Cellular immune responses of BALB/c mice induced by intramuscular injection of PRRSV-ORF5 DNA vaccine with different doses

BALB/c mice were immunized with 50 μg, 100 μg, 200 μg of pcDNA-PRRSV-ORF5 DNA vaccine respectively by intramuscular injection, with PBS and pcDNA3.1(+) as controls. Fluorescence activated cell Sorter (FACS) was used to detect the number of CD₄ ⁺ and CD₈ ⁺ T-lymphocytes. T-lymphocyte proliferation test was used to detect proliferation of the T-lymphocyte cells in peripheral blood lymphocytes of mice vaccinated with pcDNA-PRRSV-ORF5 DNA vaccine. The results showed that the difference in ConA response to T-lymphocytes in blood was highly significant between all experimental groups and the control group (P < 0.01). The number of CD₄ ⁺ T-lymphocytes in experimental groups was significantly higher than that of the control group 7 d after vaccination. The number of CD₈ ⁺ T-lymphocytes in the experimental groups was higher than that of the control group 28 d after vaccination. Mice immunized with a higher dose (200 μg) of DNA vaccine demonstrated higher cellular immune response than those immunized with a lower dose (100 μg, 50 μg) of DNA vaccine. The results demonstrated that pcDNA-PRRSV-ORF5 DNA vaccine could induce a good cellular immune response which may be dose-dependent. __________ Translated from China J Vet Sci Mar, 2006, 26(2): 111–114 [译自: 中国兽医学报] The first three authors contribute equally to this work.     

EDSV六邻体蛋白基因核酸疫苗对减蛋综合征灭活油乳苗的免疫协同作用

利用所构建的减蛋综合征病毒六邻体蛋白基因真核表达质粒pcDNA3-hexon和减蛋综合征灭活油乳苗,观察了EDSV六邻体蛋白基因核酸疫苗对减蛋综合征灭活苗的免疫协同作用。结果显示,7日龄时应用核酸疫苗和减蛋综合征灭活油乳苗联合免疫的鸡群,在14~56日龄整个观察期内,胸腺T淋巴细胞对ConA、法氏囊B淋巴细胞对PMA的反应,均明显强于单纯油乳苗免疫组(其中,除在接种后第7天两组鸡的B淋巴细胞增殖OD570值差异不显著外,其余各检测时间两组间均表现为显著或极显著差异);特别是T淋巴细胞增殖情况在接种第14天后均表现为差异极显著。而且,HI抗体效价水平也持续性高于单纯灭活油乳苗免疫鸡群,并在免疫接种后35~49 d时差异显著。说明EDSV六邻体蛋白基因核酸疫苗与灭活油乳苗联合免疫,可明显提高机体的细胞免疫和体液免疫水平,产生很好的免疫协同作用。     

Enhancement of the Immune Response to Rabbit Hemorrhagic Disease Vaccine in Young Rabbits by Advanced Vaccination and Chinese Herbal Adjuvants

Experiments were conducted to determine the effects of advanced vaccination and Chinese herbal adjuvants （CHA）, containing astragalus polysaccharides （APS） and ginsenosides （GS） on the immune response to rabbit hemorrhagic disease （RHD） vaccine in young rabbits. In experiment 1, 5 New Zealand rabbits of each group at 30, 35, 40, or 45 days of age were injected with 2 mL of inactivated RHD vaccine, respectively. The dynamic changes of antibody titers were tested by the hemagglutination inhibition （HI） method. In experiment 2, 30 New Zealand rabbits at 35 days of age were randomly assigned to 5 treatment groups, representing inoculation with 3 mL of non-adjuvant RHD vaccine, CHA-RHD vaccine, CHA-HA vaccine （half dose antigen）, aluminium adjuvant-RHD vaccine, and PBS, respectively. The dynamic changes of peripheral lymphocyte proliferation and serum antibody titers were tested by the MTT method and the HI method. The results showed that the titer of maternal HI antibody in the 35-day-old rabbits was lower than the protective level of 3 log2, while on days 7 to 49 after the vaccination, the antibody titers were higher than 3 log2. The CHA promoted the lymphocyte proliferation and enhanced the serum antibody titer （P〈 0.05）. These findings from the two experiments suggested that advanced vaccination and Chinese herbal adjuvants significantly enhanced the immune response to vaccine against RHD, and effectively protected the young rabbits against RHD challenge.     

