蓖麻粗毒蛋白的提取及其杀鼠活性初步研究

[目的]探讨蓖麻粗毒蛋白作为灭鼠药的可行性以及不同溶剂脱脂对蓖麻粗毒蛋白的生物活性的影响。[方法]用石油醚、乙醚、二氯甲烷3种溶剂分别对蓖麻粗籽进行脱脂后,用醋酸水溶液从脱脂的蓖麻饼中提取蓖麻毒蛋白,通过杀鼠活性试验比较3种蓖麻粗毒蛋白的杀鼠活性。[结果]3种蓖麻粗毒蛋白均有明显的杀鼠活性,小鼠死亡率均达100%。采用不同溶剂脱脂对蓖麻毒蛋白的活性没有影响,但二氯甲烷脱脂的蓖麻粗毒蛋白平均致死速度相对较慢。[结论]该研究为进一步分离和提纯杀鼠活性成分提供了线索,也为开发蓖麻作为植物源灭鼠剂提供了依据。     

蓖麻WRKY基因的电子克隆及其生物信息学分析

利用电子克隆技术从蓖麻EST库中发现了一个新的蓖麻WRKY基因。生物信息学分析表明,该基因编码一个由348个氨基酸组成的、相对分子质量为37．8kDa的蛋白,具有一个由60个氨基酸组成的WRKY结构域（164～224）,定位于细胞核。序列分析表明,该蛋白可能具有转录、转录调控、信号转导、胁迫应答等功能。     

甲基胺草磷诱导蚕豆染色体结构与蛋白质组分变化

本试验对农业上广泛使用的酰胺类除草剂甲基胺草磷,在1～4mg·L-1浓度下,对蚕豆幼苗胚根的生长抑制效应、根尖分生组织细胞染色体结构变异及蛋白质组分变化进行了研究。结果发现,在1～2mg·L-1浓度下,可以观察到影响幼苗胚根生长和部分细胞中的染色体结构变异现象,在4mg·L-1浓度下,幼苗胚根生长被严重抑制,由对照组的(4.55±0.61)cm降至(0.92±0.022)cm。在4mg·L-1浓度下处理的根尖分生组织细胞中,多极分裂细胞的出现频率为9.4%;染色体桥、断片和滞后染色体的出现频率为2.8%。双向电泳分析结果表明,6个新的蛋白质斑点,(78kDa/pI8.0,76kDa/pI7.8,35kDa/pI7.3,32kDa/pI6.8,30kDa/pI7.2,28kDa/pI6.9)被诱导产生,1个蛋白质斑点,36kDa/pI5.8的含量减少。幼苗生长受抑,染色体结构变异和蛋白质组分变化可以认为与甲基胺草磷的处理有关。本研究从细胞学与生物化学水平上对甲基胺草磷的作用机理做了比较研究,发现3～4mg·L-1的甲基胺草磷是临界浓度,可以抑制蚕豆幼苗的生长、分生组织细胞染色体结构变异和蛋白质组分变化。上述研究结果可为农业上合理、安全使用酰胺类除草剂提供试验依据。     

蓖麻毒蛋白的改性与抗癌活性

蓖麻毒蛋白对细胞杀伤是非特异性的，因此有严重的毒副作用．文章对蓖麻毒蛋白的改性及改性后的抗肿瘤活性进行了综述，并对由蓖麻毒蛋白构建的免疫毒素在肿瘤的治疗中显示出的良好应用前景进行了讨论．     

蓖麻不同部位叶柄毒蛋白含量的测定

试验以蓖麻为研究对象,优化从叶柄中提取蛋白的过程,利用BCA试剂盒、UVwin5紫外软件V5．1．0、BandScan蛋白定量分析软件相结合的方法对蓖麻组培苗不同部位的叶柄中毒蛋白的含量进行测定．为研究蓖麻毒蛋白在蓖麻组织培养植株不同部位的分布情况奠定基础。结果表明：从总体上看,蓖麻叶柄中的毒蛋白的含量与叶位呈正比,即随着叶位的升高,叶柄中的毒蛋白含量增加。     

