副猪嗜血杆菌的分离培养和血清型鉴定

从全国十多个省市送检的疑似患多发浆膜炎与关节炎猪的病料中分离到32株细菌,进行了细菌形态观察、培养特性和生化特性鉴定;根据副猪嗜血杆菌16S rRNA序列设计引物进行PCR扩增,将822bp扩增片段连入T-载体后测序,再与GenBank(M75065)中的序列进行比对,表明其与国外副猪嗜血杆菌菌株16S rRNA序列的同源性为97％以上,确定为副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)。将其中的15株按Kieletein-Rapp-Gabriedson(KRG)琼脂扩散血清分型方法进行血清型鉴定,结果为血清5型3株、血清4型4株、血清13型2株、血清12型2株,另外有4株不能进行分型。该结果表明副猪嗜血杆菌在我国广泛存在。     

云南省副猪嗜血杆菌分离鉴定及其16S rRNA生物信息学分析

【目的】研究掌握云南省规模化猪场副猪嗜血杆菌的流行血清型及敏感药物,为该省副猪嗜血杆菌防控提供依据。【方法】应用TSA培养基从云南规模化养猪场疑似副猪嗜血杆菌病例样品中分离到2株细菌(DYJ20160901、CH20190501),观察细菌形态学、进行生化试验、观察卫星生长现象、进行特异性片段PCR扩增和药敏试验,以及对菌株进行mPCR分子血清定型和16S rRNA序列分析。【结果】2菌株培养特性、形态学特性及生化试验与副猪嗜血杆菌相似,且均扩增出了1090 bp的特异性片段;通过mPCR分子血清定型在5/12型泳道扩增出了450 bp的特异性片段,通过16S rRNA序列分析显示2菌株与Genbank中已公布的不同血清型HPS菌株同源性为97.3%～99.6%,分别与Genbank登录号FJ667952、AB078972的两株血清5型的菌株构成一个分支,同源性高达99.1%和99.6%。2菌株药敏试验高度敏感率达100%的药物:强力霉素、大观霉素、头孢噻肟、氟苯尼考、头孢曲松钠,耐药率为100%的药物:林可霉素。【结论】DYJ20160901、CH20190501菌株均为副猪嗜血杆菌血清5型;二者都高度敏感的药物是强力霉素、大观霉素、头孢噻肟、氟苯尼考、头孢曲松钠。     

副猪嗜血杆菌的分离与鉴定及其16S rRNA 生物信息学分析

从湖南省内送检的疑似患多发性浆膜炎与关节炎的猪病料中分离到12株细菌,细菌学试验证明12株细菌均符合副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)形态、培养和生化特性.根据HPS 16S rRNA序列设计引物对12株细菌进行PCR扩增,均得到预期目的条带,将扩增片段测序并运用DNAStar软件与GenBank中不同血清型HPS基因序列进行比对,表明其与Genbank中已公布的不同血清型HPS菌株16S rRNA序列的同源性为90.4%~99.9%,其中与血清5型同源性最高,对所测序列与参考序列进行遗传进化树分析,结果表明其中11株属于血清5型HPS.     

陕西省副猪嗜血杆菌的分离及其基于tbpA基因的分型鉴定

【目的】检测副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)在陕西关中地区的感染状况,并对分离菌株进行基因型分析,为该地区副猪嗜血杆菌病的流行病学研究提供依据。【方法】从陕西关中地区14个发生多发性关节炎和浆膜炎的猪场采集30份病料,分离细菌,通过其培养特性和形态观察及生化试验和PCR等方法对分离株进行鉴定,并用Blast软件对分离株的16SrRNA序列进行同源性比对,同时对分离菌株进行了几种常见药物的敏感性检测。通过3种限制性内切酶TaqⅠ、AvaⅠ、AfaⅠ,对已被鉴定为副猪嗜血杆菌菌株的转铁结合蛋白A编码基因(tb-pA)进行PCR-RFLP基因分型。【结果】分离得到了5株疑似副猪嗜血杆菌菌株,经培养特性和形态观察、生化试验、PCR鉴定及序列同源性比对,将其鉴定为副猪嗜血杆菌。PCR-RFLP分型结果表明,从5株副猪嗜血杆菌分离株中共得到了4种基因型,分别为EBC、BBJ、EBJ、EAD。药物敏感性检测结果表明,分离菌株的耐药性均较强,且不同分离株对同一药物敏感性不同。【结论】副猪嗜血杆菌病在陕西关中地区猪群中流行比较严重,其基因型较多且与其他地域的菌株有一定差异。     

