ELISA法筛选抗新孢子虫中药的研究

[目的]筛选抗新孢子虫效果较好的中药。[方法]取健康昆明种小鼠,投服甲基氢化泼尼松,使其免疫力下降,然后随机分组,每只小鼠腹腔接种1.0×104个新孢子虫虫体,接种4 h后,各组小鼠灌服不同中药。给药7 d后,小白鼠眼球采血,收集血清,应用ELISA法检测其抗体水平。[结果]15个中药组中有4个中药组抗体阳性率较低。[结论]黄芩、百部、天麻、黄连可以提高感染新孢子虫小白鼠的免疫水平。     

吉林株犬新孢子虫SAG1基因片段的克隆及蛋白抗原性预测

[目的]对犬新孢子虫SAG1基因进行克隆与序列分析。[方法]从细胞培养的吉林株虫体中提取犬新孢子虫DNA,根据已发表的犬新孢子虫鲥G1基因的核苷酸序列,设计并合成1对特异性引物,采用PCR技术,扩增大新孢子虫SAG1基因片段,并成功克隆到pMD18-T simple载体上,对经PCR、酶切鉴定为阳性的重组质粒进行序列分析。[结果]对犬新孢子虫SAG1基因进行克隆后,获得阳性重组质粒。克隆的SAG1基因片段长780bp,编码260个氨基酸,与已发表的美国株犬新孢子虫SAG1基因核苷酸序列（AF132217）的同源性为99．0％,氨基酸序列同源性为98．8％。通过分子生物学软件对翻译水平进行预测,发现吉林株核苷酸序列并不影响氨基酸翻译与蛋白质的表达。[结论]该试验成功克隆重组质粒,为建立犬新孢子虫的高效表达系统奠定了基础。     

新孢子虫病rELISA抗体检测试剂盒的应用

[目的]研发一种成熟稳定的新孢子虫病rELISA抗体检测试剂盒.[方法]在新孢子虫病rELISA检测方法建立的基础上,组装检测新孢子虫病的rELISA抗体检测试剂盒,对试剂盒的敏感性、保存期、特异性和重复性进行评价,并与两种商品化试剂盒进行对比试验,应用自制的试剂盒检测来自新疆各地州新孢子虫疑似病例区血清,共1329份.[结果]成功组装了新孢子虫病rELISA抗体检测试剂盒,且该试剂盒敏感性高、保存期长、特异性强、重复性较好.与两种进口商品化诊断试剂盒比较,其符合率均在90;以上.在1 329样品血清中157份是阳性,其平均阳性率为11.8;.[结论]该试剂盒可以取代商品化试剂盒进行新孢子虫病诊断,为新孢子虫病的防治工作提供技术和产品支撑.     

牛的鼠隐孢子虫（Cryptosporidium muris）在小鼠体内的发育研究

应用光镜及电镜技术对牛的鼠隐孢子虫在小鼠体内的发育进行了研究。结果表明：鼠隐孢子虫的内生发育是在位于鼠胃腺上皮细胞表面、由微绒毛形成的带虫空泡中进行的。其发育过程包括裂殖生殖、配子生殖和孢子生殖3个阶段。鼠隐孢子虫所有内生发育阶段的虫体均较小隐孢子虫（C.parvum）大,其中卵囊为1.4倍,子孢子为2.5倍,第一代裂殖体为1.3倍,第二代裂殖体为1.5倍,大小配子体均是1.3倍。对虫体透射电镜观察发现,在虫体和宿主细胞的结合处,虫体前部呈结节状突起,并被宿主细胞的纤维素样增生所包裹,形成一发达的营养器。鼠隐孢子虫的这一结构在小隐孢子虫及相关种中未曾发现。     

安氏隐孢子虫肌动蛋白部分编码基因真核表达载体的构建(英文)

[目的]将安氏隐孢子虫肌动蛋白基因进行克隆和在Hela细胞中真核表达。[方法]根据筛选安氏隐孢子虫T7噬菌体展示文库获得的肌动蛋白(CA42)部分编码基因序列设计特异性引物,扩增目的基因CA42,构建重组真核表达载体pVAX1-CA42,将其转化入Hela细胞,用间接免疫荧光、SDS-PAGE、Western blotting检测CA42蛋白在转染细胞中的表达情况。[结果]重组质粒能在Hela细胞中表达,且表达产物具有反应原性。[结论]成功克隆并表达了安氏隐孢子虫肌动蛋白基因,并在Hela细胞中能够稳定表达。     

