细菌几丁质酶的结构与功能研究进展

细菌几丁质酶因其潜在的应用价值而越来越受关注.细菌几丁质酶属于糖苷水解酶家族的18、19家族.典型的细菌几丁质酶包括将成熟几丁质酶分泌到胞外的信号肽、起催化作用的催化区、特异性结合氨基葡萄糖及几丁质的几丁质结合区以及一个功能尚不清楚的短的C端区域.本文重点介绍了细菌几丁质酶的结构域及其功能.     

塔吉克斯坦土壤产功能酶细菌筛选及其产淀粉酶的酶学特性

[目的]对塔吉克斯坦土壤细菌产功能酶菌株筛选及产淀粉酶的酶学特性的初步研究.[方法]采用透明圈法对从塔吉克斯坦土壤细菌产几种重要的工业用功能酶筛选.通过形态学观察、16S rDNA和gyrB基因序列测定对一株产高温淀粉酶的菌株进行鉴定,研究其淀粉酶的酶学性质.[结果]从塔吉克斯坦土壤中共分离细菌菌株110个,其中有产淀粉酶菌株70个、产蛋白酶菌株56个、产纤维素酶菌株37个、产脂肪酶菌株16个,占总菌株数比例依次为63.6;、50.9;、33.6;、14.5;.对筛选出产淀粉酶活性较高的T-17菌株的粗酶学性质测定表明,该淀粉酶具有高温、中性、耐盐淀粉酶的特性,最适催化温度是70℃,30～ 70℃维持较高酶活力,最适催化pH值为7.0,pH值在较稳定6.0 ～8.0,有较强的耐盐特性,在4 mol/L的NaCI浓度下仍能保持较高的酶活性,Ca2+和K+对酶具有较强的激活作用.经形态观察和分子生物学方法将T-17鉴定为巨大芽孢杆菌(Bacillus malacitensis).[结论]塔吉克斯坦土壤微生物产功能酶多样性丰富,筛选获得的高温淀粉酶具有一定的应用潜力.     

LACCLR2细菌漆酶性质及其脱色作用的研究

该试验以LACCLR2细菌漆酶为研究对象,对漆酶的酶学性质以及漆酶对染料的降解脱色效果进行了研究,结果表明:漆酶反应的最适温度是50℃,最适p H为6,铜离子浓度为0.01%时酶活力最高。针对染料的脱色实验,靛蓝最显著,褪色率达到77.4%,COD/BOD提高了43.5%。     

产酶微生物及其应用

介绍了产生纤维素酶和漆酶的真菌和细菌种类,以及各种酶在制浆造纸、饲料工业、污水治理、纺织洗涤、食品和堆肥等领域的应用情况。     

细菌产壳聚糖酶的性质初探

甲壳低聚糖(chitooligosaccharides)具有抗菌、抗癌以及促进双歧杆菌增殖、增强机体免疫等功能[1]。目前制取方法常用盐酸水解壳聚糖来制备,但该法反应条件较难控制,不易得到较高聚合度的低聚糖,对环境污染严重。已有学者研究利用壳聚糖酶水解壳聚糖来制备甲壳低聚糖,由于其专一性强,反应条件温和,得率高,且不污染环境,已得到广泛的关注。自从上世纪七十年代初期,Monaghan等[2]首次报道B.bassiana中存在壳聚糖酶(chitosanase,EC.3.2.1.99)以来,已在许多细菌、放线菌和真菌等微生物中发现了该酶。MasahiroKurakake等[3]对Bacilluscere…     

细菌产壳聚糖酶的性质初探

甲壳低聚糖(chitooligosaccharides)具有抗菌、抗癌以及促进双歧杆菌增殖、增强机体免疫等功能[1]。目前制取方法常用盐酸水解壳聚糖来制备,但该法反应条件较难控制,不易得到较高聚合度的低聚糖,对环境污染严重。已有学者研究利用壳聚糖酶水解壳聚糖来制备甲壳低聚糖,由于其专一性强,反应条件温和,得率高,且不污染环境,已得到广泛的关注。自从上世纪七十年代初期,Monaghan等[2]首次报道B.bassiana中存在壳聚糖酶(chitosanase,EC.3.2.1.99)以来,已在许多细菌、放线菌和真菌等微生物中发现了该酶。MasahiroKurakake等[3]对Bacilluscere…     

应用间接酶联免疫吸附试验检测人参软腐细菌

通过间接酶联免疫吸附试验可以检测参土、田间腐烂参根和潜伏在外观无病参根内的软腐细菌。对人参软腐细菌检出的灵敏度为4×10~5细胞/ml。病、健参根组织提取液的稀释度为1/1000-1/2000。免疫球蛋白最适浓度为10μg/ml。应用人参细菌性软腐病菌株Ecc和Ps.c.分别免疫家兔得到相同效价(1:1280)的抗血清。     

