组蛋白乙酰化对灵芝生长、灵芝多糖和灵芝酸生物合成的影响

【目的】组蛋白乙酰化修饰对真菌生长发育和次级代谢合成具有重要的调控作用。研究组蛋白乙酰化对静置培养的灵芝生长发育和主要代谢物合成的影响,为表观遗传手段提高灵芝多糖和灵芝酸生物合成提供理论依据。【方法】采用液体振荡-静置两阶段法培养灵芝。在静置培养阶段添加不同浓度（0、0.6、60、120和180 μmol·L ^-1）辛二酰苯胺异羟肟酸（SAHA）,采用常规方法测定或观察灵芝生物量、糖消耗、上层菌丝膜形成、菌丝体形态、灵芝孢子生成以及灵芝酸和灵芝多糖生物合成,利用蛋白免疫印迹技术测定灵芝组蛋白乙酰化水平;利用qRT-PCR技术对灵芝多糖（ugp、gls和pgm）、灵芝酸（hmgr、sqs、se和ls）生物合成关键基因以及灵芝全局调控因子相关基因（vet和LaeA）进行表达分析。【结果】SAHA处理使灵芝组蛋白H4乙酰化水平提高,最高为对照组的1.6倍;抑制了灵芝菌丝体生长和色素产生,改变了菌丝体的形态。灵芝孢子的形成也受到抑制,且SAHA浓度越大,抑制程度越明显。SAHA处理显著增加了灵芝多糖的产量,最高增加50%;灵芝酸生物合成受到抑制,与对照相比降低13%—27%;qRT-PCR分析结果表明SAHA处理下灵芝多糖与灵芝酸合成关键酶基因表达均有不同程度上调,其中灵芝多糖合成关键酶基因提升1.5—3.5倍,灵芝酸合成关键酶基因提升1.8—12.1倍;灵芝全局性调控因子vet和LaeA的表达被抑制,仅为对照组的11.30%—62.4%。【结论】组蛋白乙酰化可通过灵芝全局调控因子调控灵芝生长发育进而影响灵芝酸生物合成,同时组蛋白乙酰化对灵芝多糖生物合也有影响。     

外源茉莉酸甲酯对灵芝多糖及灵芝酸含量的影响

[目的]探寻外源茉莉酸甲酯对灵芝多糖及灵芝酸含量的影响。[方法]用含有不同浓度的茉莉酸甲酯在不同的发酵时间对液体培养基中的灵芝进行诱导培养。[结果]在发酵培养的第4天,添加外源茉莉酸甲酯浓度为50μmol·L~(-1)时,灵芝菌丝体和菌液中灵芝多糖含量最高,菌丝体中灵芝多糖含量为398.98mg·g~(-1),是对照的1.83倍;菌液中的灵芝多糖含量为4.20g·L~(-1),是对照的1.56倍。添加外源茉莉酸甲酯浓度为100μmol·L~(-1)时,灵芝菌丝体及菌液中灵芝酸含量最多,灵芝菌丝体中灵芝酸为50.02 mg·g~(-1),是对照的1.93倍;菌液中灵芝酸含量为7.10mg·L~(-1),是对照的2.21倍。[结论]说明外源茉莉酸甲酯能够有效的促进灵芝多糖和灵芝酸的合成。     

几种微量元素和维生素对灵芝多糖及灵芝酸含量的影响

[目的]明确液体培养时添加微量元素及维生素对灵芝多糖和灵芝酸含量的影响。[方法]在灵芝培养液中添加不同浓度的硫酸亚铁、硫酸锌、VB1,和复合VB,采用液体浅层静置培养法时神芝和泰芝进行培养,并测定芝培养液和菌丝体中的灵芝多糖和灵芝酸含量。[结果]灵芝多糖含量以添加1．0‰VB1最高,其培养液中为6．00mg/m1,菌丝体中为552．5mg／g,分别是空白对照的5．45倍和2．58倍;灵芝酸含量也以添加1．0‰VB1最高,其菌丝体中为23．56mg／g,而各处理培养液的灵芝酸含量均很低;添加0．1‰～0．2‰硫酸锌和1．0‰复合VB,也能显著提高灵芝多糖和灵芝酸含量。不同灵芝菌株的灵芝酸含量有很大差异,神芝的灵芝酸含量为泰芝的2倍。[结论]添加适量的铁、锌、VB1及复合VB能显著提高灵芝多糖和灵芝酸含量。     