蓖麻毒素粗提物杀虫作用的研究

在室内条件下，用不同溶剂提取的蓖麻毒素提物对3种害虫进行的杀虫作用试验表明：蓖麻毒素粗提物对这3种害虫有不同程度的杀虫作用，主要杀虫活性物质为蓖麻碱和毒蛋白，毒蛋白表现为触杀作用，蓖麻碱表现为触表和胃毒的综合作用，并具有一定拒食作用。     

蓖麻毒蛋白在细胞内的转运过程研究进展

蓖麻毒蛋白(Ricin)是一种核糖体失活蛋白,对真核细胞有毒性。它移除真核细胞核糖体大亚基28SrRNA保守序列中特异的腺嘌呤残基,使蛋白合成过程终止,导致细胞死亡。本文对蓖麻毒蛋白在植物细胞内合成后转运出细胞的过程,以及蓖麻毒蛋白作用于哺乳动物细胞时转运过程的研究进展予以简要描述。     

蓖麻毒素应用研究进展

蓖麻毒素包括蓖麻毒蛋白、蓖麻碱、蓖麻变应原和血球凝集素4种毒性物质。通过概述上述4种毒性物质的理化性质及毒性、在医药和农药方面的应用研究进展，以期为蓖麻毒素后续的开发利用奠定基础。     

细菌纤维素产生菌双向凝胶电泳分析技术

对细菌纤维素产生菌株———葡糖酸醋杆菌菌体蛋白的提取过程、等电点的分布及纯化方法等方面进行了探索和优化。结果表明:葡糖酸醋杆菌蛋白主要分布在pI 4~7的范围内;采用超滤浓缩后进行2D Clean-up试剂盒纯化,可以获得更优的蛋白分离效果;在考马斯亮蓝G250染色条件下,有效分离出(1037±65)个蛋白点;建立了高质量葡糖酸醋杆菌蛋白的双向凝胶电泳分析技术。     

蓖麻资源综合利用研究进展

蓖麻的适应性广、抗逆性强，是具有重要生态价值和经济价值的能源植物。对蓖麻资源进行有效的开发和利用，需要从资源综合利用的角度对蓖麻价值进行分析。本研究首先介绍了蓖麻油及其衍生物在生物柴油、精细化工等领域的应用概况，其次归纳和总结了蓖麻在盐碱和重金属污染修复领域的研究进展，从结构、作用机制、生物活性等多个角度对蓖麻毒蛋白和蓖麻碱做了归纳和总结。最后指出了蓖麻资源综合利用中存在的问题并提出了相应的发展建议，为蓖麻产业的可持续发展提供了理论依据。     

嗜水气单胞菌S蛋白的生化特性

致病性嗜水气单胞菌(Aerom onashydrophila, Ah) J-1 株具有S层结构。用甘氨酸缓冲液处理AhJ-1 株菌体细胞,离心, 上清即为粗提的S蛋白。用自制兔抗AhJ-1 株S蛋白抗体建立间接ELISA法, 检测结果显示, 20～30 h S蛋白表达量较高。粗提的S蛋白经离心、Sephadex G100 凝胶层析获纯化的S蛋白。经SDS-PAGE电泳分析为单一多肽, 相对分子质量51 500。等电聚焦分析为单一条带, 等电点 (pI) 为5.01。氨基酸组分分析表明, S蛋白由天门冬氨酸等16种氨基酸组成, 其中疏水性氨基酸占42.1% , 不含半胱氨酸。N端序列分析结果为ADFQLNEKSA。     