一株高产几丁质酶细菌对植物病原真菌的抑制作用研究

用平板稀释分离法和透明圈法筛选到一株高产几丁质酶的革兰氏阳性菌NKZ-E,其单位透明圈的大小为2.11。液体培养测定结果表明,该菌株的无菌培养滤液稀释50倍时,对玉米弯孢叶斑病菌具有较好的抑菌活性,其抑制率达69.86%;抑菌谱的测定结果也表明菌株NKZ-E对5种供试真菌也具有较好的抑菌活性,菌丝生长抑制率均高于50%。光镜观察发现,处理后的玉米弯孢叶斑病菌菌丝表现不同程度的畸形,细胞彭大呈球形,说明该细菌菌株产生的胞外几丁质酶可能与病菌菌丝生长受抑制密切相关。     

诱导剂对杨树细菌溃疡病寄主体内过氧化物酶活性的影响

选用５种化学诱导剂和４种生物诱导剂分别试验分析了其对杨树苗木体内过氧化物酶活性的影响。试验结果表明：ＳＡ、ＬＭＳ、ＰＭＡ化学试剂和Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ生物试剂都能有效地提高杨苗体内所氧化物酶活性。ＹＱ、ＹＬ提高过氧化物酶活性的能力较弱。     

产几丁质酶烟草内生细菌的筛选及产酶条件研究

从健康烟草叶片中筛选出一株产几丁质酶活性较高的内生细菌FEC-1，经16SrDNA基因序列和菌株生理生化特征分析，确定该菌株为环状芽孢杆菌。对FEC-1菌株产酶发酵条件研究表明，该几丁质酶是诱导酶，最佳氮、碳源是酵母膏和2g／L单糖或二糖，多糖效果相对较差，最适初始pH为9．0左右，最适温度为30℃左右。在优化条件下，摇瓶培养60h时产酶达123．16U／mL。     

几丁酶细菌的分离和抗病虫研究

从土壤中分离出１株杆状细菌,具有显著的产几丁酶活性。对稻瘟病,赤霉病和大斑病病源菌丝生长的抑制效果达４９．３％－８４．３％,并能增强杀虫剂的杀虫效果,减少药量１－４倍。     

一株产纤维素酶细菌的发酵产酶条件优化

以1株产纤维素酶的细菌DM-4为试验菌株,以滤纸酶(FPA酶)活和CMC酶活为指标,通过单因素试验和响应面试验,优化菌株发酵产酶条件。结果显示,在发酵时间为36 h、接种量4%、培养基初始pH值5.5～6.0、麸皮浓度2.54%、蛋白胨浓度0.92%、磷酸盐浓度0.5%的培养条件下,菌株产纤维素酶活力最高。验证试验表明,优化模型是有效和可靠的。     

响应面法优化琼胶酶发酵培养基

[目的]优化海洋细菌Vibrio agarivorans-1产琼胶酶液体发酵培养基的最佳组分。[方法]首先通过单因素试验筛选出3个重要因子(琼脂、NaCl和酵母膏质量浓度),在单因素的基础上,通过Box-Behnken试验设计和响应面分析法确定了3个因子的最优发酵条件。[结果]最佳营养组分为:琼脂粉质量浓度为3.9 g/L,NaCl质量浓度为45.2 g/L,酵母膏质量浓度为12.9 g/L,此条件下酶活力达到7.589 U/g,比优化前提高了3.35倍。[结论]该研究对提高海洋细菌Vibrio agarivorans-1产琼胶酶具有重要意义。     

产纤维素酶细菌的分离及产酶条件研究

以水牛瘤胃内容物及粪便为材料,用羧甲基纤维素平板初筛及刚果红染色法复筛,筛选出具有产纤维素酶的细菌21株,进一步筛选得到1株高产纤维素酶细菌,命名为CP-10.初步鉴定该菌为革兰氏阳性芽孢杆菌,在以1.0％的麸皮为碳源、1.0％的蛋白胨为氮源、初始pH值为6.0、37℃的条件下,其产酶量最高,能够在6h内崩解滤纸,羧甲基纤维素酶活(CMCase)可达16.8 U/mL.     

