可口革囊星虫多糖酶法—碱梯次提取工艺优化及其抗氧化和抑菌性能分析

【目的】优化可口革囊星虫多糖酶法—碱梯次提取工艺,并分析两阶段提取多糖的体外抗氧化和抑菌活性,为可口革囊星虫酶解产物及不溶性虫体成分的梯次化加工利用提供参考依据。【方法】以新鲜可口革囊星虫为材料、多糖提取率为考察指标,经木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶处理,联合酶解和滤渣碱提工艺,两阶段梯次化提取多糖,并测定可口革囊星虫多糖对DPPH自由基和羟基自由基(·OH)的清除率,采用纸片法测定其抑菌性能。【结果】可口革囊星虫多糖酶法—碱梯次提取最佳工艺为:复合酶(木瓜蛋白酶∶碱性蛋白酶=1∶2)添加量4.0%、酶解温度55℃、酶解时间4 h、料液比1∶5(g/mL)、滤渣碱提时间2.0 h、氢氧化钠浓度1.5%,在此条件下,获得酶解多糖提取率为1.076%,滤渣碱提多糖提取率为0.171%,总多糖提取率为1.247%。酶提多糖和滤渣碱提多糖对·OH清除的半抑制浓度(IC50)分别为2.6和4.9 mg/mL,清除DPPH自由基的IC50分别为4.4和5.1 mg/mL。酶提多糖和碱提多糖在1.560 mg/mL以上对金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌和枯草芽孢杆菌均有一定的抑制作用。【结论】采用优化的酶法—碱梯次提取工艺可从可口革囊星虫酶解液和滤渣中有效提取多糖,且两种多糖均具有较强的抗氧化活性和抑菌作用。     

铁皮石斛多糖的提取工艺优化及其抗氧化活性研究

【目的】优化铁皮石斛多糖的提取工艺,并评价铁皮石斛多糖的抗氧化活性。【方法】以铁皮石斛多糖提取率为响应值,在单因素试验基础上,以提取时间、提取次数及液(mL)料(g)比为试验因素,采用响应面法建立数学模型,筛选最佳提取工艺条件。采用自由基清除能力体系初步评价铁皮石斛多糖的抗氧化活性。【结果】通过二次回归模型响应面分析,获得最佳的铁皮石斛多糖提取工艺为:提取次数3次、提取时间2h、液(mL)料(g)比75。在此最佳工艺条件下,铁皮石斛多糖提取率为34.96%,与理论值(36.57%)相对误差小于5%。铁皮石斛多糖对DPPH和ABTS自由基的半数清除率分别为1.20和3.65mg/mL。【结论】采用响应面法优化得到了铁皮石斛多糖的最佳提取工艺,该工艺方便可行,得到的多糖具有较强的抗氧化活性。     

黄芪水溶多糖的提取及抗氧化活性研究

为提高黄芪水溶多糖的提取率,本研究通过单因素试验和正交试验相结合,对水提醇沉法提取黄芪水溶性多糖的工艺(料液比、提取温度、提取时间)进行优化,其优化工艺为料液比1∶15、提取温度90℃、提取时间80 min,此条件下黄芪水溶粗多糖提取率为18.60%,纯化多糖(糖含量65.23%)提取率为11.21%。为研究所提取的黄芪水溶多糖的抗氧化活性,以Vc作为对照,开展羟基自由基(·OH)和超氧阴离子自由基(·O~(2-))清除试验,结果表明,水溶粗多糖、纯化多糖和Vc对·OH清除率在0.2～1.2 mg·mL~(-1)范围内、对·O~(2-)的清除率在0.5～3.0 mg·mL~(-1)范围内,均随浓度增加呈先升高后降低的趋势,三者对·OH清除率最大值分别为75.61%(0.8 mg·mL~(-1)),88.49%(1.0 mg·mL~(-1))和64.47%(1.0 mg·mL~(-1)),对·O~(2-)的清除率最大值分别为74.29%(2.0 mg·mL~(-1)),69.30%(2.5 mg·mL~(-1))和94.42%(2.0 mg·mL~(-1)),处理间差异均显著(P0.05)。由此可见,水提醇沉法提取黄芪水溶性多糖方法可行,且其在抗氧化活性的应用方面具有较大的潜力。     