安氏隐孢子虫肌动蛋白部分编码基因真核表达载体的构建

[目的]将安氏隐孢子虫肌动蛋白基因进行克隆并在Hela细胞中真核表达。[方法]根据筛选安氏隐孢子虫T7噬菌体展示文库获得的肌动蛋白(CA42)部分编码基因序列设计特异性引物,扩增目的基因CA42,构建重组真核表达载体pVAX1-CA42,将其转化入He-la细胞,用间接免疫荧光、SDS-PAGE、Western blotting检测CA42蛋白在转染细胞中的表达情况。[结果]重组质粒能在Hela细胞中表达,且表达产物具有反应原性。[结论]成功克隆并表达了安氏隐孢子虫肌动蛋白基因,并在Hela细胞中能够稳定表达。     

奶牛流产病因探究及新孢子虫病PCR检测方法的建立

[目的]探究新疆某奶牛场奶牛流产病因.[方法]采集的19份血清样品和4份牛流产胎儿脑组织进行布氏杆菌病凝集实验、弓形虫PCR检测和新孢子虫病ELISA方法检测,参考GenBank登录的犬新孢子虫种Nc-5序列[1],设计引物,建立新孢子虫病的PCR检测方法.[结果]调查结果显示该牛场布氏杆菌病与弓形虫病感染均呈阴性,新孢子虫病感染率为14.3;(2/19).新孢子虫PCR诊断方法的最佳退火温度为57℃,灵敏度为35 pg/μL.用建立后的PCR方法检测流产胎儿,感染率为50.0;(2/4).[结论]新孢子虫病是导致该厂奶牛流产的重要原因之一,为今后新疆地区有效预防和治疗新孢子虫病提供了一定的科学依据.     

牛源犬新孢子虫IMP1基因的克隆与序列分析

[目的]为了解牛源犬新孢子虫IMP1基因生物学特性,分析牛源犬新孢子虫IMP1基因的克隆与序列。[方法]应用PCR技术扩增IMP1基因,将纯化的PCR产物和pMD18-T Simple Vector连接,构建pMD18-IMP1重组克隆质粒,进行PCR鉴定和酶切鉴定,将鉴定为阳性的质粒进行测序分析。[结果]PCR扩增犬新孢子虫IMP1基因大小为762 bp,克隆质粒经测序分析与GenBank（XM003879531.1）中IMP1基因的同源性为99.9%。[结论]该试验为犬新孢子虫IMP1基因的表达及后续研究奠定了基础。     

不同提取方法对东亚飞蝗酚氧化酶活性的测定与比较

[目的]研究东亚飞蝗酚氧化酶活性及动态变化。[方法]通过不同抽提方法制备虫体体液和淋巴液,测定不同位点酚氧化酶活性及动态变化。[结果]血淋巴中酚氧化酶活性显著高于虫体体液中酚氧化酶活性,且雌虫酶活性显著高于雄虫;虫体体液内酚氧化酶活性随着体外放置时间的延长而显著增强;成虫血淋巴内酚氧化酶活性随着时间的延长而显著增强。[结论]酚氧化酶一部分存在于东亚飞蝗组织和细胞中参与虫体发育和构建,一部分存在于血淋巴中参与免疫防御作用。酚氧化酶稳定性非常强,是昆虫宽泛适应能力和强大免疫能力的有效保障。     

家蚕微孢子虫转宿主果蝇的研究初探

[目的]研究家蚕微孢子虫对果蝇的侵染性,为系统研究家蚕微孢子虫侵染机制提供新视野,也为探索微孢子虫的生物防治效果提供参考。[方法]用家蚕微孢子添食野生型和突变型果蝇,并用Calcofluor White M2R荧光染色法进行果蝇体液内的家蚕微孢子虫形态观察。[结果]结果表明,家蚕微孢子虫在转宿主情况下能够侵染果蝇,且被感染的突变型果蝇体内家蚕微孢子虫的数量多于野生型果蝇。[结论]家蚕微孢子虫能侵染果蝇,该研究结果为研究家蚕微孢子虫侵染其他宿主提供了初步参考,为进一步了解和认识家蚕微孢子虫侵染机制奠定了基础。     