猪繁殖与呼吸综合征和猪2型圆环病毒病二联核酸疫苗的构建及其免疫效力

[目的]构建猪繁殖与呼吸综合征和猪2型圆环病毒病的二联核酸疫苗并研究其免疫效果。[方法]将辽宁某猪场发病猪病料中猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的ORF5基因克隆至真核表达载体pIRES-neo的CMV启动子下游,然后用猪2型圆环病毒（PCV-2）的内蒙古分离株的ORF2基因替换pIRES的neo基因,构建真核表达质粒。通过W estern blot和IFA方法检测构建的重组质粒在BHK细胞中的表达情况。将重组质粒免疫Balb/c小鼠,检测免疫后的ELISA抗体水平和脾T淋巴细胞亚群的数量。[结果]成功构建了重组表达质粒pIRES-ORF2-ORF5,W estern blot和IFA试验证实该重组质粒在BHK细胞内成功表达了目的蛋白。与灭活苗相比,pIRES-ORF2-ORF5核酸疫苗免疫小鼠ELISA抗体水平差异不显著;其脾T淋巴细胞亚群数量显著高于灭活疫苗免疫组。[结论]构建的二联核酸疫苗能够诱导小鼠产生较好的体液免疫反应和细胞免疫反应,为更好地防制猪繁殖与呼吸综合征和猪2型圆环病毒病提供了条件。     

感染法氏囊病毒雏鸡新城疫2次免疫后免疫器官组织的免疫学变化

研究了１日龄感染法氏囊病毒（ＩＢＤＶ）雏鸡新城疫（ＮＤ）２次免疫及强毒攻击后免疫器官组织中浆细胞、酯酶阳性Ｔ细胞（ＴＡＮＡＥ＋）、巨噬细胞（ＭΦ）和淋巴细胞数量的动态变化，结果表明，１ＢＤＶ感染鸡中枢及外周免疫器官以及呼吸道、消化道局部免疫组织对ＮＤ苗的２次免疫应答具有明显的增强作用，并提示ＢＤＶ所致的免疫抑制不是不可逆的，但不能完全恢复到正常免疫应答水平。     

火鸡新城疫免疫后局部免疫组织的免疫应答

本实验以Lasota疫苗点眼、滴鼻免疫21日龄火鸡,研究其盲肠扁桃体、哈德尔腺和支气管粘膜淋巴组织的免疫应答。结果如下:免疫火鸡上述局部免疫组织的浆细胞、酯酶阳性T细胞及淋巴细胞显著增多,巨噬细胞程度不等地增加;盲肠扁桃体淋巴小结增多、增大。这表明,免疫火鸡消化道和呼吸道局部免疫组织不仅体液免疫应答显著加强,而且细胞免疫反应也明显增强。NDD 强毒攻击后,免疫火鸡呼吸道和消化道局部免疫组织的体液免疫和细胞免疫水平进一步升高;对照火鸡则出现细胞免疫和体液免疫机能衰竭。     

转移因子对猪圆环病毒亚单位疫苗免疫效果的影响

为探寻转移因子(TF)对猪圆环病毒亚单位疫苗免疫效果的影响，将猪脾脏研磨，并反复冻融研磨液，离心获取冻融上清，用超滤法从上清液中提取转移因子。TF经理化检验合格后，以添加剂的形式与猪圆环病毒亚单位疫苗(Cap疫苗)混合，制成TF–Cap疫苗，并和未添加TF的Cap疫苗同时进行小鼠免疫试验。TF–Cap疫苗和Cap疫苗免疫的小鼠都设一免组和二免组，首次免疫后每隔10 d对实验鼠进行尾静脉采血，并用间接ELISA方法测定血清中猪圆环病毒2型(PCV2)的抗体水平。结果表明：用超滤法制得的TF，多肽含量为1.83 mg/mL；抗体检测数据显示，4个免疫组与对照组(注射生理盐水)的抗体检测值有极显著差异(P<0.01)，而4个免疫组之间无显著差异(P>0.05)，TF–Cap疫苗一免组的抗体水平与Cap疫苗二免组的抗体水平相当，表明在圆环病毒基因工程疫苗中添加TF可一定程度的提高免疫动物的抗体水平。     

