主;利用改进的In-fusion技术构建整合载体,双酶切结果显示增效蛋白质基因连接方向正确,p LTV1-En构建成功;通过高温整合获得重组工程菌Bt71En。表明,Pu GV-Ps与Pu GV增效蛋白质基因同源性较高,其二级结构复杂,影响载体构建,通过高温处理连接片段可以明显提高载体的连接效率。     

葱病毒特性的研究

本文采用差速离心法分离提纯葱病毒并对其特性进行研究．病毒粒子为弯线性，平均长度７２８ｕｍ，直径约１５ｎｍ，紫外吸收曲线最高峰在２５６～２６０ｎｍ之间，最低峰为２３８ｎｍ，分子量为２７０００道尔顿。光学显微镜下可观察到病叶表皮细胞中的不规则内含物，超薄切片电镜观察，可见病毒风轮状、束状内含体。该病毒引起叶绿体、核膜损伤和解体，其寄主范围较窄。     

柞蚕核型多角体病毒研究进展

柞蚕核型多角体病毒(Antheraea pernyi Nuclear Polyhedrosis Virus，简称ApNPV)，属杆状病毒科包含体杆状病毒亚科核型多角体病毒属，是柞蚕核型多角体病的病原。该成熟病毒包含体的断面分三层结构：最外层是致密层，次外层是多角体蛋白层，内部是病毒束。柞蚕核型多角体病毒的核酸为DNA，经限制性内切酶PstI，HindⅢ，BamH，XhoI，SalI，EcoR I和EcoR I BamH I酶解后，电泳分别形成31,25，6，15，24，5，7条谱带。柞蚕核型多角体病毒主要通过食下和体壁创伤途径感染柞蚕幼虫，不同病毒株对柞蚕的致病性存在着差异。柞蚕幼虫消化液对柞蚕核型多角体病毒有溶解、灭活作用；柞蚕幼虫中肠围食膜对柞蚕核型多角体病毒有灭活作用。柞蚕核型多角体病毒多角体在自然条件下有自然裂解现象，游离的病毒粒子在自然条件下很快失活。目前已建立柞蚕核型多角体病毒载体表达系统，并在分别在体内、体外表达了报告基因．     

猪圆环病毒病的防治

猪圆环病毒感染病是由猪圆环病毒引起猪的一种新的传染病。主要感染8～13周龄猪,其特征为体质下降、消瘦、腹泻、呼吸困难。1病原猪圆环病毒(PCV)属于圆环病毒科圆环病毒属。这科病毒有鸡贫血病毒鹦鹉啄羽病毒。它是动物病毒中最小的一员,病毒粒子直径为14～25um,CSCL中的浮密度为1.33～1.34,对酸性环境(pH3),氯仿或者高温(56℃和70℃有抵抗作用,二十面体对称,无囊膜,基因组为单组DNA。     

流行性腹泻病毒E基因与pSFV重组RNA的构建

将猪流行性腹泻病毒(PEDV)的E基因导入甲病毒载体(pSFV),研究该基因及其编码蛋白的表达。首先将扩增的病毒E基因导入pSFV的Sp6启动子下游。用SpeⅠ酶将pSFV—E重组质粒DNA线性化,再将其体外转录成5’末端含帽子结构的重组RNA。然后通过电穿孔法将此重组RNA转染BHK21细胞,收集病毒样粒子用于感染BHK21细胞。采用细胞免疫化学的方法对转染和感染细胞的表达产物进行分析。pSFV—ERNA转染和病毒粒子感染哺乳动物细胞表达的E蛋白,可与抗PEDV多克隆抗体起特异反应,证明体外转录的重组RNA含有PEDVE的特异序列。     

禽白血病J亚型病毒分离鉴定及其gp85基因克隆表达

禽白血病(Avian leukosis)是由禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)和禽肉瘤病毒(Avain sacroma viurs,ASV)群中病毒引起禽类多种肿瘤性疾病统称.文章从临床疑似病鸡中经临床症状观察、病理学检查和分子生物学鉴定等方法分离出一株ALV J亚型病毒.从感染鸡病料提取前病毒DNA,根据NCBI发表ALV基因序列设计引物,扩增该病毒gp85基因,扩增出924 bp目的条带,利用pET-30a载体构建原核表达质粒,鉴定正确后转化入Rosetta中进行诱导表达,表达40 ku蛋白以包涵体形式存在,有良好免疫原性,为ALV进一步研究提供实验材料.     