副猪嗜血杆菌上海株的分离鉴定及耐药特性的研究

从送检的病猪内脏中分离到4株副猪嗜血杆菌疑似菌株,经过培养菌落及镜检形态观察、V因子依耐性试验及卫星生长现象、溶血性检查、生化特性以及特异的PCR检测,对其做了准确的鉴定,均为副猪嗜血杆菌。将4株分离株PCR扩增产物进行测序分析并与GenBank中报道的部分副猪嗜血杆菌的同源性达到97.3%~100%。药敏试验结果表明分离菌株已对新生霉素、阿米卡星、林可霉素、红霉素和庆大霉素等抗生素产生了较强的耐药性,仅阿奇霉素、头孢拉定、菌必治、先锋必、氧氟沙星和呋喃妥因等药物抑菌效果较好。     

猪伪狂犬病毒、副猪嗜血杆菌和猪链球菌混合感染的病原分离与鉴定

为了探究河南省某规模化猪场育肥猪发生疫情的病因,进行了猪伪狂犬病毒的血清学和PCR鉴别诊断,同时对分离细菌进行了形态鉴定、PCR鉴定、血清型鉴定和药敏试验。结果显示,猪伪狂犬野毒血清学和PCR检测均为阳性,同时分离到副猪嗜血杆菌和猪链球菌。经鉴定副猪嗜血杆菌为血清4型,链球菌为血清2型。药敏试验结果表明,副猪嗜血杆菌和链球菌对头孢哌酮、头孢他定、头孢噻肟、头孢曲松、头孢呋辛、头孢唑啉、亚胺培南、阿莫西林、氨苄西林、万古霉素敏感。     

副猪嗜血杆菌江西株的分离鉴定及生物学特性研究

为调查江西省副猪嗜血杆菌的感染情况,从而为江西副猪嗜血杆菌病的防冶提供基础.从江西省32个规模化养猪场的80份表现纤维素性炎症的病料中分离得到了20株革兰氏阴性杆菌,经细菌形态、生化反应及PCR鉴定.结果表明分离菌为副猪嗜血杆菌,16S rRNA序列与NCBI上公布的序列同源性在97％左右.生物学特性研究表明,该菌只能...     

副猪嗜血杆菌分型血清的制备及其在流行病学研究上的应用

用副猪嗜血杆菌1~15血清型参考菌株和2株澳大利亚分离株高免健康家兔制备副猪嗜血杆菌分型血清,建立副猪嗜血杆菌KRG血清学分型方法(基于热稳定抗原免疫扩散试验的血清学分型方法),并用该方法对田间分离的62株副猪嗜血杆菌进行血清型鉴定。结果顺利制备出了副猪嗜血杆菌15个血清型菌株的分型血清,建立了副猪嗜血杆菌KRG分型方法,62株副猪嗜血杆菌分离株中血清5型占22.5%、4型占16.1%、12型占14.5%、不能分型的菌株占16.2%。试验建立的副猪嗜血杆菌KRG分型方法,可为中国副猪嗜血杆菌血清学分型提供技术支持;血清型5、4、12为中国部分地区近2年最流行的血清型,为副猪嗜血杆菌病的防制提供了有效的参考依据。     

一株血清9型副猪嗜血杆菌的分离鉴定与药敏试验

【目的】确定河南某猪场送检病猪疑似副猪嗜血杆菌的血清型,为其提临床用药提供参考。【方法】经实验室分离培养,对分离到的病原菌进行生化鉴定、药敏试验和血清型分型。【结果】该分离菌革兰氏染色为阴性短杆菌,具有多形性;发酵葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糖,甘露醇、木糖、尿素、氧化酶阴性,硝酸还原酶、接触酶阳性,MR和VP试验阴性,有卫星现象;16Sr RNA扩增出了821 bp目的片段,测序结果与GenBank公布的副猪嗜血杆菌NR_118757.1同源性达98%以上;分离到的细菌对头孢噻呋、阿米卡星、硫酸黏菌素、甲砜霉素、卡那霉素、庆大霉素、多西环素、氟苯尼考高敏,对阿莫西林、恩诺沙星耐药;采用14对分型引物对分离菌进行血清型分型,多重PCR扩增到700 bp左右大小的目的基因片段,测序结果与GenBank公布的KC795429.1副猪嗜血杆菌funV同源性达99.85%,确定该分离菌株为9型副猪嗜血杆菌。【结论】本研究结果将为副猪嗜血杆菌的防治提供参考。     

