Bar基因的玉米花粉管通道法转化

通过花粉管通道法利用抗除草剂基因（bar）转化3个玉米自交系,D0代获得35株GUS阳性植株．其中17株PCR阳性植株,除草剂筛选获得抗性植株13株。研究发现DNA溶液浓度影响转化率,当浓度为100μg／ml时,转化率最高,为2．61％。DNA导入时间距人工授粉时间的延长,结实率升高,但转化率显著下降,人工授粉后1d导入DNA产生的转化株最多,为19株,平均转化率为1．35％。     

花粉管通道法转化小麦影响因素的研究

以西农1376和中13小麦品种(系)为受体,携带叶片衰老抑制基因PSAG12-IPT的pCM鄄LA35-1质粒为转化载体,对花粉管通道转化法中的基因型、转化时间、质粒DNA浓度进行了研究。结果表明:不同基因型、转化时间对结实率影响不显著,质粒DNA浓度对结实率影响显著。在0~700ng/μl范围内,小麦结实率随着质粒DNA浓度的增加而降低,其中质粒DNA浓度300ng/μl和500ng/μl与对照相比结实率差异达到显著水平,而700ng/μl则达到极显著差异。不同基因型的转化率因转化时间和质粒DNA浓度的不同而有所差异,其中西农1376的适宜转化时间为40~80min,适宜质粒DNA浓度为300~500ng/μl,以500ng/μl×40min处理的转化率最高,而中13小麦的适宜转化时间为80~120min,适宜质粒DNA浓度为300ng/μl。     

桃花粉管通道法转基因技术的初步研究

以曙光为试材,对桃花粉管通道法转基因技术进行探索性研究,结果表明:(1)活体人工授粉后,24 h花粉开始在柱头上萌发授粉后48 h已有大量的花粉管长至花柱上端;授粉后96 h大量的花粉管生长至花柱的中部;授粉后144 h大量的花粉管到达花柱基部.(2)确定外源DNA的注射时间为人工授粉后的144 h;花柱横切滴加法注射方式不适用于桃;当外源质粒DNA浓度为0.2 mg/L时,发育期内其坐果率都显著高于其它浓度水平.     

油葵转基因方法的比较

利用GUS组织化学染色的方法比较4种油葵转基因方法的效果。结果表明,去1张子叶转化法优于温室子叶节转化法,花粉管通道的柱头滴加法优于子房注射法。借助这4种方法,用含胰岛素基因的农杆菌侵染油葵,PCR结果显示均获得了油葵阳性植株。去1张子叶转化法阳性率为3.17%,转化最佳操作时间为种子萌发后36 h;花粉管通道转化法阳性率为10.83%,花粉管柱头剪切操作最佳时间为人工授粉后5~7 h。综合考虑,优选去1张子叶转化法和花粉管通道转化法为油葵基因转化较适宜的方法。本研究可为优化油葵及向日葵转基因体系提供技术参考。     

草果开花结实的技术措施

[目的]为提高草果产量寻求一种较好的方法。[方法]设置自花授粉、异化授粉和自然条件下未进行人工授粉,研究了人工授粉对草果结实率的影响。采用正交试验,研究了花期使用外源激素和施肥对草果结实率的影响。[结果]人工授粉比大田自然状态下的结实率明显提高,同一处理水平下异花传粉OND结实率高于OOU;自花传粉OOU结实率高于OND。当外源激素和磷肥水平均较高时,结实率达到最大。[结论]在花期进行人工授粉以及使用外源激素能大大提高草果的结实率。     

毛葡萄花粉管的萌发与生长情况的观察

分别于人工授粉后的不同时间段对毛葡萄雌能花株雌蕊进行荧光染色后压片观察,结果表明:人工授粉后花粉的萌发率显著高于自然授粉状态,且环境条件在很大程度上制约花粉的萌发。人工授粉72 h花粉管从珠孔进入胚珠内部,且参与受精的花粉管由于先端膨大出现了生长受阻现象;而自然授粉72 h内均未见有花粉管到达花柱基部,主要在花柱中部停止生长。2种授粉方式出现的花粉管生长停滞现象,均对毛葡萄结实率产生一定影响。     

