家养鲤科鱼暴发性传染病的病原研究

从不同地区、不同鱼种的濒死病鱼的实质性脏器中分离到一种革兰氏阴性、有运动力的短杆菌,具有如下特点:氧化酶和V-P反应均呈阳性,发酵葡萄糖产酸、产气,发酵甘露醇、水杨素和阿拉伯糖,不发酵肌醇,鸟氨酸脱羧酶阴性,对新生霉素不敏感。用API-20E系统试剂盒检测,证实其为嗜水气单胞菌。用该菌人工感染健康鱼,可引致与自然发病鱼类似的病症,其半数致死量(LD_(50))为5×10~3个菌。在该菌的培养上清中存在着一种具有溶血活性的毒素。研究证明,家养鲤科鱼暴发性传染病的病原为产毒素的嗜水气单胞菌,该病的准确名称应为嗜水气单胞菌败血症。     

用发酵罐制备嗜水气单胞菌疫苗用菌液培养条件的优化

本试验探讨了用发酵罐培养嗜水气单胞菌灭活疫苗生产菌株Ｊ－１株菌液的最佳条件。分别以发酵罐和摇床在不同的培养条件下培养Ｊ－１株制备菌液,前者１２个批次,后者６个批次。比较不同的培养条件对细菌菌体数量及ＨＥＣ毒素产量的影响。结果表明：发酵罐培养优于摇床培养,以产毒素培养基于２８℃发酵罐通气培养Ｊ－１株,培养２８小时效果最佳,培养菌液含菌量达２．９×１０１０ｃｆｕ／ｍｌ,培养液上清的溶血价达２７,发酵液中残糖为０．１２ｇ／Ｌ,符合发酵工艺要求。     

迟缓爱德华氏菌检验程序的研究

本试验研究了迟缓德华氏菌（Edwardsiellatrada,Et）的细菌学及致病因子检测,确定了相应检测指标,制定了检验程序。对不同来源的Et作分离及生化鉴定,确定10项生化鉴定指标。用三种方法即平板法（PlateAssay,PA）、接触法（ContactHemolysis,CH）和上清法（SunernatantAs－say,SA）检测Et溶血素,阳性率依次为75％、75％、57．14％。28株Et中,18／26的胞外产物（Extra－cellularProducts,ECP）对HEP－2细胞有细胞毒性,17／28菌株有侵袭力。用ATCC15947株ECP的抗血清进行Det－ELISA,检测阳性率为19／26（73．08％）。     

鲫鱼的细胞免疫应答研究

以嗜水气单胞菌（AhJ-1）灭活疫苗腹腔注射免疫鲫鱼（Crucian carp）,加强免疫后取血分离出淋巴细胞,进行巨噬细胞移动抑制试验,结果显示致敏淋巴细胞于体外培养时,在特异性抗原刺激下,产生了巨噬细胞移动抑制因子,抑制了巨噬细胞移动,移动抑制指数约为0.67,初步说明细胞免疫应答在鲫鱼的免疫应答中具有一定的地位。     

嗜水气单胞菌HEC毒素基因的克隆及酶谱分析

嗜水气单胞菌ＨＥＣ毒素是该菌重要的致病因子和保护性抗原。为了解其分子生物学特性，用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ法提取了嗜水气单胞菌Ｊ－１株的染色体，经ＥｃｏＲＩ酶切、琼脂糖凝胶电泳后作Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ，用ＤＩＧ标记的ＨＥＣ毒素探针检测，其５．０ｋｂ的酶切片段呈阳性。回收该片段，与ｐＵＣ１９相连，转化大肠杆菌ＪＭ１０９。提取Ｘ－ｇａｌ平板上白色菌落的质粒，经大小比较、ＥｃｏＲＩ酶切分析及ＤＩＧ标记ＨＥＣ毒素核酸探针斑点杂交鉴定，获得ｐＨＥＣ１１等含５．０ｋｂ目的ＤＮＡ片段的重组质粒。ｐＨＥＣ１１质粒经酶切、电泳，证实目的ＤＮＡ片段中含有ＢａｍＨＩ、ＳｍａⅠ、ＰｓｔⅠ及ＰｖｕⅡ等酶切位点，并绘制了其物理图谱。同时还构建了若干亚克隆，为研制嗜水气单胞菌基因工程苗提供了目的基因片段。     

嗜水气单胞菌苗预防白鲫暴发性传染病的田间试验

本文对田间大规模使用嗜水气单胞菌苗预防淡水鱼暴发性传染病进行了初步研究。选取患病死亡最为严重的白鲫为对象,采用腹腔注射和浸泡两种免疫方法,对精养鱼池放养的1万3千余尾白鲫进行免疫接种,所用疫苗为自行研制的嗜水气单胞菌苗。结果表明:在暴发性传染病自然流行的情况下,免疫接种组的发病死亡率为10.8%,未免疫接种的平行对照组发病死亡率为16.4%,两者间的差异极显著(P<0.01);在免疫接种组中,浸泡免疫组的发病死亡率为10.4%,腹腔注射免疫组的发病死亡率为11%。两者间的差异不显著(P>0.05),由此可见,应用嗜水气单胞菌苗进行免疫接种,可有效地预防淡水鱼的暴发性传染病。浸泡免疫的成功为该苗的进一步推广展示了广阔的前景。