滨海县部分猪场副猪嗜血杆菌病的血清学调查与药敏试验

为了解江苏省滨海县副猪嗜血杆菌病感染情况,采用副猪嗜血杆菌间接血凝试验疑似病猪进行了血清型鉴定,结果分离菌株只与HPS 4型阳性血清呈凝集反应,表明滨海县地区部分猪场的猪对副猪嗜血杆菌病存在一定程度的感染,通过药物敏感性试验,发现该地区菌株对环丙沙星、强力霉素、头孢噻呋钠、阿米卡星、卡那霉素等药物高度敏感.     

副猪嗜血杆菌河南株的分离鉴定及药敏试验

为弄清河南省规模化猪场副猪嗜血杆菌的感染情况、培养特性及药物敏感特性,并为副猪嗜血杆菌病的诊断、防治和进一步研究提供依据,对河南省3个猪场出现疑似副猪嗜血杆菌感染的病猪进行病理剖检、细菌分离培养、生化鉴定和药敏试验。结果表明,分离到的致病菌经形态特征和生化反应鉴定,有3株为副猪嗜血杆菌。药敏试验显示3株分离菌对左旋氧氟沙星均高敏,对恩诺沙星、磺胺间甲氧嘧啶、氟苯尼考、头孢噻呋钠为高度或中度敏感,而对替米考星、阿莫西林、氨苄青霉素等有抵抗力。     

山西省鸡传染性鼻炎病原株的分离鉴定

从山西省某鸡场疑似鸡传染性鼻炎的病鸡眶下窦分离到2株革兰氏阴性小杆菌,通过PCR扩增其16S rDNA序列,测序结果经过比对鉴定为副鸡嗜血杆菌。玻板凝集试验结果确定分离株血清型为A型;抗生素药物敏感试验结果表明,分离菌株对磺胺甲恶唑、磷霉素高敏,对头孢哌酮、头孢噻肟、氯霉素、卡那霉素中敏,对庆大霉素、氧氟沙星耐药。     

草鱼肠道不动杆菌的分离鉴定及药敏试验

从草鱼肠道中分离获得1株细菌,编号为CAX1,进行细菌形态学观察、理化特征、16S r DNA序列分析及药敏试验等研究。结果表明CAX1菌株为革兰氏阴性短杆菌,进一步采用PCR方法扩增其16S r DNA,测序显示其大小为1 531 bp,序列比对表明CAX1分离株与厦门不动杆菌新种(Acinetobacter xiamenensis)16S r DNA同源性达97.1%,系统进化树分析显示CAX1菌株与不动杆菌亲缘关系最近,自然聚类为1支;药敏试验结果显示CAX1菌株对庆大霉素、阿莫西林、氨苄西林、头孢哌酮等药物敏感。     

猪高热病副猪嗜血杆菌的分离鉴定与药敏试验

从2006~2007年河南省发生猪高热病的65家猪场196份病料中分离到6株革兰氏阴性细小杆菌,通过培养特性试验和生化试验初步怀疑为副猪嗜血杆菌,将其进行PCR鉴定,结果表明,分离菌为副猪嗜血杆菌。对6株分离株进行小鼠毒力试验和药物敏感试验,结果表明,6株分离菌能致死小鼠,对头孢他啶、头孢噻呋、头孢唑啉、头孢哌酮、多西环素、痢特灵敏感。     

河南省副猪嗜血杆菌分离鉴定与药敏试验

为发病猪场合理用药控制和治疗副猪嗜血杆菌病,从河南省7家猪场12份疑似副猪嗜血杆菌病病料中分离到2株革兰氏阴性细小杆菌,进行了细菌培养特性试验和培养菌PCR鉴定.结果表明:分离的菌株为副猪嗜血杆菌,2株分离菌对土霉素、氟本尼考、苯唑西林钠、头孢噻呋、诺氟沙星、阿米卡星和硫酸链霉素等敏感,对氨苄青霉素、磺胺嘧啶、硫酸卡那霉素具有耐药性.     