外源DNA导入时间和pH值对小麦结实率的影响

以花粉管途径导入外源DNA,DNA载体溶液pH值为8.5时,受体小麦的平均结实率为72.81％。大穗晚熟型作受体时,DNA载体溶液的pH值以8.5为宜,而多穗早熟型作受体时,DNA载体溶液的pH值以6.5较佳,受体小麦的结实率分别为76.05％和76.67％小麦自交后8小时导入外源DNA,平均结实率高达83.14％。自交后6～16小时,结实率可达75.6％。     

鼓槌石斛开花习性与人工授粉对结实率的影响

[目的]研究鼓槌石斛开花习性及人工授粉对结实率的影响。[方法]对鼓槌石斛开花期、果实主要特征及种子进行观察,开展种内人工授粉育种试验,采用培养基离体萌发法测定不同花期的花粉活力。[结果]鼓槌石斛开花期为3月上旬~5月上旬,盛花期为3月下旬~4月下旬,从花芽萌发到完全开放需要36~40 d,鼓槌石斛不同唇瓣中心斑块颜色有4种:分别为棕橘色(RHS 165B)、深黑红色(RHS 187A)、深褐红色(RHS 183A)、深棕橘色(RHS 163A);鼓槌石斛有活力花粉比例在花蕾期为32.6%,开花当天为80.5%,开花15 d后为1.8%,直到花谢花粉仍有活力;于开花第2~3天进行人工授粉,异丛异花授粉结实率达92.9%,同丛异花结实率为58.1%,同株异花结实率为41.2%,而自花授粉结实率为20.2%。[结论]鼓槌石斛花粉在整个花期均有活力,通过种内人工辅助授粉可大大提高鼓槌石斛的结实率。     

钙和硼对芦荟花粉萌发和花粉管生长的影响

[目的]探究钙和硼与芦荟花粉萌发和花粉管生长之间的关系。[方法]分别设置不同浓度的Ca^2＋和H3BO3,研究不同浓度钙和硼对芦荟花粉萌发和花粉管生长的影响。[结果]在一定浓度范围内,Ca^2＋对芦荟花粉萌发率和花粉管的伸长均有不同程度的影响。低浓度Ca^2＋不利于花粉管的生长,而高浓度Ca^2＋则抑制花粉管生长,其最适Ca^2＋浓度为1.3×10^-3mol/L。在高浓度硼条件下,较长时间内花粉管均呈现出波浪形,花粉管生长的最适硼浓度为1.6×10^-4mol/L。[结论]不同浓度的钙和硼,会促进或抑制芦荟花粉萌发和花粉管生长。     

花粉管通道法转化甜瓜自交系的技术研究初报

利用花粉管通道技术转化3个甜瓜自交系,筛选适宜浓度卡那霉素Kan对转化后代进行早期快速检测。试验结果表明,微量注射法转化率高于柱头滴加,切去柱头二次滴加更有利于外源基因转化。3个自交系转化率为0~1.4%,品种之间存在差异,乌克兰、雪里华、鲁薄1号平均转化率分别为0.30%、0.23%、0.25%;利用Kan临界浓度对转化种子进行早期筛选是可行的,子叶是适宜的检测时期。通过对Kan抗性苗的PCR检测证明,花粉管通道法可以实现甜瓜的遗传转化。     

水曲柳种子园花粉飞散规律研究

[目的]研究影响水曲柳花粉成熟和飞散的关键因素,揭示花粉飞散规律,为水曲柳种子园的设计及升级改造提供依据.[方法]通过对苇河林业局青山林场水曲柳种子园进行初步研究,对水曲柳开花期间花粉在时间和空间分布,水平和垂直分布,及花粉的飞散规律进行观测研究.[结果]园内雄花于5月10日开始散粉,散粉期从5月10～15日,花粉浓度的时间和空间变化以及水平和垂直分布与环境因素有密切关系.花粉浓度的最大值（4 737粒）在9：00～ 15：00.[结论]影响花粉飞散的因素中,环境因子（风速、温度、相对湿度、风向）起主要作用.影响花粉量大小的因素中,温度占主导地位.     

