冷鲜鸡产气荚膜梭菌及其毒素的潜在危害分析

为调查广州市冷鲜鸡产气荚膜梭菌及其毒素危害,从广州市各大型超市随机采集鸡肉样品进行产气荚膜梭菌分离、鉴定和毒素分型,同时检测分离菌株对常用抗生素的抗药性,并采用Eric-PCR对分离出梭菌进行亚型分析。结果表明,从78个样本中分离出57株产气荚膜梭菌,所有菌株均为A型,其中,cpb2(Atypical)型40株,cpb2(consensus)型1株;含net B基因菌株1株;药敏结果显示,分离出的产气荚膜梭菌大部分对氟苯尼考、氨苄西林、青霉素敏感;值得注意的是产气荚膜梭菌分离株对仅可用于人的抗生素克林霉素、头孢氨卞的耐药率分别达73.68%和31.58%。Eric-PCR结果显示,相似性为80%时,57株梭菌可分为13个亚型,提示污染来源的多样性。     

缬草、龙脑精油的抑菌活性

以共水蒸馏法提取的缬草精油和龙脑精油为研究对象,采用二倍稀释法测定2种精油的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC),根据单独抑菌实验结果,选用抑制作用较强的3种细菌进行2种精油的联合抑菌实验。结果表明:对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和大肠杆菌,缬草精油和龙脑精油均具有明显抑制作用;对沙门氏菌,龙脑精油抑制作用明显,缬草精油抑制作用不明显;对青霉和黑曲霉, 2种精油抑制作用均不明显; 2种精油复配对抑制金黄色葡萄球菌没有增效作用,对抑制枯草芽孢杆菌、大肠杆菌有协同作用,说明不同浓度配比的2种精油对不同细菌有不同抑制效果,协同作用对细菌具有选择性。     

畜禽肠道梭菌的克星——克洛生粉剂

克洛生是从健康鸡的肠道中分离出来的枯草芽孢杆菌属的PB6菌株。该菌株在肠道中定植后分泌的脂蛋白可以抑制多种引发肠炎的产气荚膜梭菌的繁殖。PB6菌株对高温和酸碱度具有很好的耐受性。饲料中添加的有机酸和抗球虫药等成分均不会对PB6菌株产生抑制作用。与抗生素相比较,克洛生在抑制有害微生物繁殖的同时,     

酸化剂及其衍生物与植物精油复合对常见致病菌体外抑菌效果研究

为了探讨酸化剂及其衍生物(辛酸、单辛酸甘油酯、月桂酸、单月桂酸甘油酯、丁酸和苯甲酸)与植物精油(主要成分有香芹酚、百里香酚及肉桂醛等)复合对常见致病菌的体外抑菌效果,试验采用二倍稀释法将酸化剂及其衍生物与植物精油复合,并对4种常见致病菌的标准菌进行抑菌试验,测定最小抑菌浓度(MIC)。结果显示:植物精油与辛酸质量比为1.5时对致病性大肠埃希氏菌、产气荚膜梭菌的抑菌效果最好;植物精油与单辛酸甘油酯质量比为1.5时对金黄色葡萄球菌、致病性大肠埃希氏菌的抑菌效果最好;植物精油与月桂酸质量比为1.3时对致病性大肠埃希氏菌、产气荚膜梭菌的抑菌效果最好。说明酸化剂及其衍生物与植物精油复合能起到更好的抑菌效果,存在协同作用。     