雏鸡新城疫免疫后免疫器官组织的免疫学变化

本文主要研究了雏鸡 ND 免疫后免疫中枢器官(法氏囊、胸腺)、外周免疫器官(脾脏)以及消化道和呼吸道相关的局部免疫组织(盲肠扁桃体、丕氏斑、十二指肠粘膜和肺支气管粘膜淋巴组织、哈德尔腺)中浆细胞,TANAE~+,MΦ,淋巴细胞数的变化。结果表明,ND 免疫后免疫器官组织的体液免疫和细胞免疫应答均增强。     

狂犬病（HEP／BHK_（21））活疫苗免疫期试验

应用效价为１０（－４．５０）ＭＩＣＬＤ（５０）／０．０３ｍｌ的狂犬病ＨＥＰ／ＢＨＫ（２１）活毒疫苗免疫犬后，对免疫前和免疫后１、３、６、１２、３０个月血样进行了血清学评价和免疫原性分析。１５只犬免疫１月后，血清抗体全部阳转，６６％的犬在３０个月后抗体仍维持在一个较高水平。免疫１年后９０％以上的动物能够得到保护。统计表明，不同地区、不同性别、不同年龄的犬免疫反应无显著差异，但三月龄以下犬反应欠佳。     

病毒性出血症疫苗免疫剂量对幼兔血清抗体效价的影响

选择35、40和45日龄的新西兰家兔各30只,每种日龄兔随机均分为5组,其中对照组注射生理盐水,4个试验组分别注射4种剂量(1 m l、2 m l、3 m l、4 m l)的兔病毒性出血症疫苗,分别于免疫前及免疫后1~7周内每周采血测定血清抗体效价的动态变化。结果表明:各日龄兔的2 m l、3 m l、4 m l剂量组的抗体上升速度和有效抗体维持时间均显著大于同日龄的1 m l剂量组;35日龄兔的2 m l、3 m l、4 m l剂量组的抗体峰值显著高于1 m l剂量组。提示35日龄兔注射剂量2 m l为最佳免疫程序。     

番鸭呼肠孤病毒弱毒疫苗在番鸭体内中和抗体消长规律的研究

为明确番鸭呼肠孤病毒弱毒疫苗在番鸭体内中和抗体消长规律,采用固定病毒稀释血清法,测定了经弱毒疫苗免疫后的雏番鸭不同时间其血清中和抗体效价。结果显示：疫苗注射1日龄雏番鸭,免疫后28 d部分鸭血清中出现抗体,35 d全部鸭血清中出现抗体;6个月抗体效价达高峰,有效免疫期在18个月以上。表明番鸭呼肠孤病毒弱毒疫苗诱导的中和抗体产生期较晚,但持续期长。     

弓形虫代谢分泌抗原对仔猪IL-2、IL-4、IFN-γ和TNF-α表达水平的影响

通过免疫后攻毒的方法研究了弓形虫代谢分泌抗原(E/SA)免疫后对不同免疫组仔猪机体白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)、干扰素-γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的影响.结果表明:免疫后各免疫组仔猪的IL-2、IL-4、IFN-γ含量均不同程度的升高;其中E/SA组IL-2、IL-4和IFN-γ的水平显著升高,与对照组差异显著(P0.05),其含量分别由免疫前的105.05、105.33、67.50pg.mL-1升高到免疫后的194.03、342.50、296.50pg.mL-1;TNF-α水平变化不显著.试验证实弓形虫代谢分泌抗原疫苗能够促进仔猪IL-2、IL-4、IFN-γ的分泌,并引起宿主抗弓形虫感染的免疫应答.     