灵芝三萜类物质液态发酵研究进展

灵芝三萜类活性成分主要来源于灵芝子实体、孢子及菌丝体。液态发酵合成灵芝三萜因生产周期短、发酵条件易控制、活性成分稳定等优点逐渐受到关注。近年来,除了在培养基和环境条件等方面对灵芝三萜液态发酵调控参数进行优化外,添加外源物提升灵芝三萜产量也是一种很好的调控手段。本文就灵芝三萜生物合成途径、液态发酵高产灵芝三萜的培养条件调控、外源物对液态发酵高产灵芝三萜的影响以及代谢通量在灵芝三萜液态发酵合成方面的应用前景进行介绍。     

紫外照射对灵芝菌丝体多糖的影响

采用紫外照射诱导菌种的方法可使灵芝菌丝体多糖含量增加。首先考察了不同紫外照射时间和功率对灵芝菌丝体形态、生长速度及多糖含量的影响,发现小功率、短时间的照射有利于菌丝体的生长,并可提高菌丝体多糖的含量,而大功率、长时间的照射则会对灵芝菌丝体产生相反的影响。然后通过正交试验,确定了紫外照射提高灵芝菌丝体多糖含量的最优条件,即用20 W的紫外灯照射灵芝菌种10 min,灵芝菌丝体多糖含量可达9.57%,比未经紫外照射的灵芝菌丝体多糖含量提高了3.45%。另外,将未紫外照射和在最优条件下紫外照射的灵芝的菌丝体多糖进行抗氧化能力比较,发现二者清除·OH和O_2~-·自由基能力无明显差异。     

不同核数的灵芝菌丝体转录组比较分析

以野生灵芝[Ganoderma lucidum(Leyss. ex Fr.)Karst.](D)、自然单核灵芝（Mo）、双核灵芝（Mu）的菌丝体为材料,利用高通量测序技术筛选差异表达基因,并进行GO分析和KEGG富集分析。通过差异基因分析,筛选出568个差异表达基因。GO分析结果表明,野生灵芝（D）与自然单核灵芝（Mo）菌丝体的差异表达基因主要富集在转录调控及DNA模板化、tRNA氨酰化、组蛋白甲基化等过程;野生灵芝（D）与双核灵芝（Mu）菌丝体的差异表达基因主要富集在染色质沉默、L-丝氨酸代谢、硫化合物代谢等过程;自然单核灵芝（Mo）与双核灵芝（Mu）菌丝体的差异表达基因主要富集在染色质沉默、DNA模板转录、谷氨酸分解等过程。KEGG富集结果表明,自然单核灵芝（Mo）与双核灵芝（Mu）菌丝体在代谢通路上有明显的差异,差异基因主要被注释到过氧化物酶、维生素代谢等通路。野生灵芝（D）与自然单核灵芝（Mo）菌丝体、野生灵芝（D）与双核灵芝（Mu）菌丝体的差异基因并没有KEGG富集的结果,说明其代谢通路没有明显差异。筛选出3个品系中表达量差异均显著的基因,共12个,并对基因的主要功能进行预测...     

硒对不同时期开袋灵芝主要活性成分的影响

通过在栽培料中加入亚硒酸钠,研究硒对不同时期开袋灵芝子实体硒富集能力和多糖、三萜含量的影响。采用高效液相色谱法比较不同开袋时间子实体三萜图谱相似性及灵芝酸A、E、F含量,并利用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测三萜关键酶基因的表达量。结果显示:在栽培料中添加亚硒酸钠能够显著提高灵芝的硒含量,其中接种后50 d开袋(第2批)的硒含量最高,为57.8μg/kg,比对照高出34.42%;原种经50 mg/kg亚硒酸钠驯化后,其子实体中有机硒含量比对照提高35.95%;添加亚硒酸钠的菌袋接种后40~70 d开袋(1~4批)能有效提高子实体的多糖含量,其中接种后60 d开袋(第3批)的多糖含量最高,为13.24 mg/g,比对照提高53.95%;但各个批次的子实体三萜含量均显著低于对照;不同批次灵芝的三萜图谱相似度在98%左右,说明不同批次的三萜灵芝酸成分相似;添加亚硒酸钠使灵芝酸A、E、F含量显著低于对照,且对灵芝酸E、F含量的影响更大。qRT-PCR检测结果显示,添加亚硒酸钠的3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶基因HMGR表达量显著降低,说明灵芝对硒的吸收抑制了HMGR的表达。     