SDS-PAGE法检测产气荚膜梭菌毒素型研究

为了探索一种快速、准确检测产气荚膜梭菌毒素型的方法,以便有效预防控制该病的流行和发生,利用SDS-PAGE方法,对通过ELISA鉴定的20株(A型16株、C型3株和D型1株)德国牛舍环境气源性产气荚膜梭菌分离株,以及通过Multiplex-PCR鉴定的57株山东省疫区产气荚膜梭菌分离株外毒素蛋白的相对分子质量进行测定,以确定毒素的种类,进而确定菌株的毒素型。结果表明,产气荚膜梭菌标准株、德国牛舍环境气源性产气荚膜梭菌分离株、山东省疫区产气荚膜梭菌分离株粗提外毒素的质量浓度分别为3.261,2.238~3.333,1.451~3.109mg/mL,精提外毒素的质量浓度分别为0.803,0.521~0.999,0.530~0.812 mg/mL。SDS-PAGE法检测的20株德国牛舍环境气源性产气荚膜梭菌分离株中A型17株、C型2株、D型1株,与ELISA检测结果的符合率为95.0%;SDS-PAGE检测的57株山东省疫区产气荚膜梭菌分离株全部是A型,与Multiplex-PCR检测结果的符合率为100%。说明应用SDS-PAGE方法对产气荚膜梭菌的检测结果与ELISA方法的检测结果有一定的差异性,与Multi-plex-PCR方法的检测结果一致。     

零售肉品中产气荚膜梭菌的检测与定型：以陕西关中地区为例

【目的】检测陕西关中地区肉品中的产气荚膜梭菌,并进行血清型和产气荚膜梭菌肠毒素(CPE)基因型鉴定,初步掌握该地区肉品中产气荚膜梭菌的污染状况。【方法】从陕西西安、杨凌、武功等地的超市、农贸市场、肉食品小摊随机采集新鲜生熟鸡、猪肉及其制品,共计314份,经细菌分离纯化、染色镜检、生化试验和单重PCR检测确定分离菌株为产气荚膜梭菌,应用多重PCR检测分离菌株的血清型并进行cpe毒素基因检测。【结果】样品中产气荚膜梭菌检出率为45.86%,且均为A型cpe产气荚膜梭菌,其中熟肉制品、生鲜肉检出率分别为50.91%和43.14%;鸡肉、猪肉检出率分别为53.06%和33.90%。【结论】陕西关中地区的肉品中存在产气荚膜梭菌污染,建议针对可能引起产气荚膜梭菌污染和大量繁殖的环节采取更有效的预防措施。     

6种中药对鸡源产气荚膜梭菌的体外抑菌试验

观察了中药抗鸡源产气荚膜梭菌的药效.从初步诊断为坏死性肠炎的病鸡中分离鉴定出产气荚膜梭菌,选用6种中药水提取物对鸡源产气荚膜梭菌进行体外抑菌试验测定其最小抑菌浓度(MIC值).结果表明,在6种中药水提取物中,黄芩、黄连的抑菌效果最好,其MIC值均为3.9 mg/mL,而穿心莲和板蓝根仅在高浓度时具有抑菌作用,具体的抑菌...     

4种植物精油对致天然茶枯膏酸败的菌种的抑菌效果

研究薰衣草、玫瑰、茶树、艾叶等4种不同植物精油对引起天然茶枯膏酸败的主要病原菌的抑制效果,且经前期研究发现,其主要病原菌是枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌。采用牛津杯法测定4种不同植物精油对待测菌株的抑菌活性,测定不同精油的最低抑菌浓度(MIC),比浊法比较不同植物精油对待测菌株的生长曲线的影响。结果表明,薰衣草是抑制天然茶枯膏酸败的最佳精油。     