响应曲面优化丹参多糖提取工艺及抗氧化活性分析

【目的】优化丹参多糖提取的柔化工艺参数,并分析其抗氧化活性,为丹参多糖产品的研发提供参考依据。【方法】以液料比(A)、浸提温度(B)、浸提时间(C)为自变量,以丹参多糖提取率(Y)为响应值,采用3因素3水平的响应曲面分析法优化丹参多糖提取工艺,同时测定丹参多糖对羟基自由基的清除能力。【结果】建立的丹参多糖提取二次多项回归方程为:Y=1.94-0.041A-0.056B+0.022C-0.046AB+0.13AC-0.03BC-0.24A2-0.75B2-0.44C2,其中浸提温度与浸提时间的交互作用对丹参多糖提取率影响显著(P<0.05)。丹参多糖提取的最佳柔化工艺条件为:液料比25∶1(mL/g)、浸提温度75℃、浸提时间90 min,在此条件下多糖提取率为1.94%,与预测值1.97%接近。丹参多糖对羟基自由基有明显的清除能力,且随多糖质量浓度的增加而逐渐增强;丹参多糖质量浓度为4.5 mg/mL的清除率最高,为42%。【结论】采用响应曲面法优化的提取柔化工艺参数准确可靠,可用于丹参多糖提取;丹参多糖具有一定的体外抗氧化能力,可作为食品及医药行业的天然抗氧化剂资源进行开发利用。     

林蛙卵多糖的提取工艺及其抗氧化作用研究

【目的】研究木瓜蛋白酶解法提取林蛙卵多糖的最佳工艺,测定提取的林蛙卵多糖的抗氧化活性。【方法】以林蛙卵为材料,通过单因素试验和正交试验分析料(g)液(mL)比、木瓜蛋白酶加酶量、pH值和酶解时间对多糖提取率的影响,确定林蛙卵多糖的木瓜蛋白酶法最佳提取工艺;应用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)法测定林蛙卵多糖的抗氧化活性。【结果】木瓜蛋白酶提取林蛙卵多糖的最佳条件为:料(g)液(mL)比1∶20,酶添加量为每g样品70mg,pH 6.0,酶解时间2.5h,在此条件下,林蛙卵多糖提取率为2.67%。林蛙卵多糖对DPPH自由基的半数清除率为1.81mg/mL。【结论】木瓜蛋白酶法对林蛙卵多糖的提取效果较好,林蛙卵多糖具有明显的抗氧化作用。     

南瓜多糖的提取及其抗氧化性研究

【目的】对酶法提取南瓜多糖的提取条件进行优化,并对其抗氧化能力进行测定.【方法】以南瓜为原料,通过单因素试验和正交试验优化了南瓜多糖果胶酶提取工艺条件,并采用水杨酸法测定了南瓜多糖对羟基自由基(·OH)的清除效果.【结果】南瓜多糖的最佳提取工艺条件为:提取温度30℃,果胶酶质量浓度2.0%,料液比1∶40,提取时间2.5h;该工艺条件下多糖的得率为27.19%.南瓜多糖质量浓度为0.3 mg/mL时对羟基自由基(·OH)的清除率最高,清除率为23.30%.【结论】研究结果为南瓜的精深加工提供了理论依据,并为深入研究南瓜多糖的功效奠定了基础.     

银杏叶多糖抗氧化性的研究

为了解银杏叶多糖对发酵乳品质及其抗氧化活性的影响,采用水提法从银杏叶中提取多糖,研究不同银杏叶多糖溶液浓度(0％、0.05％、0.10％、0.15％、0.20％、025％)对1,1-二苯基-2-苦肼基自由基(DPPH)和羟基自由基(·OH)清除的能力.结果表明:银杏叶多糖溶液在浓度为3.0mg/mL对DPPH的清除率为58.8％,在浓度为2.5mg/mL对·OH的清除率为61.3％,说明银杏叶多糖有较好的抗氧化性,可进行加工开发利用.     