茶园套种对灵芝生长和品质的影响

【目的】探讨茶园套种对灵芝生长和品质的影响,为茶园套种灵芝的生产模式应用提供科学依据。【方法】采用竖栽覆土和横栽覆土2种茶园套种灵芝仿野生栽培方式,分析比较2种茶园套种方式与常规室外荫棚覆土栽培方式之间灵芝的生长性能、商品性状及其品质的差异。【结果】茶园套种模式下,灵芝可以正常出芝并生长发育成熟,其商品性状正常,但生长性能和商品性状均不如室外荫棚覆土栽培。与室外荫棚覆土栽培相比,竖栽覆土和横栽覆土2种茶园套种下的灵芝菌棒下地后生长时间分别慢25、 18 d,出芝率分别显著降低12.8%和14.5%(P0.05),生物转化率分别降低10.48%和4.49%(P0.05)。茶园套种时灵芝的多糖、总三萜和氨基酸等含量与室外荫棚覆土栽培均无显著性差异;竖栽覆土和横栽覆土的灵芝多糖含量为1.09%和1.08%,比荫棚覆土栽培的灵芝高9.90%和9.29%,总三萜含量为1.19%和1.21%,比荫棚覆土栽培的灵芝高11.48%和13.55%。【结论】茶园生态环境条件下灵芝可以正常生长,茶园套种可提高灵芝的品质,但对生长性能和商品性状有一定的不利影响。     

灵芝发酵液发酵生产灵芝多糖醇工艺的初探

以灵芝菌丝体液为主要基质,添加蔗糖以酵索酵母菌进行厌气发酵生产灵芝多糖醇.对蔗糖的添加量、酵母菌液的接种量、发酵温度和发酵时间分别进行单因素和四因素三水平L9(34)正交试验,检测发酵液中的酒精含量和残糖含量,初步获得灵芝菌丝液发酵生产灵芝多糖醇工芝:在灵芝菌丝体液中添加6%蔗糖,接种2%酵母菌菌液、35℃厌气发醇36 h,产物中酒精和残糖含量分别为7.6%和0.11%.灵芝菌丝体液添加蔗糖接种酵母进行厌气发酵生产灵芝多糖醇是可行的.     