凝结芽孢杆菌对畜禽肠道有害菌及有益菌的抑菌性能研究

为了评估一株饲用益生菌凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans,菌株编号为YNAU 5517)对畜禽肠道主要有害菌(大肠杆菌K88、大肠杆菌K99、猪霍乱沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌、产气荚膜梭菌)及肠道有益菌(罗伊氏乳酸杆菌、嗜热双歧杆菌)的抑制作用,试验设计无菌蒸馏水组、土霉素组、凝结芽孢杆菌组等3个处理组,采用牛津杯抑菌试验法,以抑菌圈直径值(Diameter of inhibition zone,DIZ)判定该株凝结芽孢杆菌对以上7个指示菌的抑制作用及效果。结果显示:该凝结芽孢杆菌对猪霍乱沙门氏菌的抑制作用达到高敏感;对大肠杆菌K88、大肠杆菌K99、鸡白痢沙门氏菌及产气荚膜梭菌的抑制作用均为敏感;对罗伊氏乳酸杆菌、嗜热双歧杆菌的抑制作用为不敏感。以上结果提示凝结芽孢杆菌具有抑制肠道有害菌、维持肠道有益菌、平衡畜禽肠道菌群的作用。     

不同植物来源单宁和没食子酸对常见致病菌的体外抑菌效果研究

为了解不同植物来源单宁对危害水产畜牧业的主要致病菌（大肠杆菌、沙门氏菌、产气荚膜梭菌、金黄色葡萄球菌）的抑菌效果。采用体外共培养的方法,通过分析不同来源植物单宁和没食子酸对4种常见致病菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度,来探讨单宁和没食子酸对致病菌的体外抑菌作用的影响。结果显示,与水解单宁（塔拉、栗木、五倍子、橡椀）和缩合单宁（白坚木、荆树皮）相比,没食子酸对大肠杆菌、沙门氏菌和产气荚膜梭菌具有极强的抑菌作用,但是对于金黄色葡萄球菌没有抑菌作用。其余不同植物来源的单宁对4株致病菌均有抑菌效果,对大肠杆菌抑菌效果最好,对产气荚膜梭菌抑菌效果较弱,并且抑菌效果随着单宁浓度升高而增加。塔拉单宁对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌抑菌效果最好,最小抑菌浓度为16mg/mL,对产气荚膜梭菌最小抑菌浓度为64mg/mL。白坚木单宁对致病菌抑菌效果最差,对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌最小抑菌浓度为64mg/mL,对产气荚膜梭菌最小抑菌浓度达到128mg/mL。说明不同植物来源的单宁抑菌效果存在明显差异,塔拉单宁对常见致病菌均有较好的抑菌效果,在水产畜牧业上拥有非常大的潜力和市场前景。     

复合酶制剂及植物精油对感染产气荚膜梭菌肉仔鸡抗氧化及免疫指标的影响

[目的]本研究旨在明确酶制剂、植物精油对产气荚膜梭菌感染肉鸡免疫及抗氧化性能的影响。[方法]试验选用648只1日龄肉鸡,采用小麦-豆粕型基础日粮,2×2×2因子设计,试验处理为植物精油(EO:0、60mg·kg~(-1))、复合酶制剂(CSM:0、500mg·kg~(-1))、细菌感染(产气荚膜梭菌:感染、未感染)及其交互作用。[结果]感染产气荚膜梭菌提高肉鸡21日龄时血清尿酸水平,提高28日龄时血清IL~(-1)β水平。日粮中添加复合酶制剂可提高21日龄时血清IL~(-1)β、IL~(-1)0及尿酸含量,降低28日龄时血清IL~(-1)β水平。日粮中复合酶制剂或植物精油的添加还可提高产气荚膜梭菌感染血清谷胱甘肽过氧化物酶活性。[结论]复合酶制剂或植物精油可提高产气荚膜梭菌感染仔鸡的免疫功能及抗氧化力。     