烟草4CL与虎杖STS融合基因的构建、表达及融合蛋白纯化

白藜芦醇具有抗菌、抗癌、抗肿瘤、保护心血管、抗氧化等众多药理作用。4-香豆酰辅酶A连接酶(4-Coumarate-CoA ligase,4CL)和芪合酶(Stilbene synthase,STS)是其生物合成的关键酶和限速酶。本研究利用悬挂PCR(Overlap PCR)技术将白藜芦醇生物合成的最后两个关键酶4CL和STS的基因融合,构建原核表达pET30a-Nt4CL::PcPKS5重组质粒,原核表达Nt4CL::PcPKS5融合酶蛋白。预测其共编码945个氨基酸,含15个氨基酸的过渡氨基酸链(Linker),编码蛋白质分子量(Mr)为102.8kDa,等电点(pI)为5.69。原核表达筛选结果表明:温度为25℃,IPTG浓度为1.0mmol/L,诱导起始OD600值在0.4~0.6之间,诱导4h时目标蛋白的表达量最高。细胞破碎后,经Ni 2+亲和柱纯化、PD-10柱脱盐后可纯化得到融合蛋白。本研究为通过分子生物学途径合成白藜芦醇奠定基础。     

一种纯化苏云金杆菌Cry1Ac蛋白的方法

Cry蛋白的纯化技术在很大程度上制约了其结构与功能的研究.为此,提出了一种以等电点沉淀方法纯化苏云金杆菌Cry1Ac的原毒素,用分子筛层析纯化其活性毒素的方法.结果表明:Cry1Ac的原毒素在pH值5.05条件下沉淀纯化效果好;以纯化的原毒素激活进行分子筛层析,收集其最大峰便可获得较高浓度的活性毒素;该方法不仅纯化效果...     

双孢蘑菇2796凝集素的提取及其部分理化性质研究

双孢蘑菇2796的子实体经PBS浸提、40％～60％饱和度的硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析和Sephadex G-100分子筛柱层析纯化得到双孢蘑菇2796凝集素.双孢蘑菇2796凝集素经SDS-PAGE检测为单一条带,测得亚基相对分子质量为15.7 kD,通过Sephadex...     

玉米SOD的分离与纯化

探索高速、快速的玉米SOD分离与纯化方法,旨在为玉米SOD的规模化生产提供依据。利用金属螯合亲和层析和DEAE-纤维素离子交换层析相结合的方法分离纯化玉米SOD,得到2种达到电泳纯的SOD组分(A、B),并对它们的基本性质进行了初步分析。SDS-PAGE法测定A、B两组分的亚基分子量分别为20 kD和16.4kD;由电泳后的定位染色情况可知,这2种SOD组分均属于Cu/Zn-SOD;等电聚焦表明,A、B两组分的等电点分别为7.2和6.9。     

Bipolaris australiensis HD-1胆红素氧化酶纯化、鉴定及其酶学性质

[目的]为了获得B.bipolaris HD-1胆红素氧化酶纯品,确定酶的同源性及其常规酶学性质.[方法]将B.bipolaris HD-1发酵液依次通过硫酸铵盐析、阴离子交换层析和凝胶过滤层析确定蛋白的纯度、浓度和酶活力;通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF）法获得氨基酸序列,并利用Mascot软件在NCBI蛋白库中的比对,以确定同源蛋白来源;用SDS-PAGE方法测其表观分子量;用等电聚焦方法测定等电点;用Linwerver-Burk双倒数作图法测定米氏常数;并对该酶的酶学性质进行了常规的测定.[结果]获得具有胆红素氧化酶酶活性的电泳纯单体蛋白,酶活为46 000 U/L,比活为1.15 U/mg;MALDI-TOF共获得135个氨基酸,该蛋白与来源于Hel-minthosporium tritici-vulgaris的漆酶前体蛋白序列同源性达100％;蛋白的表观分子量为68 kDa;pI为4.1;它对ABTS和胆红素的米氏常数分别为Km（ABTS） =1.8×10-5 mol/L（pH 3.0）和Km（bilirnbin）=2.7×10-5 mol/L（pH 7.5）;对胆红素的最适催化活性为36℃,酶在-40℃下可保持2年,酶活保持在90％以上,在pH 8 ～9.5下可保持相当高的催化胆红素活性,能够耐受高浓度的硝酸钠和尿素,低浓度的叠氮化钠对酶活有促进作用而高浓度则抑制,对氯化钠、溶解氧敏感.[结论]该蛋白具有典型的胆红素氧化酶特性,又存在明显的不同.     