副猪嗜血杆菌的分离鉴定与药敏试验

从费县某养猪场送检的病猪中分离到1株细菌,经细菌形态、染色镜检、培养特性和生化试验鉴定为副猪嗜血杆菌。经药敏试验显示,分离菌株对氨苄青霉素、头孢噻呋钠、头孢氨苄、头孢拉定等药物高度敏感;对强力霉素、庆大霉素、环丙沙星、恩诺沙星、氟苯尼考等药物中敏;对青霉素、链霉素、四环素、阿莫西林等药物不敏感。本试验为该猪场副猪嗜血杆菌病的防治提供了理论依据。     

副猪嗜血杆菌的分离鉴定与药敏试验研究

副猪嗜血杆菌病是一种猪的传染病,主要引起断奶仔猪和保育猪发病。试验对天津某规模化猪场疑似副猪嗜血杆菌病猪采集病变明显的组织进行细菌分离培养、显微镜镜检、生化试验等实验室诊断,结合病猪的临床症状和病理变化特点,判定该细菌分离株为副猪嗜血杆菌。药敏试验结果显示,该株副猪嗜血杆菌对头孢噻呋、阿米卡星等药物高度敏感。     

福建省猪副猪嗜血杆菌病血清学调查及菌株ompP5基因序列分析

应用血清抗体间接ELISA方法对福建省8个地市的23个猪场采集的378份血清进行Hps抗体检测;采集疑似副猪嗜血杆菌感染病例的病料,用脱纤马血TSA平板对Hps进行分离与鉴定;用琼扩试验对分离株进行血清型鉴定;根据GenBank登录的HS0165株的ompP5基因序列合成1对特异性引物,提取分离菌株的基因组DNA进行PCR扩增,回收目的片断并进行克隆、测序和同源性分析。结果显示,福建省23个猪场的Hps场阳性率为100%,猪群阳性率为36.78%;从疑似感染Hps的猪只中共分离到52株Hps,分别为血清2型、4型、5型、13型和未定型,其中血清13型Hps分离最多;3株Hps分离株的外膜蛋白P5基因(ompP5)序列与GenBank中提交序列的同源性达到了93%以上。     

陕西省规模猪场副猪嗜血杆菌的分离鉴定及敏感药物筛选

为了解陕西省部分规模猪场副猪嗜血杆菌株的血清型及耐药特性,以指导临床用药,防控副猪嗜血杆菌病,对陕西省3个规模化猪场共60头表现副猪嗜血杆菌症状的病猪进行病理剖检,采集肝脏、肺脏、淋巴结、关节液等进行细菌分离培养及生化试验,并对分离菌株进行耐药性试验。结果表明,分离到42株副猪嗜血杆菌,其中血清1型1株(2.38%),4型8株(19.05%),5型15株(35.71%),12型3株(7.14%),13型11株(26.19%),其他型1株(2.38%),未定型的有3株(7.14%)。药敏试验结果表明,分离菌株对阿奇霉素、复方新诺明、氟苯尼考、洛美沙星高度敏感,对左旋氧氟沙星、替米考星、庆大霉素、诺氟沙星、磺胺甲氧嘧啶中度敏感,对头孢噻呋钠、链霉素、红霉素、林可霉素、环丙沙星、强力霉素不敏感。     

副猪嗜血杆菌PCR检测方法的建立与初步应用

针对副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)16 S rRNA序列设计1对特异性引物,能扩增出821 bp的特异性DNA片段,并据此建立了快速准确鉴定副猪嗜血杆菌PCR方法,临床试验证明该方法具有很好的特异性和敏感性.13份疑似病料检测结果表明,PCR检测结果与传统生化鉴定结果符合率为100％.结果表明已成功建立了副猪嗜血杆菌PCR检测方法,并可应用于临床副猪嗜血杆菌的检测.