表乳糖对长双歧杆菌抑制产气荚膜梭菌生长的影响

产气荚膜梭菌是一种常见的人畜禽共患的病原菌,可引起人的急性食物中毒和慢性肠道感染,或导致动物的坏死性肠炎等,严重危害人体健康和畜禽养殖业的发展。采用对长双歧杆菌和产气荚膜梭菌单独培养和共培养的方式,研究表乳糖及其同分异构体乳糖、乳果糖等特异性碳源对双歧杆菌的生长特性及其抑制产气荚膜梭菌生长的影响。结果表明,长双歧杆菌能够在以表乳糖为碳源的m TPY培养基中生长良好,并显现出与乳糖相似的生长趋势。在与产气荚膜梭菌共培养的过程中,长双歧杆菌能够显著地抑制产气荚膜梭菌的生长,且表乳糖相较于乳糖和乳果糖,能显著提高长双岐杆菌的存活率。还利用牛津杯法对长双歧杆菌培养上清液对产气荚膜梭菌的抑菌效果进行评价,证明其培养上清液对于产气荚膜梭菌具有较好的抑菌活性。上述结果为应用长双歧杆菌抑制产气荚膜梭菌提供理论依据,对深入研究表乳糖调控机制具有重要的指导意义。     

噬菌体裂解酶Cp51在重组乳酸菌中的表达及对A型产气荚膜梭菌的抗菌活性

【目的】构建A型产气荚膜梭菌Clostridium perfringens裂解酶重组表达乳酸菌Lactococcus lactis,并检测重组菌及其表达产物的抗菌效果。【方法】全基因合成噬菌体裂解酶Cp51基因,构建PNZ8148-Cp51原核表达重组载体,电转化至乳酸菌NZ9000,经乳链菌肽诱导表达可溶性Cp51蛋白;用比浊法检测表达蛋白对A型产气荚膜梭菌的抗菌活性;利用细菌液混合培养检测重组菌对A型产气荚膜梭菌增殖的抑制作用。【结果】噬菌体裂解酶Cp51在乳酸菌中成功表达,为1 268 bp;质量浓度1μg·mL-1以上的重组蛋白对A型产气荚膜梭菌具有高效抗菌活性;重组乳酸菌对A型产气荚膜梭菌增殖有一定的抑制效果,混合培养后使产气荚膜梭菌活菌数从9×10~9 CFU·mL~(-1)下降到约9×10~8 CFU·mL~(-1)。【结论】A型产气荚膜梭菌噬菌体裂解酶重组乳酸菌构建成功,为后续优化表达和临床应用研究奠定了基础。     

产气荚膜梭菌毒素型菌落多重PCR方法的建立及应用

根据产气荚膜梭菌α、β、ε和ι毒素基因cpa、cpb、etx、iA设计并合成4对特异性引物,建立快速鉴定产气荚膜梭菌毒素型的多重PCR方法。结果显示:产气荚膜梭菌A、B、C、D和E型参考菌株均扩增出相应的片段,而肉毒梭菌、气肿疽梭菌、腐败梭菌、诺维梭菌的扩增均为阴性;将产气荚膜菌株单个菌落稀释100倍,仍能扩增出相应的目的片段。利用此多重PCR方法对16株不同动物来源的产气荚膜梭菌进行分型鉴定,并与毒素中和试验鉴定结果进行比较,结果显示2种方法具有较高的符合率。该方法可有效进行产气荚膜梭菌的快速检测和分型,对产气荚膜梭菌感染与食品安全问题的研究具有参考价值。     

解淀粉芽孢杆菌B15产脂肽的分离鉴定及抑菌机理

从葡萄表皮分离获得1株对霉菌具有明显抑制作用的解淀粉芽孢杆菌B15,对其发酵液经过酸沉、Sephadex LH-20层析柱,对抑菌脂肽的特性进行研究。结果发现,该菌株产脂肽对葡萄灰霉病菌有较好的抑制效果,60~100℃处理或p H值为2~10的脂肽对灰霉病菌的抑菌活性几乎没有影响;脂肽有效最低抑菌浓度为0.017 mg/m L。经高效液相色谱法(HPLC)和质谱分析发现,解淀粉芽孢杆菌B15产脂肽主要活性成分为iturin A、fengycin。     