矮冷水花多糖提取工艺及其抗氧化活性研究

采用水提醇沉法提取矮冷水花多糖,以多糖得率为指标,考察提取时间、提取温度、料液比及提取次数对多糖提取率的影响,在单因素试验基础上采用正交试验优化提取工艺参数。通过测定矮冷水花多糖清除·OH自由基能力,1,1-二苯基-2-苦基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基及螯合力来评价其抗氧化活性。结果表明,矮冷水花多糖水提取的最佳工艺条件为提取温度100℃、提取时间4 h、料液比1∶40(g/m L)、提取次数4次,在该条件下,矮冷水花多糖的提取率为1.19%,以正交试验极差分析得出温度对矮冷水花粗多糖提取影响最大。矮冷水花多糖清除DPPH自由基、·OH自由基及金属螯合力均随多糖浓度的增加而上升;1.28 mg/m L的多糖对DPPH自由基的清除率达70.7%,对羟基自由基的清除率为41.1%,1.28 mg/m L多糖的金属螯合力在562 nm下吸光值为0.98。因此,矮冷水花多糖有较强的抗氧化能力。     

葛根多糖提取条件的优化及其抗氧化活性的研究

采用乙醇回流法从葛根(Radix Puerariae)渣中提取葛根多糖,在单因素试验的基础上设计正交试验优化多糖提取工艺,并测定提取的葛根多糖的抗氧化活性.结果表明,优化的乙醇回流法提取葛根多糖的工艺条件为回流时间2.0 h、乙醇体积分数75％、料液比1∶40(m∶V,g/mL)、回流温度95 ℃,葛根多糖提取率为1.209％.提取的葛根多糖对O2-·和H2O2均有一定的清除作用,浓度为200 mg/L时,其对O2-·和H2O2的清除率分别为18.52％和13.68％.     

林蛙卵黑色素的提取工艺及其抗氧化活性

【目的】研究盐酸水解法提取林蛙卵黑色素的最佳工艺,并分析林蛙卵黑色素的抗氧化活性。【方法】以林蛙卵为原料,通过单因素试验和正交试验,分析盐酸浓度、原料与盐酸料(g)液(mL)比、水解温度、水解时间对黑色素提取率的影响,确定林蛙卵黑色素盐酸水解法的最佳提取工艺;应用DPPH法、邻二氮菲法及邻苯三酚自氧化检测法,测定林蛙卵黑色素对DPPH、羟基自由基和O-·2的清除能力。【结果】酸水解法提取林蛙卵黑色素的最佳条件为:盐酸浓度6mol/L,料液比1∶30,水解温度70℃,水解时间2h,在此条件下,林蛙黑色素提取率达7.02%。黑色素对DPPH自由基具有显著的清除作用,清除50%DPPH自由基对应的黑色素质量浓度为0.6 mg/mL;1.0mg/mL黑色素对羟基自由基的清除率达到65%;黑色素对O-·2的清除率不佳,最高达28.3%。【结论】盐酸水解法对林蛙卵黑色素的提取效果较好,林蛙卵黑色素具有明显的抗氧化作用。     

小麦赤霉病菌代谢物 Integracide A抗菌除草活性研究

为明确小麦赤霉病菌(Fusarium graminearum)农药活性代谢物的结构及其抗菌除草活性。采用乙酸乙酯提取、凝胶柱层析及反相高效液相色谱分离技术获得该代谢物高纯度活性化合物,采用核磁共振波谱和多级质谱等技术鉴定其化学结构;采用菌丝生长速率法、微量稀释法和平皿法测定该代谢物的抗真菌、抗细菌和除草活性。结果表明:活性化合物鉴定为四环三萜类抗生素-integracide A,其对烟草青枯病菌(Pseudomonas solanacearum)有强烈的抑菌活性,最低抑菌质量浓度(MIC)为6.25 mg/L;对反枝苋(Amaranthus retroflexus)种子萌发和根生长有强烈的抑制作用,抑制中浓度(EC50)分别为13.20mg/L和3.46mg/L。小麦赤霉病菌代谢物integracide A具有较强的抑菌和除草活性。     