1株产褐藻胶裂解酶海洋细菌的分离鉴定及其酶学性质

利用以褐藻胶为唯一碳源的培养基分离纯化产褐藻胶裂解酶的海洋细菌,通过形态特征、生理生化和16SrRNA基因鉴定菌株,用紫外法分析纯化酶液的pH、温度作用范围及稳定性等酶学性质.结果表明:从青岛近海分离到1株产褐藻胶裂解酶的菌株QZ-4,革兰阴性杆菌,适宜生长温度和NaCl质量浓度范围分别为15～25℃和15～60g/L;16SrRNA基因序列分析显示,该菌与交替假单胞菌(Pseudoalteromonas tetraodonis)相似性为97%,GenBank登录号为HM130919;该酶具有同时降解高古罗糖醛酸聚合物和高甘露糖醛酸聚合物的能力,其最适作用pH和温度分别为7.5和40℃,Mg2+、Na+、Fe3+、Mn2+等对酶活力有促进作用,Zn2+有抑制作用,1.0mol/L乙二胺四乙酸可完全抑制其活性;由Lineweaver-Burk(L-B)作图法求得该酶的最大反应速度(Vmax)为0.541U/mL,米氏常数(Km)为0.051mg/mL.     

黄河中上游半干旱区典型盐渍上中细菌耐盐性及产酶特性研究

对陕西、宁夏和内蒙的典型盐渍土样分离得到180株细菌，在NaCl浓度为15％，20％，25％，30％，32％五个梯度进行了菌株耐盐性的试验。用平板检测法对菌株的纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶等4种水解酶产生情况进行了检测。结果表明：68．9％的菌株可在15％盐浓度的培养基中生长，随盐浓度增加，可生长的菌株数明显减少；在筛选出的耐盐菌中，来源了单一盐土中耐盐菌多于复合盐土，重盐土中筛出耐盐菌所占比例较大；供试菌株产蛋白酶和纤维素酶的能力高于产淀粉酶能力，其产脂肪酶的能力最弱。挑选出产纤维素酶和产蛋白酶效果较好的菌株各5株，并对其进行初步鉴定表明，大多数菌属于G^＋。杆状细菌，油脂状，不透明，并且表面光滑，耐15％盐浓度。     

产酸性木聚糖酶细菌的筛选及产酶条件研究

[目的]筛选高产酸性木聚糖酶细菌,并研究其适宜发酵条件。[方法]采用透明圈法筛选产木聚糖酶活力较高的细菌,并利用单因素试验与正交试验相结合的方法对其发酵条件进行优化。[结果]试验筛选到一株高产酸性木聚糖酶细菌B26,其最佳产酶培养基为:麸皮2%、秸秆粉2%、KNO30.8%、TW-80 0.6%,此时该菌所产木聚糖酶活性达1 051.25 U。[结论]该菌株以农业废弃物秸秆和麸皮为原料,产生活性较高的酸性木聚糖酶,对于农副产品的精深加工及利用开发有重要意义。     

细菌几丁质酶基因转化番茄的研究

为了获得抗真菌病的番茄材料，采用农杆菌介导法将细菌几丁质酶基因转化番茄子叶，获得了抗卡那霉素的转化植株，PCR检测初步证明细菌几丁质酶基因已整合到番茄的基因组。同时对番茄耐Kan水平、转化受体的预培养以及共培后洗涤抑菌进行了研究。结果表明：卡那霉素质量浓度为50mg/L时就能完全抑制番茄子叶再生；共培后直接用抑菌剂洗涤的抑菌效果较好；番茄子叶预培养1d的转化率最高。     

细菌Ⅰ型普鲁兰酶的研究进展

Ⅰ型普鲁兰酶以内切的方式专一性作用于普鲁兰糖或者支链多糖的α-1,6糖苷键,生成产物麦芽三糖或线性多糖。在工业应用中,Ⅰ型普鲁兰酶与其他糖苷水解酶协同作用于不同糖类底物,可得到类型多样的终产物,因此在食品、化工、制药等行业中有很重要的作用。目前对Ⅰ型普鲁兰酶的研究不仅包括筛选高产酶的菌株,还需得到酶学性质优良的酶蛋白,以适合工业生产工艺。综述了细菌来源的Ⅰ型普鲁兰酶的研究概况,包括酶学性质、基因的分离与克隆、微生物生产,并讨论了该酶在工业生产中的应用及其研究前景。     

耐高温纤维素酶产生菌的筛选鉴定及酶谱分析

采用稀释平板-刚果红染色法从腐木中分离到1株产耐高温纤维素酶的菌株CY15-10.通过形态观察、特征培养及16 S rDNA序列分析,鉴定该菌株为多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa).该菌株经摇瓶发酵后测定粗酶液CMC酶活为1.27 U/mL,最适反应温度为55℃,热稳定性较好.经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及酶谱分析表明该菌株向胞外分泌1种纤维素酶组分,酶分子质量约为35 ku.