灵芝多糖拌种对小麦抗纹枯病的诱导效应及生长发育影响

【目的】真菌多糖能够调节作物生长,激活植株的防御反应,诱导植株对植物真菌和病毒病害产生抗性,具有广谱性和持效性的特点。通过灵芝多糖拌种的方式,研究灵芝多糖对小麦抗纹枯病的诱导效应及对生长发育的影响。【方法】选用纹枯病高感小麦品种济麦22、中感品种山农23、中抗品种鲁原502,采用室内盆栽的方法每盆混入20 mL相同浓度的纹枯病菌培养液,使用4、8 g a.i./100 kg种子剂量的灵芝多糖进行拌种,用清水处理作为对照组。通过调查植株病情指数,计算相对防治效果以评价灵芝多糖对小麦抗纹枯病的诱导效果,并从叶绿素和丙二醛（MDA）含量、防御酶活性的角度评价其诱导抗性的作用机制。同时测定使用清水和4、8 g a.i./100 kg种子剂量的灵芝多糖进行拌种后各处理的发芽率、株高以及根系活力等生长指标。【结果】小麦纹枯病高感品种济麦22、中感品种山农23、中抗品种鲁原502经灵芝多糖拌种后,小麦的生长发育、小麦抗纹枯病的效果以及小麦体内防御酶活性和MDA的含量等各项指标具有相同的趋势。灵芝多糖拌种对小麦生长指标具有一定的促进作用,4、8 g a.i./100 kg种子剂量的灵芝多糖拌种济麦22的发芽势分别为53.50%和52.75%,显著高于空白对照。在小麦出苗7 d后,经4、8 g a.i./100 kg种子剂量的灵芝多糖处理的3个小麦品种的株高均显著高于对照,并且处理剂量越高,诱导效果越明显。灵芝多糖拌种能够显著提高小麦的根系活力和叶绿素含量,同样处理剂量越高,诱导效果越明显,8 g a.i./100 kg种子剂量灵芝多糖拌种后,济麦22根系活力为0.26 mg·g^-1·h^-1,是空白对照的2.77倍;济麦22的叶绿素a、b含量分别为1.96、0.96 mg·g^-1,是空白对照的1.52、1.44倍。灵芝多糖拌种可以对小麦纹枯病产生一定的防控效果,以高感品种济麦22为例,8 g a.i./100 kg种子剂量的灵芝多糖拌种在小麦完全出苗后7、14和21 d对小麦纹枯病的防效分别为33.7%、31.9%和30.4%。同时,小麦叶片防御酶活性明显上升,MDA含量下降。8 g a.i./100 kg种子剂量灵芝多糖拌种后,济麦22苯丙氨酸解氨酶（PAL）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）的活性分别为60.72 U·min^-1·g^-1 FW、2.45 U·g^-1 FW、135.67 U·min^-1·g^-1 FW,分别是空白对照的1.10、1.32、1.13倍。MDA含量为1.48 μmol·g^-1,比对照组降低26.1%。【结论】灵芝多糖拌种对小麦种子发芽和植株幼苗的生长具有一定的促进作用,增加小麦体内叶绿素的含量,增强根系活力,能够诱导小麦植株抗纹枯病,提高小麦叶片防御酶的活性,降低MDA的含量。     

用λ ZAP Express作载体构建灵芝原基表达型cDNA文库

根据对韩国灵芝菌丝体、不同发育阶段子实体及孢子粉中灵芝酸含量的测定结果,以含量较高的灵芝原基为材料,提取mRNA,从而构建以λ ZAP Express为载体的表达型cDNA文库.经检测,所构建文库的滴度达到6×105 pfu·mL1,重组率达到96%,插入片段的大小均在700 bp以上.该表达文库的构建,为进一步克隆和鉴定灵芝酸合成的相关基因打下了良好的基础.     

灵芝属真菌线粒体基因组特征及进化

【目的】分析灵芝属（Ganoderma）真菌的线粒体基因组特征及进化,为灵芝属物种分类、分子进化和系统发育分析提供理论依据。【方法】基于灵芝属真菌15个线粒体基因组序列,利用MEGA X、MISA、mVISTA、MAFFT、DnaSP、PAML X和IQ-TREE等生物信息学软件对基因组特征、序列多态性、简单重复序列（SSR）、基因进化和系统发育进行分析。【结果】灵芝属真菌线粒体基因组全长为50603~124588 bp,GC含量为25.4%~27.3%,含有15个保守的蛋白编码基因（PCG）、2个rRNA基因和25~29个tRNA基因。SSR主要由AT构成,单核苷酸重复类型比例最高,其次为三核苷酸重复和四核苷酸重复。种间线粒体基因组序列差异较大,非编码区的变异水平高于编码区,nad6、nad3和cob基因编码序列的变异度较高,内含子长度与线粒体基因组大小呈显著正相关。15个保守的线粒体蛋白编码基因主要受纯化选择影响,其中cob、cox1和nad2基因含有正选择位点。基因编码偏好A/T含量高的密码子,27个高频密码子中,13个以A结尾,14个以T结尾。系统发育分析结果显示,灵芝属真菌主要分为2个聚类组,其中紫芝、狭长孢灵芝和G.wiiroense聚为一组;喜热灵芝、白肉灵芝和铁杉灵芝聚成一支,与树舌灵芝、梅氏灵芝、四川灵芝和亮盖灵芝构成姊妹类群,共同构成另一组。【结论】灵芝属真菌的线粒体基因组在进化过程中发生明显的遗传变异,基因组长度主要与内含子插入和删除有关,蛋白编码基因密码子使用偏性强。     