温莪术根际促生菌株的促生效应及土壤定殖

测定了38株温莪术根际菌的产铁载体、解磷、产IAA的能力和抑制致病菌的能力。这些菌株中25株菌分泌IAA的量可达到1 mg·L-1以上;23株菌铁载体产量达到10+;10株菌解磷能力在2 mg·L-1以上;有3株菌对4种植物致病菌都有抑制效果。经综合评价筛选出3株菌进行盆栽试验。WP0702产较高的铁载体,抑菌能力较强;WK0101铁载体、解磷、产IAA的能力均较高,但无抑菌能力;这2株菌株均明显促进温莪术的产量。试验数据证明具有抑制致病菌的能力、解磷和分泌适当浓度IAA的菌株都有作为生物有机肥的可能。用lux AB基因标记菌株WP0702,证明该菌株在不同土壤中可以持续存活。WP0702和WK0101具有作为温莪术生物肥料、克服连作障碍的潜力。     

芽孢杆菌的筛选及其在豆粕发酵中的应用

筛选出耐酸耐胆盐且产蛋白酶、淀粉酶性能较好的优势芽孢杆菌菌株,以期制备高效复合益生素或应用于豆粕发酵。首先,对分离并镜检出的17株菌株进行耐酸耐胆盐特性初筛,而后对筛出的3株菌株进行耐酸耐胆盐梯度复筛,随后检测其发酵豆粕的蛋白酶和淀粉酶活性以及对抗原蛋白的降解能力。最后通过16SrRNA扩增比对鉴定筛选的菌种,进而通过MEGA4.0构建系统进化树进行分析。成功筛选出1株耐酸耐胆盐、产蛋白酶和淀粉酶,且能高效降解豆粕抗原蛋白的解淀粉芽孢杆菌B9。     

胡椒碱对番茄灰霉病菌抑制作用及其机理研究

为证明胡椒碱对番茄灰霉病菌的抑制作用并揭示胡椒碱对番茄灰霉病菌抑菌机理,观察不同质量浓度胡椒碱处理下番茄灰霉病菌的菌落直径、产孢量和孢子萌发率以及胡椒碱处理后对番茄灰霉病菌菌丝形态变化、番茄灰霉病菌可溶性蛋白含量、酶活性和细胞膜通透性的变化规律。结果表明:胡椒碱对番茄灰霉病菌有明显的抑制作用,当胡椒碱质量浓度为200 mg/L时,抑菌率可达80.6%,对番茄灰霉病菌产孢率和孢子萌发抑制率分别达到88.5%和88.8%,对菌体内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)的抑制率分别为82.7%、69.1%和70.4%,对琥珀酸脱氢酶(SDH)和NAD-苹果酸脱氢酶(NAD-MDH)抑制率分别为89.5%和94.9%;胡椒碱处理后番茄灰霉病菌可溶性蛋白含量低于对照组,细胞膜透性增强,番茄灰霉病菌菌丝变细、节间拉长、干瘪并坍塌。综上,胡椒碱可以有效抑制番茄灰霉病菌的生长,研究结果为新型植物源农药开发及番茄灰霉病防治提供了理论基础。     