GM-CSF与猪瘟病毒E2基因共表达载体的构建及其诱导的免疫应答

为探讨粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)对猪瘟病毒E2基因核酸疫苗小鼠免疫应答诱导的影响,将CSFVE2基因和GM-CSF片段插入真核表达载体pcDNA3.0内构建pcE2,pcE2-GF及pcGF核酸疫苗.动物试验时,50只雌性供试小鼠随机分为5组,即pcE2,pcE2-GF,pcDNA3.0,pcGF,生理盐水组,每组10只.0,2,4周于小鼠左后肢胫前肌进行肌注免疫,质粒量为每只每次50μg.每次免疫前和末次免疫后2周尾静脉采血收集血清,ELISA检测血清内特异性IgG水平.末次免疫后1周每组随机选3只无菌取脾,MTT法检测淋巴细胞增殖情况.结果表明,与对照组比较,pcE2和pcE2-GF第3次免疫2周后,免疫小鼠IgG抗体水平逐渐增高,淋巴细胞的转化率也明显增高,且pcE2-GF免疫组的IgG抗体水平和淋巴细胞的转化率高于pcE2免疫组.可见,细胞因子GM-CSF可有效提高猪瘟病毒E2基因核酸疫苗的免疫应答.     

猪繁殖与呼吸综合征和猪2型圆环病毒病二联核酸疫苗的构建及其免疫效力

试验以猪繁殖与呼吸综合征（PRRSV）的ORF5和猪圆环病毒2（PCV-2）的ORF2为目的基因,以pIRES-neo为表达载体,构建了PRRSV—PCV-2二联核酸疫苗,并对其免疫原性进行了初步的研究,为研制安全有效的疫苗防制猪繁殖与呼吸综合征和猪2型圆环病毒病提供基础。     

火鸡新城疫免疫后免疫器官的免疫学变化

本实验研究了 Lasota 疫菌点眼、滴鼻免疫21日龄火鸡后,其胸腺、法氏囊和脾脏中免疫细胞的变化。结果表明,免疫火鸡中枢和外周免疫器官的浆细胞、酯酶阳性 T 细胞和淋巴细胞显著增多,巨噬细胞程度不同地增加;脾脏淋巴小结直径增大,数量上升;说明免疫器官不仅体免疫应答明显加强,而且细胞免疫反应也显著增强。78日龄 ND 强毒攻击后,免疫火鸡免疫器官的上述免疫细胞进一步增多,细胞免疫和体液免疫反应进一步增强,全部获得免疫保护;而对照火鸡免疫细胞数量锐减,呈现细胞免疫和体液免疫机能衰竭,全部发病死亡。     

狂犬病新型基因工程疫苗研究进展

狂犬病是由狂犬病病毒感染中枢神经系统引起的一种古老的人兽共患传染病,人和动物感染后一旦出现临床症状,死亡率几乎100%,至今仍无有效的治疗方法。当前,接种疫苗是预防狂犬病最为有效的途径。因此,狂犬病疫苗研发一直是狂犬病研究领域的热点之一,进而不断涌现出新型疫苗。本文对近期狂犬病新型灭活疫苗、弱毒疫苗、核酸疫苗、亚单位疫苗、病毒样颗粒疫苗、口服疫苗等基因工程疫苗研究进展进行系统梳理,以期把握狂犬病疫苗研究现状,为研发更为有效的狂犬病新型疫苗提供新思路。     

犬接种狂犬病疫苗后白细胞介素2和γ干扰素的浓度检测

2005年对狂犬病活疫苗免疫的犬只进行了细胞免疫性能的评估,采用ELISA检测免疫犬和非免疫对照犬的血清中白细胞介素2和γ干扰素的浓度。结果免疫犬血清样品的IL-2和IFN-γ浓度分别于免疫后7d上升,至免疫后30d达到峰值,以后逐步下降,但至120d仍保持较高浓度。未免疫狂犬病疫苗的对照组犬,血清中IL-2和IFN-γ浓度无明显变化。     