灵芝人工栽培效益可观

灵芝是我国传统的药用真菌，素有“仙草”的美称。现代医学证明，灵芝含有多种生理活性物质，其中有机锗的含量是人参的3—6倍，它可以促进新陈代谢、延缓衰老；灵芝多糖能够增强人体免疫力；灵芝中还含有18种氢基酸和10种微量元素；灵芝孢子粉有治疗癌症、降低胆固醇的功效。     

灵芝富硒栽培研究

[目的]研究不同浓度的Na2SeO3对灵芝产量、质量和硒富集量的影响。[方法]采用平板自然选育法对灵芝菌种进行筛选,将筛选出的菌种进行栽培试验,以生物量和菌丝多糖产量为指标,考察不同浓度的Na2SeO3对灵芝产量、质量和硒富集量的影响。[结果]平板筛选结果表明,泰芝一号灵芝的菌丝体生物量最高,多糖产量最高,因此选择泰芝一号作为富硒栽培试验对象;在液体培养液中添加不同浓度的Na2SeO3,可有效促进菌体的生长,但对于菌体多糖的合成则没有明显的促进作用,当添加的Na2SeO3浓度达到0.08%时,菌体生物量达到最大;栽培培养基中添加不同浓度的Na2SeO3对灵芝的生长和多糖的合成均有一定的促进作用;灵芝子实体中硒含量随着Na2SeO3浓度的增加而增加。[结论]栽培培养基中添加Na2SeO3对灵芝子实体的生长及多糖的合成均有一定的促进作用。灵芝子实体中硒含量随着Na2SeO3浓度的增加而增加。     

基于银耳转录组测序的多糖代谢途径分析

【目的】对银耳进行转录组测序分析,分析多糖生物合成途径和挖掘关键功能基因。【方法】采用Illumina Hiseq 2500测序平台对银耳菌丝体进行测序,组装得到unigene序列,并与公共数据库进行对比分析和注释,挖掘果糖和甘露糖代谢通路相关基因。【结果】本研究共得到4.72 Gb raw data,拼接后获得17 008条unigene序列,N50为2073 bp;注释结果表明,76.47%序列能够注释到Uniprot公共数据库,注释到GO分类和KEGG通路的unigene分别为10 152和5671条。进一步分析银耳果糖和甘露糖代谢途径相关基因,挖掘得到74条unigene;其中编码L-iditol 2-dehydrogenase的unigene最多,其次是butanol dehydrogenase。【结论】基于转录组测序数据解析及预测,为研究银耳多糖和其它产物的生物合成途径及分子机制提供了数据支持,也为银耳品质的形成提供理论依据。     

