猪流行性腹泻病毒抗体间接ELISA检测方法的建立与应用

【目的】建立2种猪流行性腹泻病毒(PEDV)抗体间接ELISA检测方法.【方法】分别以GD-1株PEDV灭活全病毒和原核表达的COE融合蛋白作为包被抗原,确定最佳ELISA条件,检验其重复性、特异性等,并进行临床应用.【结果和结论】确定了2种ELISA方法的最佳条件,重复性试验显示变异系数分别小于4.60%和5.30%,特异性试验检测口蹄疫病毒、猪瘟病毒、猪圆环病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒阳性血清均为阴性,并具有良好的稳定性和较长的保存期.临床样品检测结果显示,223份血清样品总阳性率分别为97.3%(217/223)和98.6%(220/223),2种方法检测的阳性率相近,具有良好的检出率和很高的符合率,为PEDV的抗体检测及流行病学调查提供了一种技术手段.     

蓝舌病多克隆抗体C-ELISA检测方法的建立和比较研究

 为建立一种检测成本低、操作简便的蓝舌病血清抗体监测方法,本研究通过制备群特异性的蓝舌病多克隆检测抗体和优化抗原固定技术,建立了蓝舌病多克隆抗体C-ELISA检测方法。通过对150份牛羊已知阴性血清的检测确定该检测方法的cut-off值为40%;对58份已知阳性血清样品同时进行中和实验和C-ELISA检测,检测结果经SPSS软件进行t检测统计分析,Sig.（双侧）=0.651,相关性0.912,相关性显著。对24个BTV血清型阳性血清,2份牛BVD阳性血清,2份羊口蹄疫阳性血清,2份羊痘阳性血清进行检测。结果表明,24个BTV血清型阳性血清为阳性,其他血清全部为阴性。对150份已知阴性血清和55份已知阳性血清用中和试验、美国VMRD 公司试剂盒和本方法分别进行检测。结果表明,本检测方法与中和试验检测结果符合率达100%,进口试剂盒符合率为96.7%。     

液相阻断ELISA在口蹄疫病毒抗体水平检测中的应用

分别利用口蹄疫病毒Asia-I型和O型液相阻断ELISA方法,对健康猪、牛、羊血清,O型、Asia-I型免疫血清,以及人工感染Asia-I型FMDV的猪、羊血清和人工感染O型FMDV牛血清进行了抗体水平检测,同时利用3ABC-I-ELISA对液相阻断ELISA方法所选的部分阴性血清进行了验证试验.结果显示:利用Asia-I型和O型液相阻断ELISA方法筛选的阴性动物,在免疫和攻毒后,血清抗体水平显著升高,表明该法可完全用于口蹄疫阴性动物筛选及口蹄疫病毒抗体水平的检测.     

狂犬病病毒抗体检测试剂盒有效性的对比试验

为掌握北京市密云地区狂犬病疫苗注射后免疫抗体的阳性率和未免疫疫苗的狂犬病病毒感染率,使用狂犬病病毒抗体检测ELISA试剂盒对血清、血浆中的狂犬病病毒IgG抗体进行检测,经过连续几次的试验对比,得出当试验阳性血清OD值<试验的有效性阳性对照OD值时,会导致检测的样品阴性数增加;当试验阴性血清OD值>试验的有效性阳性对照OD值,会导致检测的样品阳性数增加。     

利用Asia1型口蹄疫病毒VP1蛋白的单克隆抗体建立单抗竞争ELISA方法

应用纯化的Asia1型口蹄疫病毒VP1蛋白作为抗原,采用过碘酸钠法标记纯化的单抗,建立了单抗竞争ELISA,检测10份阳性猪口蹄疫血清及200多份阴性血清,试验结果与样品的背景相一致。敏感性试验和重复试验结果表明,该方法具有稳定和敏感等特性,适合Asia1型猪口蹄疫病毒抗体的监测。     

口蹄疫抗体免疫层析试纸的临床应用及性能评价

为评价前期研制的猪口蹄疫O型抗体检测试纸的临床应用效果,检测了162头份口蹄疫病毒(FMDV)多肽疫苗免疫猪血清和87头份灭活疫苗免疫猪血清,并与UBI FMDV抗体检测ELISA和美国BioXL FMDV抗体检测ELISA做平行对比试验。结果显示,试纸与2种ELISA方法的符合率分别为95.06%和96.55%。说明该试纸可以用于猪FMDV O型抗体的临床检测,为评价口蹄疫疫苗免疫效果提供了快速、简便的方法。     

牛巴泰病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及应用

本研究以牛巴泰病毒(BATV)NM/12株作为诊断抗原,初步建立了BATV间接酶联免疫吸附试验(ELISA)的检测方法,并对反应条件进行初步优化。结果表明,该方法对赤羽病毒阳性血清、牛布鲁氏杆菌阳性血清、牛病毒性腹泻阳性血清无交叉反应,仅与BATV阳性血清发生特异性反应,表明其特异性较强;经敏感性试验测定,阳性血清1∶640倍稀释时检测仍为阳性,显示其敏感性高。应用该方法对内蒙古自治区、黑龙江省和吉林省的523份牛血清进行牛巴泰病毒血清流行病学调查,总阳性率为10.7(56/523),阳性检出率与临床普遍使用的中和试验符合率为100%。本试验建立的间接ELISA方法具有较高的敏感性和特异性,为牛群抗体检测和BATV流行病学调查提供了一种简便的血清学诊断方法。     

山羊关节炎-脑炎ELISA方法的建立及其应用

 应用间接酶联免疫吸附试验（ELISA），检测了山羊关节炎-脑炎病毒（CAEV）试验感染山羊和自然感染山羊的血清抗体，确定了最适宜的反应条件。CAEV感染山羊血清终点滴度结果表明：ELISA比琼脂扩散试验（ID）敏感性高，对自然感染山羊检出率比ID高3%左右。CAE标准阳性血清和自然感染阳性血清预先被特异性抗原中和后的ELISA反应均呈阴性，从而证实了本方法的特异性。因此，本方法适于CAE的流行病学调查和监测工作。     

间接ELISA检测鸭瘟抗体的研究和应用

应用提纯的鸭瘟病毒作为包被抗原建立间接ELISA方法,用于鸭瘟抗体的检测。试验结果表明,该法特异性强,与鸭病毒性肝炎(血清I型)、鸡新城疫病毒(Lasota株)和鸡减蛋综合征病毒等阳性血清不发生交叉反应,与血清中和试验的符合率为100%。该方法敏感、快速、准确性高、特异性强、重复性好,可用于大批量样品的检测,是一种适合于对鸭群进行免疫抗体水平检测简便实用的方法。     

口蹄疫非结构蛋白抗体假阳性现象分析

在开展口蹄疫病毒非结构蛋白抗体检测时,经常会有假阳性出现,这阻碍了对口蹄疫防控形势的科学判断,无形中增加不必要的工作负担。本试验通过对牛群进行口蹄疫病毒非结构蛋白抗体及口蹄疫病毒免疫抗体检测,发现假阳性出现的原因,并对假阳性出现的持续性进行分析。