木麻黄内生真菌次生代谢产物及生物活性

【目的】分离和鉴定木麻黄Casuarina equisetifolia枝条和果实中的内生真菌,筛选具有抗菌和抗氧化活性的内生真菌。【方法】采用组织块分离法分离木麻黄枝条和果实中的内生真菌,通过菌落观察和分子生物学相结合的方法对分离到的内生真菌进行鉴定;采用薄层层析-生物自显影法测定木麻黄内生真菌次生代谢产物对细菌的抑制活性,采用多孔板-DPPH显色法测定抗氧化活性。【结果】从木麻黄枝条和果实中共分离鉴定得到12株内生真菌,枝条和果实内生真菌存在明显的差异,相同的菌株只有2株,分别为Cef-1(Pseudofusicoccum sp.)和Cef-7(Pestalotiopsis sp.);12株内生真菌分属于9个不同的属中,分别为Pseudofusicoccum、葡萄座腔菌属Botryosphaeria、拟盘多毛孢属Pestalotiopsis、木霉属Trichoderma、曲霉属Aspergillus、裂菌属Rhytidhysteron、拟茎点霉属Phomopsis、镰刀菌属Fusarium和炭疽菌属Colletotrichum。其中,葡萄座腔菌属种类最多,为木麻黄内生真菌的优势种群,其次是拟盘多毛孢属真菌。抗细菌活性的结果表明,Cef-2(Botryosphaeria sp.)表现出最强的抑制活性,对所有供试细菌的抑菌斑直径均大于10 mm,强于阳性对照硫酸链霉素,Cef-1和Cef-9(Fusarium sp.)对青枯病菌Ralstonia solanacearum也表现出较好的抑制活性。内生真菌Cef-2表现出最好的抗氧化活性,IC50为0.80mg/mL。【结论】木麻黄枝条和果实中均存在内生真菌且均以葡萄座腔菌属为优势种群,2个部位真菌的种类存在明显差异。内生真菌Cef-2表现出最强的抗细菌和抗氧化活性,可作为候选菌株进一步分离和鉴定其活性成分。     

痂状炭角菌鉴定、培养条件优化及发酵产物活性分析

【目的】炭角菌属具有珍贵的药用价值和较高的经济价值。本研究对采自白蚁废弃巢穴上的炭角菌菌株进行鉴定,对其液体发酵和固体培养条件进行优化,并对液体发酵产物抗菌、抗氧化活性进行测定,以期为痂状炭角菌的开发利用提供参考。【方法】通过形态观察及ITS序列测序对炭角菌进行鉴定;探讨液体发酵中添加不同碳源、氮源和金属离子对痂状炭角菌菌丝体生长的影响;分析固体培养基中添加氨基酸对无性子座生长的影响;利用平板抑菌法和DPPH法对液体发酵产物抗菌和抗氧化活性进行测定。【结果】采集菌株经形态鉴定和分子鉴定,为痂状炭角菌。液体发酵最佳碳源为可溶性淀粉,最佳氮源为蚕蛹粉,最佳无机盐为MgSO₄。正交试验筛选的最佳液体培养基组成为可溶性淀粉4%（w）+蚕蛹粉0.6%（w）+MgSO₄ 0.06%（w）。固体培养基中添加缬氨酸、异亮氨酸和苏氨酸均能显著促进无性子座的生长。液体发酵产物抗菌效果显著优于山梨酸钾,对DPPH的抗氧化活性为（75.19±2.08）%,显著优于维生素E。【结论】优化的液体发酵和固体培养条件可以显著提高痂状炭角菌菌丝体产量,促进无性子座生长。痂状炭...     

7 羟基 4 甲基香豆素衍生物杀螨活性研究

为提高7 羟基 4 甲基香豆素（羟甲香豆素）的杀螨活性，以羟甲香豆素为原料，设计合成8种羟甲香豆素衍生物，通过H NMR和¹³C NMR数据分析进行结构表征，并进行体外杀螨活性检测。结果表明，质量浓度为0.5 g/L的3,6,8 三溴 7 羟基 4 甲基香豆素、8 乙酰基 7 羟基 4 甲基香豆素、7 （4 氯苄氧基） 4 甲基香豆素和7 乙酰氧基 4 甲基香豆素在24 h的致螨死亡率分别为100%、73.0%、68.3%和66.2%，与羟甲香豆素比较，差异极显著（P<0.01）；质量浓度为0.5 g/L的7 苯乙氧基 4 甲基香豆素和7 苄氧基 4 甲基香豆素在24 h的致螨死亡率分别为35.5%和34.7%，与羟甲香豆素比较，差异显著（P<0.05）。说明结构修饰是研发高活性羟甲香豆素类杀螨药物的可行途径，这对杀螨新药剂的进一步研究及应用具有重要指导意义。     