重组鸡γ-干扰素对H5亚型禽流感灭活苗的免疫增强作用

为研究重组鸡γ-干扰素(Chicken interferonγ,ChIFN-γ)对禽流感灭活疫苗的免疫增强效果,使用重组鸡γ-干扰素作为免疫佐剂,联合禽流感灭活疫苗采用胸部肌肉注射的方式免疫SPF雏鸡,免疫后每周测定血清抗体效价、免疫器官T、B淋巴细胞转化水平,攻毒后计算攻毒保护率。结果表明,鸡γ-干扰素提高了血清抗体水平,免疫器官T、B淋巴细胞转化水平和攻毒保护率,与疫苗组相比多数指标差异显著(P0.05)。鸡γ-干扰素对H5亚型禽流感灭活疫苗具有免疫增强作用。     

狂犬病疫苗与干扰素α2b联合应用对小鼠的保护效果

[目的]研究IFN-α2b与狂犬病纯化疫苗对小白鼠的保护效果。[方法]将IFN-α2b与狂犬病纯化疫苗按不同的免疫程序应用于6个试验组中。1组:狂犬病疫苗腹腔注射0.5 ml/只,0、37、1、4 d免疫;2组:狂犬病疫苗腹腔注射0.5 ml/只,同时腹腔注射IFN-α2b 1 500IU/只,0、3、71、4 d免疫;3:狂犬病疫苗腹腔注射0.5 ml/只,0、37、d免疫;4组:狂犬病疫苗腹腔注射0.5 ml/只,同时腹腔注射IFN-α2b1 500 IU/只,03、7、d免疫;5组:狂犬病疫苗腹腔注射0.5 ml/只,03、、71、4 d免疫,于0、12、d腹腔注射IFN-α2b 1 500 IU/只;6组:狂犬病疫苗腹腔注射0.5 ml/只,0、3、71、4 d免疫,于0、12、、37、1、4 d腹腔注射IFN-α2b 1 500 IU/只。34、组于第9天攻击,12、、56、组于第21天攻击后计算其保护率。[结果]狂犬病疫苗与IFN-α2b联合应用组其保护率明显高于其他组,且按免疫程序同时应用IFN-α2b组其保护率最高。[结论]按狂犬病疫苗免疫程序同时应用IFN-α2b组其免疫效果最好,保护率最高。而提前应用IFN-α2b并没有增强狂犬病疫苗的保护率。     

O型口蹄疫病毒VP1 T细胞、B细胞表位双拷贝基因与大肠杆菌LTB基因融合表达产物的免疫应答

[目的]为预防口蹄疫与幼畜腹泻、生产安全高效的基因工程联合疫苗提供试验依据。[方法]通过基因工程技术,把O型口蹄疫病毒VP1双拷贝21-40(20aa)与141-160(20aa)表位肽基因——2020VP1与产肠毒素大肠杆菌LTB连接到表达载体上,在大肠杆菌中表达出具有抗O型口蹄疫病毒与产肠毒素大肠杆菌双重作用的融合蛋白。[结果]运用基因工程技术构建了融合表达载体r2020-B-2020。转化宿主菌BL21(DE3)RIL后的表达产物经SDS-PAGE分析,结果显示,重组融合蛋白的分子量约为41 kD,表达量较高。动物实验表明,融合蛋白能够诱发兔体产生较强的抗FMDV中和抗体,免疫豚鼠在低浓度FMDV刺激下产生特异性T淋巴细胞增殖反应,说明融合蛋白可以诱导机体产生有效的抗FMDV细胞及体液免疫反应。融合蛋白能够与霍乱毒素CTB抗体特异结合,免疫雌鼠能够抵抗一定强度的大肠杆菌毒株攻击。[结论]融合蛋白可以同时诱导机体产生较好的抗FMDV及ETEC免疫应答反应,具有开发成为FMDV与ETEC基因工程疫苗的应用价值。