高丛蓝莓杂交育种及种子萌发研究

[目的]创新蓝莓种质资源,培育新品种。[方法]以6个高丛蓝莓品种为材料,采用4种授粉方式进行人工杂交,设5个赤霉素溶液浸种处理,研究赤霉素对杂交种子发芽率的影响。[结果]选取即将开放的花蕾去雄授粉,以去雄后直接授粉的结实率最低,去雄后5 d授粉的结实率最高。参试6个高丛蓝莓品种具有较高的杂交亲和性,不同杂交组合的结实率、坐果率不同且不呈正相关,同一对亲本的正反交结实率有较大差异,薄雾×夏普兰结实率、坐果率最高(分别为87.2%、62.8%),莱格西×奥尼尔结实率最低(为65.4%),布里吉塔×南金坐果率最低(为41.5%)。杂交果实的成熟期提前,杂种果实性状受母本影响较大。不同浓度赤霉素处理的始发芽时间均显著缩短,200 mg/L赤霉素是奥尼尔×南金发芽最佳处理,大于600 mg/L赤霉素浸种不利于奥尼尔×夏普兰发芽。赤霉素处理不同组合的杂交种子发芽率在35.0%~75.0%,始发芽时间在20~30 d。[结论]相同倍性蓝莓品种杂交亲和性较高,授粉以去雄后3~5 d为宜,赤霉素处理能显著缩短杂交种子的始发芽时间。     

不同花期花粉授粉对烟草授粉效果和种子质量的影响

[目的]为确定烟草花粉的适宜采集时期。[方法]采集不同花期的花粉,研究不同花期花粉授粉对云烟85、云烟87和K326授粉效果和种子质量的影响。[结果]随着花粉采集花期的延长,花粉活力逐渐提高;对于云烟85、云烟87和K326,始开期和盛开期的花粉授粉效果好,种子产量和质量高。[结论]在保证种子产量、质量和纯度的基础上,宜采集始开期花粉进行授粉。     

铁皮石斛的生物学特性与开花授粉技术研究

[目的]研究铁皮石斛的生物学特性和开花授粉技术。[方法]采用实地考察、显微观察与统计分析的方法对铁皮石斛的表皮细胞、气孔器及其分布、花期进行了调查与分析,并对铁皮石斛花、果实和种子的主要特征、人工授粉方法及花粉粒保存方法进行了研究。[结果]铁皮石斛上表皮细胞排列整齐,每个细胞周围有5～7个细胞与其相邻;其气孔全部分布于下表皮;铁皮石斛花主要集中在6月下旬开放,从花芽萌发到花朵开放大约需要35 d;自然状态下的铁皮石斛很难完成授粉过程;铁皮石斛人工自花传粉成功率只有30%,人工异花授粉成功率为100%;室温即可实现花粉粒的保存。[结论]通过人工种内杂交授粉可以极大的提高铁皮石斛的结实率。     

德宏州油茶低产原因的初步调查

[目的]对德宏州油茶落花落果造成油茶低产的原因进行初步研究。[方法]使用碘-碘化钾和23,5,-氯化三苯基四氮唑法测量花粉的活力,用离体培养方法检测花粉的萌发率,用苯胺蓝染色法观察花粉管生长情况,分析不同授粉方法对油茶坐果率的影响。[结果]与结实差的植株相比,结实好的普通油茶花的花粉活力和花粉管数量明显较高,但它们的花粉萌发率无显著差异;异花授粉有利于油茶的坐果。[结论]油茶花粉的生长发育情况对德宏油茶的产量有重要影响。     

欧洲丁香品种间人工杂交授粉试验初报

【目的】探索欧洲丁香不同品种间人工杂交亲和力的强弱及杂交种子的萌发情况。【方法】以17个欧洲丁香品种为亲本,进行32个杂交组合的人工杂交授粉和杂交种子播种试验,对杂交组合的结实率、产种率及种子出苗率进行统计分析。【结果】13个杂交组合的结实率为0,其余19个均能结实,但结实率和产种率差异很大;在采收到种子的18个杂交组合中,有5个组合的种子出苗率为0,9个组合低于20%,4个组合的在30%~60%之间,共获得杂交苗633株。【结论】根据欧洲丁香品种亲本间亲和力的强弱,对各个杂交组合的适宜程度进行评价。     