灵芝多糖对番茄抗灰霉病的诱导效应

【目的】诱导抗病剂可以诱导寄主植株产生系统抗病性,具有持效性和广谱性的特点。论文以番茄植株为模式植物,番茄灰霉菌（Botrytis cinerea）为目标菌,进行温室盆栽试验,以期明确灵芝多糖诱导剂对番茄灰霉病的诱导抗性。【方法】用一定质量浓度的灵芝多糖溶液（50、100、200和400 mg·L^-1）喷雾处理盆栽番茄植株第1、2片真叶（正反面）,每2 d喷施1次,共诱导3次,最后一次诱导2 d后全株喷雾接种供试菌孢子悬浮液（（1-2）×10⁶个孢子/mL）,对照组施用等量清水代替灵芝多糖溶液,与各处理平行喷雾接种番茄灰霉菌孢子悬浮液。在接种孢子悬浮液之前用注射器将番茄苗茎基部刺伤,注意伤口不能太大。然后再罩上塑料薄膜保湿24 h,接种孢子悬浮液2 d内植株遮阴处理,并用加湿器提高温室内的相对湿度,相对湿度控制在不低于90%,温度控制在（15±5）℃,接种后第3 天正常光照。通过调查植株病情指数,计算相对防治效果以评价灵芝多糖对番茄抗灰霉病的诱导效果,并且从防御酶活性、丙二醛（MDA）和叶绿素含量的变化角度评价其诱导抗性的作用机制。同时用一定质量浓度的灵芝多糖溶液（50、100、200和400 mg·L^-1）处理番茄种子并育苗,20 d后测定番茄幼苗株高、鲜重等多项生长指标。【结果】与直接施用等量清水后挑战接菌的对照组病情指数49.25相比,灵芝多糖处理组的番茄植株病情指数明显下降,在32.96-43.85。其中经400 mg·L^-1灵芝多糖处理的番茄植株病情指数最低为32.96,相对防效达到33.07%。经灵芝多糖处理的番茄植株,其体内与抗病有关的防御酶活性也发生显著变化,过氧化氢酶（CAT）和多酚氧化酶（PPO）的活性在多糖诱导第3天达到最高,分别达到162和98 U·min^-1·g^-1 FW,是对照组的2.13和1.71倍;过氧化物酶（POD）的活性在诱导后第4天达到最高值434 U·min^-1·g^-1 FW,是对照处理组的3.29倍。灵芝多糖能够系统地诱导番茄体内 CAT、POD 及 PPO 活性,显著抑制了感染灰霉菌后番茄植株叶片叶绿素含量的下降。灵芝多糖处理组的MDA含量与对照组相比有所下降,对照处理组在取样期间内MDA含量持续上升,而灵芝多糖处理组在取样期间内MDA含量呈先上升后趋于平稳的变化趋势。各质量浓度灵芝多糖对番茄种子的发芽率、芽长和幼苗株高、植株的鲜重均有不同程度的促进作用。其中200 mg·L^-1灵芝多糖浸泡的番茄种子发芽率最高,达87.3%,比对照组的发芽率77.3%提高了10.0%;且该处理对番茄幼苗的株高和地上部分鲜重的促进作用也最大,分别较对照增加了12.9%和33.3%;经100 mg·L^-1灵芝多糖处理后番茄幼苗的芽长和地下部分鲜重变化最大,与对照组相比分别提高了0.16 cm和0.33 g。【结论】灵芝多糖能够诱导番茄植株对灰霉病产生系统抗病性,同时对番茄种子发芽和番茄植株幼苗生长具有一定的促进作用。     

紫杉二烯合酶基因在灵芝中的表达

【目的】论文旨在研究紫杉二烯合酶基因（ts）在灵芝中的表达情况,为利用灵芝作为生物反应器表达紫杉醇及其中间产物提供科学理论依据。【方法】制备灵芝菌株的原生质体：把培养好的灵芝菌丝用0.6 mol•L-1的甘露醇溶液洗涤两次后,加入1%溶壁酶溶液,30℃水浴酶解3 h,离心去上清液得到纯的灵芝原生质体,用0.6 mol•L-1的甘露醇溶液把原生质体的浓度调整到108个/mL备用;外源基因（ts）的转化：在含有灵芝原生质体的缓冲液各加入含有ts基因和潮霉素抗性基因hph的真核表达载体pgGIgpd-TS和pBgGI-hph 1.0 μg,冰浴30 min;加入0.5 mL PEG buffer,在室温下放置20 min;将离心收集的原生质体涂布在不含有潮霉素的再生平板上,25℃培养5-7 d后,待长出白色菌落后,往平板表层覆盖一层含有潮霉素的PDA半固体培养基,于25℃培养;转化子的鉴定：以灵芝的菌丝基因组DNA和RNA为模板,进行PCR和RT-PCR扩增,鉴定ts基因在灵芝中的表达情况;目标产物的检测：对提取的产物采用不分流进样的方式进行气相质谱联用（GC-MS）检测,进样温度250℃,初始温度100℃,保留1 min,每分钟升高8℃,加热到300℃,保留2 min。【结果】经潮霉素初步筛选后,在含有潮霉素抗性的平板上长出白色的菌落,灵芝原种作为阴性对照的平板上没有长出菌落,说明潮霉素基因被成功转入了灵芝并得到了初步的表达;PCR鉴定结果表明20个拟转化子中有4个转化子同时整合了ts基因和hph基因,两个基因的共转化率为20％;RT-PCR鉴定结果表明,4个灵芝转化子实现了外源ts基因的转录;提取转ts基因灵芝的菌丝产物;经过GC-MS测定分析表明,与原种相比,含有ts基因的灵芝工程菌株有一个明显的差异峰,对该峰进行离子碎片分析表明,该物质为紫衫二烯,说明在含有ts基因的灵芝菌丝体中含有目标产物紫衫二烯。【结论】灵芝作为大型真菌,首次被证实可以通过代谢工程生产合成紫杉醇过程中的中间产物紫杉二烯,为以后紫杉醇的生产提供一个潜在的可能,对今后开展灵芝的分子生物学研究具有重要意义。     