江苏地区临床健康肉羊的产气荚膜梭菌感染分析

为揭示临床健康肉羊的产气荚膜梭菌感染概况,于2018年4-6月选择江苏地区肉羊养殖场30个,采集3～5月龄肉羊肛拭子样品892份.所有样品接种至梭菌增菌液,于厌氧条件下增菌培养后,以PCR进行产气荚膜梭菌的检测,并对部分检测为产气荚膜梭菌阳性的样品进行细菌分离.结果表明:175份(19.62％)肛拭子样品为产气荚膜梭菌阳性,提示临床健康肉羊的消化道可携带产气荚膜梭菌.数据分析表明,3、4、5月龄羊差异不显著,免疫羊与未免疫羊差异不显著.通过对分离的68株产气荚膜梭菌进行α、β、ε和ι毒素基因检测,确定了其中43株(63.24％)为A型产气荚膜梭菌,25株(36.76％)为D型产气荚膜梭菌,提示A、D型是江苏地区肉羊感染的主要产气荚膜梭菌类型.     

牛产气荚膜梭菌分离株毒素基因的检测与分析

为了解黑龙江省牛源产气荚膜梭菌分离株的基因型,检测β2和CPE两种次要毒素因子在牛源产气荚膜梭菌分离株中的携带情况。通过PCR方法检测了产气荚膜梭菌13个野毒株的cpa、cpb、etx、itx四种分型毒素、cpb2、cpb2的两个等位基因突变体(atypical cpb2和consensus cpb2)及肠毒素(cpe)基因。结果表明:92.3%(12/13)的产气荚膜梭菌分离株为A型,检测到1株D型;A型菌中β2毒素基因检出率为66.7%(8/12);β2毒素基因阳性菌株中75%(6/8)携带非典型cpb2基因,50%(4/8)携带典型cpb2基因,非典型突变体占优势。动物致病性试验发现β2毒素阳性菌株(8株)与β2毒素基因阴性菌株(4株)各有2株分离株具有致病性。所有菌株CPE毒素基因PCR检测均为阴性。研究为产气荚膜梭菌病的发病机理和疫苗开发提供了理论依据。     

引起高温火腿胖听的细菌鉴定

采用常规的细菌学分离方法,从胖听的高温火腿中分离出一株产生芽孢没有荚膜的革兰氏阳性厌氧杆菌。该菌发酵葡萄糖,产酸产气,蔗糖不定,乳糖和杨苷不发酵,细菌具有酯酶活性,不产生外毒素,对实验动物无致病性,其特性符合产芽孢梭菌(Cl.sporogenes)。实践证明,该菌可以引起罐头食品的腐败或变质。     

拮抗产气荚膜梭菌S87的功能性芽孢杆菌的筛选与鉴定

为了筛选拮抗产气荚膜梭菌S87的功能性芽孢杆菌,采集健康鸡的新鲜鸡粪进行80℃水浴处理和琼脂打孔扩散法等方法进行筛选,选取抑菌圈直径最大的菌株进行斜面保藏,送至中国科学院微生物研究所进行鉴定。结果表明：筛选出一株拮抗产气荚膜梭菌S87的芽孢杆菌B-20-81,经过鉴定为贝莱斯芽孢杆菌,其抑菌圈直径可达22.4 mm,可为无抗防治家禽坏死性肠炎提供理论依据。     

牛产气荚膜梭菌黑龙江分离株的分型鉴定

为了对三株未知型牛源产气荚膜梭菌(Clostridium Perfringens,Cl.perfringens)进行基因分型鉴定,将三株未知型菌株进行厌氧培养、纯化,观察培养特性,进行革兰氏染色镜检以及生化管鉴定,根据产气荚膜梭菌α、β、ε和ι毒素基因以及产气荚膜梭菌16S r RNA保守基因分别合成5对引物,建立PCR方法。经培养特性、革兰氏染色镜检、生化特性以及16S r RNA保守基因细菌PCR鉴定均符合产气荚膜梭菌,PCR结果表明,三株产气荚膜梭菌均为A型。