柞蚕核多角体病毒基因工程载体的研究 Ⅰ柞蚕核多角体病毒DNA限制性内切酶图谱

本文研究了柞蚕核多角体病毒的分离、纯化、纯化后的病毒DNA经限制性内切酶Pat Ⅰ、Hind Ⅲ、BamH Ⅰ、XhoⅠ、SalⅠ、EcoRⅠ及EcoRⅠ+BamHⅠ等酶解后电泳分别形成31、26、6、15、24、5及7条区带。据内切酶图谱测算柞蚕核多角体病毒的分子量为75.16±2.3×10~6道尔顿。并比较了柞蚕、蓖麻蚕及家蚕等核多角体病毒的亲缘关系。     

鸭坦布苏病毒囊膜蛋白抗原表位的串联表达与抗原性分析

在对鸭坦布苏病毒囊膜蛋白抗原表位分析的基础上,将已经筛选出的8条抗原性良好的多肽采用柔性肽拼接,转入T载体中。将酶切回收的串联基因(命名为TEM)克隆于表达载体p ET32a中,获得重组表达质粒p ET32a-TEM,将该质粒转化于感受态细胞BL21(DE3)中,经IPTG诱导后进行超声裂解,对融合蛋白进行可溶性分析、Western blotting分析和免疫原性分析。重组质粒p ET32a-TEM的酶切和测序结果表明,TEM串联基因已成功插入到p ET32a原核表达载体中;表达的p ET32a-TEM融合蛋白分子质量约为38 000,以包涵体形式存在。Western blotting和小鼠免疫试验结果显示,p ET32a-TEM融合蛋白与鸭坦布苏病毒阳性血清能发生特异性反应,具有良好的抗原性。串联多肽的成功表达,将为鸭坦布苏病血清学检测方法建立、新型工程疫苗的研发奠定基础。     

在贵州发现的一些昆虫病毒

从贵州茶树及森林害虫的自然罹病虫体中分离鉴定获得14株病毒,即茶鹿子蛾NPV,肾毒蛾NPV,大茸毒蛾NPV,叉带黄毒蛾NPV,半带黄毒蛾NPV、卵黄毒蛾NPV,幻带黄毒蛾HPV,黄毒蛾NPV,茶奕刺蛾NPV,杨白纹毒蛾NPV,杨二尾舟蛾GV,茶刺蛾GV,茶茸毒蛾GV,茶奕刺蛾GV。其中,除肾毒蛾NPV,黄毒蛾NPV,茶奕刺蛾NPV,茶刺蛾GV已有报道外,其余均属我国首次报道。通过电镜对上述病毒的形态观察和对其宿主的回感试验,证明是其病原病毒。     

禽白血病J亚型病毒分离鉴定及其gp85基因克隆表达

禽白血病(Avian leukosis)是由禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)和禽肉瘤病毒(Avain sacromaviurs,ASV)群中病毒引起禽类多种肿瘤性疾病统称。文章从临床疑似病鸡中经临床症状观察、病理学检查和分子生物学鉴定等方法分离出一株ALV J亚型病毒。从感染鸡病料提取前病毒DNA,根据NCBI发表ALV基因序列设计引物,扩增该病毒gp85基因,扩增出924 bp目的条带,利用pET-30a载体构建原核表达质粒,鉴定正确后转化入Rosetta中进行诱导表达,表达40 ku蛋白以包涵体形式存在,有良好免疫原性,为ALV进一步研究提供实验材料。