3种中草药对沙门氏菌的抑制机理初探

[目的]探索3种中草药对沙门氏菌的抑制机理.[方法]采用水煎法提取中草药中的抑菌成分,处理沙门氏菌,通过测定沙门氏菌的生长曲线、苹果酸脱氢酶活性、电导率和菌体超微结构,初步探讨中草药提取液对沙门氏菌的抑制机理.[结果]中草药提取液能有效的抑制菌体的生长,并可以通过降低酶活性、改变细胞膜渗透性、破坏细胞结构等方式,抑制沙门氏菌的生长,效果最好的为鹿蹄草,其次为黄岑,最差的是地榆.[结论]3种中草药对沙门氏菌均有一定的抑制作用.     

中药提取物对油菜菌核病菌抑制活性及丁香活性成分的研究

[目的]对中药提取物进行抑菌成分分析,为新型植物源农药的研制提供基础。[方法]以丁香等14种中药乙醇提取物为材料,测定各提取物对油菜菌核病菌的抑制活性,采用气相色谱-质谱联用法分析丁香提取物的化学成分,并测定其对油菜菌核病菌抑菌活性和油菜菌核病菌菌丝干重的影响。[结果]结果表明:丁香提取物对油菜菌核病菌菌丝生长抑制效果最好,抑制率为100%。[结论]初步证实丁香酚为丁香提取物的主要抑菌成分。     

10种中草药提取液抑菌杀菌作用研究

[目的]为探明10种中草药的抑菌与杀菌活性。[方法]选用10种中草药,提取其活性成分,测定其对5种细菌的抑制与杀灭作用。[结果]10种中草药对5种细菌均有一定的抑制作用,其中以白芨、黄芩最为明显,抑菌率均在83．1％以上;杀菌试验表明10种中草药对5种细菌均有不同程度的杀灭作用。[结论]10种中草药均具有抑菌与杀菌作用,但随着提取液用量的增加与杀菌时间的延长,抑菌率与杀菌率均随之提高。     

苹果褐腐病菌中草药抑菌剂的筛选及提取条件研究

[目的]为中草药抑菌剂的开发提供参考依据。[方法]采用菌丝生长速率法测定了19种中草药乙醇提取物对苹果褐腐病菌的抑制活性。[结果]不同中草药提取物对苹果褐腐病菌的抑制活性存在一定差异。在中草药提取物浓度为0.1 mg/ml时,19种中草药中,马兜铃提取物对苹果褐腐病菌菌丝生长的抑制效果最好,抑制率高达49.64%;其次是鸦胆子、射干和葛根,抑制率均在20%以上;其余中草药提取物对苹果褐腐病菌均未表现出明显的抑制作用,其抑制率均在20%以下。通过单因素试验优化了马兜铃的提取条件,即以50%乙醇为溶剂、料液比为1∶5、提取温度为30℃、提取时间为4 h。[结论]马兜铃体内的有效成分具有强烈的抑菌活性,具有开发潜力。     

5种中草药提取物对嗜水气单胞菌体外抑菌效果的研究

[目的]研究5种中草药提取物对嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）的体外抑菌效果。[方法]以鱼类常见病原菌嗜水气单胞菌为供试菌,测定了5种中草药对嗜水气单胞菌的体外抑菌作用,并测定了其中效果较好的中草药的治愈率,确定了其最佳用药剂量。[结果]在相同试验条件下,5种中草药中五倍子（Rhus chinensisMill）、石榴皮（Punica granatumL.）和诃子（Terminalia chebulaRetz）对嗜水气单胞菌有较强的抑菌效果,其中五倍子抑菌效果显著高于其他几种中草药（P〈0.05）。五倍子治疗由嗜水气单胞菌引起的细菌性败血症的最佳治疗剂量为：0.5 mg/ml五倍子药液药浴40 min,治愈率为100%。[结论]为鱼类暴发性细菌病的防治提供了科学的用药依据。     