CaCl2和GA3对盐胁迫下紫藤花粉萌发的影响

[目的]为探明缓解盐胁迫抑制紫藤花粉萌发的方法.[方法]采用花粉人工培养法,研究了不同浓度的CaCl2和GA3对盐胁迫下紫藤（Wisteria sinensis （Sims） Sweet）花粉萌发的影响.[结果]20 mmol/L NaCl胁迫对紫藤花粉活力和花粉管长度均显著降低（P＜0.01）,且花粉管出现分枝.1.5～ 12.0 mmol/L CaCl2和25 ～ 150 mmol/L GA3对盐胁迫下紫藤花粉萌发率和花粉管长均有一定的促进作用,而且均表现出随浓度的增加先增后降的趋势.[结论] CaCl2和GA3的最适处理浓度分别为2.0和100 mmol/L.     

水曲柳人工林树木叶片营养元素及其化学计量特征的季节动态

目的探究水曲柳及其混交树种长白落叶松、红皮云杉、红松叶片C、N、P含量及其化学计量特征的季节动态,为水曲柳人工林的优化经营提供理论依据。方法以东北林业大学森林培育实验站天然林窄带状皆伐后营造的29年生水曲柳纯林、水曲柳长白落叶松混交林、水曲柳红皮云杉混交林和水曲柳红松混交林为对象,利用野外取样调查与室内实验分析相结合的方法,分析水曲柳人工林叶片C、N、P含量及其化学计量特征的季节变化。结果(1) 生长季内水曲柳叶片C、N、P含量的总体变化趋势是逐渐降低,变化范围为556.71~446.15g/kg、32.61~18.74g/kg、3.62~1.26g/kg;C/N、C/P、N/P的总体变化趋势是逐渐升高,变化范围为17.06~23.81、150.60~350.56、9.10~16.98。(2)混交树种长白落叶松、红皮云杉和红松叶片C含量及红皮云杉与红松叶片N、P含量呈波动态势,长白落叶松叶片N、P含量逐渐降低;长白落叶松叶片的C/N和C/P平稳升高,红皮云杉叶片的C/N和C/P连续下降,红松叶片的C/N和C/P呈波动态势。长白落叶松和红松叶片的N/P先升高后降低,红皮云杉叶片的N/P先下降后平稳。(3)水曲柳和长白落叶松叶片的N、P含量显著高于红皮云杉和红松叶片的N、P含量,C/N和C/P显著低于红皮云杉和红松叶片的C/N和C/P。结论培育水曲柳长白落叶松混交林和水曲柳纯林优于培育水曲柳红松混交林和水曲柳红皮云杉混交林,培育过程中应注意在生长季初期保证林地氮肥的数量,中期注意补充林地的氮肥和磷肥。      

耳叶补血草花粉萌发及花粉管生长状况的荧光显微观察

[目的]耳叶补血草是蓝雪科补血草属的多年生草本植物,具有较高的生态、药用和观赏价值.但其结实率极低影响了种群的繁殖.[方法]通过野外观测、荧光染色等手段对其花部特征、花粉萌发及花粉管生长状况等进行研究,以探讨耳叶补血草在传粉、受精过程中影响种子形成的因素.[结果]耳叶补血草的单花寿命较短仅1d,开花和散粉都集中在早上;花柱5枚,柱头丝状,但柱头花粉数量少且自花粉滞溜严重.自然状况下,花粉落置在柱头上5h后开始萌发,10 h时花粉管长约为花柱长度的1/4,20 h时花粉管达到花柱的2/3处,25～30 h花粉管到达子房.异花授粉比自花授粉有着较高的花粉萌发率和花粉管生长速度.[结论]耳叶补血草较多的花柱数目并没有增强雌蕊的授粉能力.柱头较差的花粉粘着力、自花粉滞留严重,且挤占花柱通道而抑制异花粉的萌发和生长,成为耳叶补血草传粉受精方面影响结实的因素.