窿缘桉内生真菌Chaetomium sp.Eef-10的鉴定及活性成分分析

【目的】确定内生真菌Eef-10的分类地位,分离和鉴定该真菌中的次生代谢产物并评价其抗细菌和抗肿瘤细胞活性,以期得到具有抗细菌和抗肿瘤活性的天然活性化合物。【方法】内生真菌的鉴定采用形态学和分子生物学相结合的方法;次生代谢产物的分离和纯化主要采用减压硅胶柱层析、葡聚糖凝胶LH-20和半制备高效液相色谱等方法;化合物的鉴定主要依据~1H NMR和~(13)C NMR等波谱学数据以及相关的参考文献;采用MTT显色法测定了次生代谢产物对5种不同供试细菌的抑制活性;采用CCK8法测定了次生代谢产物对2种不同癌细胞的抑制活性。【结果】从内生真菌Eef-10中分离到的3个化合物,分别鉴定为Atraric acid(化合物Ⅰ)、2, 4-二羟基-3, 6-二甲基苯甲酸乙酯(Ethyl 2, 4-dihydroxy-3, 6-dimethylbenzoate)(化合物Ⅱ)和4-甲基-5, 6-二氢-2H-吡喃-2-酮(4-methyl-5, 6-dihydro-2 H-pyran-2-one)(化合物Ⅲ)。化合物Ⅱ对5种革兰阴性细菌表现出强抑制活性,最大半数抑制质量浓度(IC_(50))为35.87～55.50μg/mL,化合物Ⅰ的IC_(50)为67.25～130.55μg/mL,化合物Ⅲ的IC_(50)均大于200μg/mL。抗肿瘤细胞活性的测定结果表明,化合物Ⅱ对人肝癌细胞株Hep-G2的IC_(50)为1.50μg/mL,活性强于阳性对照喜树碱(IC_(50)为3.6μg/mL)。【结论】从内生真菌Chaetomium sp. Eef-10中分离得到化合物Ⅰ～Ⅲ,化合物Ⅱ对桉树青枯病菌和Hep-G2细胞具有较好的抑制作用。     

铁皮石斛原球茎与野生铁皮石斛多糖的抗菌及体外抗氧化活性比较

【目的】比较铁皮石斛原球茎多糖与野生铁皮石斛多糖的抗菌及体外抗氧化活性,为铁皮石斛组织培养物的应用提供依据。【方法】以大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、白色念珠菌(Candida albicans)为供试菌,用抑菌圈法测定2种铁皮石斛多糖对目标菌的抗菌活性;分别用羟自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(O-·2)、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH·)法和硫代巴比妥酸法(TBA法)结合分光光度法检测2种铁皮石斛多糖清除·OH、O-·2和DPPH·及抗脂质过氧化的能力,比较2种铁皮石斛多糖的抗菌及体外抗氧化活性。【结果】铁皮石斛原球茎多糖与野生铁皮石斛多糖对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌均具有显著的抑制作用,且野生铁皮石斛多糖的抑菌效果比铁皮石斛原球茎多糖优;2种铁皮石斛多糖对·OH、O-·2和DPPH·均有极显著的清除作用,对小鼠肝组织脂质过氧化均有极显著的抑制作用,且野生铁皮石斛多糖比铁皮石斛原球茎多糖效果更好,2种铁皮石斛多糖的抗菌及抗氧化活性与多糖质量均存在剂量效应关系。【结论】与野生铁皮石斛多糖相比,铁皮石斛原球茎多糖在抗菌、抗氧化能力方面虽存在一定差距,但仍具有进一步开发的价值。     

绿色木霉B3菌株发酵液杀线活性分析及其稳定性测定

为了明确绿色木霉(Trichoderma viride)B3菌株对禾谷孢囊线虫毒杀活性及其稳定性。通过室内毒力测定,分析不同因素对绿色木霉B3菌株毒杀禾谷孢囊线虫2龄幼虫活性及其稳定性的影响。结果表明,绿色木霉B3菌株发酵液在自然光处理0～96 h后,对其杀线活性无显著影响,2龄幼虫死亡率为71.4%～86.2%;在不同氧化剂、还原剂和酸碱处理下,其抗氧化性、还原性和耐强酸强碱较强。同时,绿色木霉B3菌株发酵液耐贮藏性较好,储存60 d后杀线活性无显著差异。