黄花乌头种子萌发与水溶性内源抑制物质研究

[目的]为提高黄花乌头种子发芽率提供理论依据。[方法]以黄花乌头种子为材料,研究不同浓度赤霉素对种子发芽率的影响,测定该种子粗提物对白菜种子萌发及幼根的影响以及温水和溶剂浸种去除内源抑制物质的效果。[结果]用200μg/ml赤霉素处理时,黄花乌头种子发芽率和发芽势最高,为79.6%和52.4%,比对照高40.9%和71.4%。室温0~4℃变温浸种处理的种子发芽势和发芽率最高;黄花乌头种子的粗提物有较强的抑制活性,当粗提物浓度为0.28 g/ml时,白菜种子的相对发芽率为20.2%,幼根相对长为11.2%。黄花乌头种子的相对发芽率为15.2%,相对发芽势为6.4%;温水浸种可除去黄花乌头种子中大量内源抑制物质。乙醇浸种时浸泡液的抑制活性最强。[结论]200μg/ml赤霉素变温浸种处理,可提高黄花乌头种子的发芽率。     

10味中草药抑菌作用研究

[目的]研究藜芦等10味中草药提取物的抑菌作用。[方法]以金黄色葡萄球菌和大肠杆菌为指示菌,测定藜芦等10味中草药乙醇提取物的抑菌作用,并通过呼吸代谢抑制试验对其中抑菌效果最好的藜芦提取物进行了抑菌机制研究。[结果]10味中草药藜芦中提取物的抑菌效果最好。藜芦提取物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的最低抑菌浓度均为6．25mg／na。呼吸代谢抑制试验结果显示,藜芦提取物的浓度为6．25mg／ml时,可抑制2种指示菌的苹果酸脱氢酶活性,加药组的大肠杆菌苹果酸脱氢酶（MDH）比活性与对照组相比降低了46．52％;加药组的金黄色葡萄球菌MDH比活性与对照组相比降低了55．82％。[结论]10味中草药提取物中藜芦的抑菌效果最佳．其抑菌机制是通过抑制细菌的呼吸代谢过程的方式实现的。     

赶黄草提取液与抗菌药联用对金黄色葡萄球菌的体外抑菌研究

[目的]测定赶黄草水煎液与碱提液分别与阿米卡星、环丙沙星、四环素、阿莫西林联合用药时对离体金黄色葡萄球菌的分级抑菌浓度指数(FIC),比较分析联合用药效果。[方法]分别用水煎和碱提法提取赶黄草的有效成分,然后通过微量肉汤稀释法测取各种药物单独用药与联合用药时的最低抑菌浓度(MIC),并计算出FIC。[结果]赶黄草水煎液与四环素联合用药对鸭源金黄色葡萄球菌及赶黄草碱提液与阿米卡星联合用药后对金黄色葡萄球菌标准菌株表现为相加作用外,其余赶黄草碱提液与水煎液分别与四种抗菌药联合用药对金葡标`准菌株及鸭源菌株均表现为无关作用。[结论]结果为临床使用赶黄草中西联合用药防治鸭葡萄球菌病提供了理论依据。     

32种中草药抑菌活性的比较研究

[目的]研究连翘（FRUCTUS FORSYTHIAE）、黄连（RHIZOMA COPTIDIS）和刺五加（RADIX ET RHIZOMA SEU CAULIS ACAN-THOPANACTS SENTICOSI）等32味中草药提取物的抑菌作用。[方法]利用95%乙醇提取药物的有效成分,以大肠杆菌和金黄色葡萄球菌为指示菌,采用牛津杯法测定中草药提取物的抑菌作用。[结果]32种中草药中,虎杖等26种中草药提取物对金黄色葡萄球菌具有抑制作用;连翘等23种中草药提取物对大肠杆菌具有抑制作用,且抑菌效果在一定浓度范围内随药液浓度的增大而增强。其中,连翘和黄连对大肠杆菌的最低抑菌浓度分别是4和10 mg/ml,对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度分别是6和8 mg/ml。[结论]虎杖和连翘分别对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有较好的抑制效果。