枇杷果肉过氧化物酶的分离纯化及其性质研究

枇杷果肉制成丙酮粉,通过硫酸铵沉淀分级分离、透析、DEAE-纤维素离子交换柱层析纯化,获得两个酶活力峰,第二活力峰的酶制剂经过PAGE和SDS-PAGE电泳获得单一纯的过氧化物酶(PODⅡ),纯酶比活力为710.5U/mg。酶亚基分子量为22.6kDa,等电点pI为3.6。酶的动力学研究表明:酶的最适pH为5.0,在pH2.6～10区域较稳定;酶最适温度是35℃,对热敏感,高于45℃以上酶的稳定性差。酶对愈创木酚和H2O2的表观Km值分别为20.58和12.04mmol/L,以愈创木酚为底物时,酶比活力最大,其次是苯酚、邻苯二酚、对苯二酚和间苯二酚,酶未能催化以焦性没食子酸为底物的氧化反应。Al3+、Mn2+、Zn2+和Hg2+对酶有抑制作用,Mg2+、Ca2+、Cu2+、Fe2+、Ba2+和Pb2+对酶有激活作用;半胱氨酸等12种化合物对酶活力均有不同程度的抑制作用,在防止或减轻枇杷采后的酶促褐变中将起到重要的作用。     

苦荞胰蛋白酶抑制剂纯化方法的研究

以苦荞种子为材料,经热变性、硫酸铵盐析后制成苦荞胰蛋白酶抑制剂(TBTI)粗品,然后用离子交换层析及亲和层析的不同洗脱体系对其进行纯化。结果发现:亲和层析法操作简单、纯化效率高。十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示为一条带。分子量约为12 kDa～15 kDa。     

紫花芸豆胰蛋白酶抑制剂的分离和纯化

[目的]从紫花芸豆中分离纯化胰蛋白酶抑制剂。[方法]以紫花芸豆为材料,采用脱脂、酸抽提、热变性、硫酸铵分级沉淀及离子交换层析和凝胶过滤层析等方法,分离纯化胰蛋白酶抑制剂。[结果]胰蛋白酶抑制剂经PAGE和IEF电泳显示单一条带。凝胶过滤法测定其表观分子量约为59kD。SDS电泳结果显示它有3个亚基,分子量分别为34、16、15kD。等电聚焦法测定其等电点为5．25。动力学的方法检测PVTT与胰蛋白酶发生不可逆抑制作用。[结论]离子交换层析和凝胶过滤层析法能快速地分离纯化紫花芸豆中的胰蛋白酶抑制剂。     

氮饥饿环境中稻瘟病不同致病力菌株分泌蛋白的双向电泳图谱分析*

 采用双向电泳技术研究了稻瘟病菌株Y99-63和Y98-16在氮饥饿条件下分泌蛋白群的组成及差异。在稻瘟病菌株Y99-63和菌株Y98-16分泌蛋白的2 DE图谱中分别检测出 262±10和253±10个蛋白质点。其中有130个蛋白质点为菌株Y99-63特异表达,121个蛋白质点为Y98-16特异表达,132个蛋白质点为两菌株共同表达。在两菌株共同表达的表达量相差达5倍以上的有38个蛋白质点,其中有25个蛋白质点在菌株Y99-63表达量较大,有13个蛋白质点在菌株Y98-16表达量较大。生物信息学预测稻瘟病菌分泌蛋白的分子量在10-20kDa以及等电点在5.0-5.5范围内蛋白质点数最多。菌株Y99-63特异表达分泌蛋白的分子量10-20kDa范围内蛋白质点最多, 菌株Y98-16特异表达分泌蛋白的分子量在20-30kDa范围内蛋白质点数最多,两菌株共同表达的分泌蛋白分子量在10-20kDa范围内蛋白质点数最多。菌株Y99-63特异表达分泌蛋白的等电点在5.5-6.0范围内蛋白质点数最多,菌株Y98-16特异表达分泌蛋白的等电点在4.5-5.0范围内蛋白质点数最多,两菌株共同表达分泌蛋白等电点在5.0-5.5范围内蛋白质点数最多。稻瘟病菌不同菌株在氮饥饿条件下产生的分泌蛋白有较大差异。