闽楠bZIP基因家族的鉴定与表达分析

【目的】基于闽楠全基因组数据对bZIP(碱性亮氨酸拉链)基因家族进行鉴定,并研究其在闽楠根系水分胁迫下的作用,确定关键调控基因。为进一步探究闽楠根系抵御逆境胁迫的分子机制提供了参考。【方法】利用生物信息学方法进行系统进化、保守基序、基因结构、启动子顺式势作用元件以及蛋白互作分析,并通过qRT-PCR验证基因在水分胁迫下的表达模式。【结果】在闽楠基因组中共鉴定出52个bZIP转录因子,划分为10个亚家族;顺式作用元件分析表明,PbbZIP可能响应光照、生物与非生物胁迫以及生长发育等生物学过程;转录组数据分析显示,PbbZIP15在干旱/水涝胁迫下的表达量较高,PbbZIP40在干旱胁迫下的表达量较高;qRT-PCR验证结果与转录组数据基本一致。【结论】PbbZIP15和PbbZIP40是调控闽楠根系水分胁迫的2个关键基因。     

灵芝多糖的提取纯化及其免疫活性

【目的】从灵芝孢子粉中提取纯化多糖,研究灵芝多糖对小鼠细胞免疫功能的影响,为灵芝开发利用提供试验依据。【方法】利用水煮醇沉法从灵芝孢子粉中提取粗多糖,经反复冻融、Sevag法脱蛋白和Sepharose CL-6B柱层析,纯化得灵芝多糖(GLP)。通过HPLC鉴定GLP的纯度,G.C.分析其单糖组成。采用MTT法、中性红试验、Griess法、比色法和ELISA法,分别检测GLP对小鼠脾淋巴细胞增殖、腹腔巨噬细胞吞噬功能、NO产量和iNOS活性以及TNF-α产量的影响。【结果】GLP为白色粉末,分子质量为51ku,HPLC分析GLP为单一狭窄对称峰,其单糖组成为葡萄糖(Glc)和半乳糖(Gal),二者物质的量之比为16.8∶1。GLP能够刺激小鼠T淋巴细胞增殖,并呈现剂量依赖关系;当GLP质量浓度达到100μg/mL时,能显著增强腹腔巨噬细胞的吞噬能力,提高其分泌iNOS的活力和NO的生产量;同时,当GLP质量浓度≥200μg/mL时,能显著促进腹腔巨噬细胞分泌TNF-α的能力,具有剂量依赖性。【结论】GLP能够增强小鼠免疫细胞活性,有望成为重要的生物免疫调节剂。     

5种灵芝菌株的农艺性状、活性成分和功效分析

【目的】研究分析5个灵芝菌株的农艺性状、干产量及转化率、活性成分含量和功效差异,筛选高产高功效菌株。【方法】测量不同灵芝菌株的农艺性状,以热水浸提醇沉获得灵芝水提液,分别测定不同灵芝子实体内多糖和三萜类化合物含量,同时测定水提液对DPPH、羟自由基和超氧自由基的清除率,并分析不同浓度多糖的灵芝提取物对脾细胞的增殖作用。【结果】圆芝8号(YZ8)和黄灵芝(HLZ)的子实体农艺性状表现较好,转化率较高。HLZ的多糖和三萜化合物含量最高,YZ8却最低。5个灵芝子实体的DPPH清除能力都很强,HLZ的羟自由基清除能力最强,灵白(LB)的最低,5个灵芝菌株的超氧自由基清除能力差异不显著。在对脾细胞的增殖作用上,HLZ的水提液对脾细胞的增殖能力最强,金地灵芝(JD)的最低。【结论】HLZ子实体农艺性状较好、转化率较高、综合抗氧化作用最好、对脾细胞的增殖作用最强,因此,非常适合作为主栽品种进行推广,为开发灵芝天然高活性抗氧化剂提供优质原料。