DHA对小鼠脂肪组织和肝脏生脂及脂解基因转录表达的影响

【目的】探讨二十二碳六烯酸(DHA)对小鼠脂肪组织和肝脏生脂相关基因过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)、固醇调节元件结合蛋白-1c基因(SREBP-1c)、脂肪酸合成酶基因(FAS),及脂解相关基因激素敏感脂酶基因(HSL)和甘油三酯水解酶(TGH)时序表达的影响。【方法】用不同浓度DHA(6.25和12.5 g/kg)灌胃小鼠,分别于0,1,2,4,8,16和24 h处死,取脂肪组织和肝脏,提取总RNA,半定量(semi-quantitative,SQ)RT-PCR方法检测生脂及脂解基因PPARγ、SREBP-1c、FAS,及脂解相关基因HSL和TGH的时序表达规律。【结果】脂肪组织中DHA均可促进PPARγ、FAS、HSL和TGH基因的转录表达,8 h达到峰值,其后表达量下降;抑制SREBP-1c基因的表达,8 h达到最低,之后上升。肝脏中DHA均可抑制PPARγ、SREBP-1c、FAS和HSL基因的转录表达,且表达量分别于8,8,8和16 h达到最低,之后表达量上升;DHA对TGH的作用不显著(P>0.05)。【结论】DHA通过促进脂肪组织中脂肪分解及抑制肝脏中脂肪合成与分解来调节动物体脂沉积。     

脂联素基因在荷斯坦公牛不同组织部位的表达差异

【目的】研究脂联素基因在荷斯坦公牛不同组织及月龄间的相对表达差异性,为脂联素基因作为荷斯坦公牛育肥指标的分子辅助标记提供依据。【方法】运用实时荧光定量PCR法检测了脂联素基因在15和17月龄荷斯坦公牛脂肪组织(背部脂肪、腰部脂肪、肾周脂肪、肠系膜脂肪)和肌肉组织(背最长肌和半腱肌)间的相对表达差异性。【结果】15月龄时脂联素基因在荷斯坦公牛肾周脂肪和肠系膜脂肪中的相对表达量极显著高于腰部脂肪、背部脂肪、背最长肌和半腱肌(P<0.01),17月龄时仅显著高于背最长肌和半腱肌(P<0.05);17月龄时该基因在背部脂肪中的相对表达量显著高于15月龄时(P<0.05)。【结论】脂联素基因在15和17月龄荷斯坦公牛脂肪组织和肌肉组织中均有表达,且在脂肪组织和肌肉组织间具有组织表达差异性。     

Vc对Cd中毒小鼠骨骼肌中Musclin基因及生脂基因表达的影响

为探讨维生素C(Vc)调控Cd中毒小鼠骨骼肌中Musclin基因及生脂基因的转录表达规律,用RT-PCR方法研究小鼠Musclin基因及生脂基因(FAS、PPARγ、TGH)表达水平的变化。结果表明,Cd对小鼠Musclin基因及生脂基因的表达具有显著抑制作用(P0.05),Vc+Cd组与只加Cd组比较,小鼠Musclin基因及生脂基因的表达水平明显升高,Musclin与FASmRNA表达存在显著负相关(P0.01),与PPARγ基因存在显著正相关(P0.05),与TGH基因相关性不显著(P0.05)。研究结果说明,Vc可提高Cd中毒小鼠骨骼肌中的Musclin基因及生脂基因的表达水平。     

DHA对小鼠脂肪生成基因的时序表达影响

研究二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)对小鼠脂肪组织与肝脏中生脂基因转录表达水平变化规律的影响。用两种浓度DHA(6.25 g/kg体重和12.5 g/kg体重)灌胃小鼠,分别于0、1、2、4、8、16和24 h处死,取肝脏和脂肪组织,提取总RNA,半定量(semi-quantitative,SQ)RT-PCR方法检测生脂基因(PPARγ、SREBP-1c、FAS)的时序表达规律。结果表明:脂肪组织中DHA可上调PPARγ和FAS的转录表达,8h达到峰值,其后表达量下降,SREBP-1c表达规律与这两种基因相反;肝脏中DHA能下调PPARγ、SREBP-1c、FAS的转录表达,8h达到最低,其后表达量上升。推测DHA可通过促进脂肪组织中脂肪合成以及抑制肝脏中脂肪合成来调节体脂沉积。     

猪ARID5B基因多态性及其与脂肪沉积性状的相关性分析

为探究猪ARID5B基因多态性及其与脂肪沉积性状的相关性,在DNA水平上对藏猪、大白猪ARID5B(AT-rich interaction domain 5B)基因5′侧翼区进行了单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism,SNP)位点筛选;在mRNA水平上对两猪种的肝脏、背脂和背最长肌组织中的ARID5B基因表达量进行了RT-qPCR检测;并对两猪种的背膘厚和背最长肌组织中IMF(Intramuscular fat)含量进行测定。结果表明:在ARID5B基因5’侧翼区,存在T-2 216C和In-2 029Del缺失2个连锁突变位点,藏猪与大白猪呈极显著差异(P0.01);在相同组织不同品种间,ARID5B基因在肝脏、背脂和背最长肌中mRNA相对表达量趋势完全一致,且藏猪ARID5B基因表达量均极显著低于大白猪(P0.01);藏猪背膘厚和IMF含量均极显著高于大白猪(P0.01);经DNA、mRNA水平、背膘厚和IMF含量相关性分析发现,ARID5B基因mRNA相对表达量与背膘厚和IMF含量呈显著负相关(P0.05)。     

新疆褐牛与安格斯牛胴体及肉质性状及脂代谢相关基因表达差异比较

【目的】探明新疆褐牛与国外优良品种安格斯牛产肉性能及肉品质差异、体脂代谢相关基因及其产物表达的品种间的差异性。【方法】选择相同饲养管理条件下24月龄新疆褐牛和安格斯牛进行屠宰试验,测定其胴体性状和肉品质性状;采集背最长肌和皮下脂肪,采用石蜡切片技术观测脂肪组织和肌肉组织形态学差异;利用实时荧光定量PCR检测脂肪酸合成酶（fatty acid synthesase,FAS）、脂肪酸结合蛋白4（fatty acid-binding protein 4,FABP4）、激素敏感酯酶（hormone-sensitive lipase,HSL）、脂蛋白脂酶（lipoprotein lipase,LPL）和瘦素（Leptin,LEP）基因mRNA表达量;采用蛋白免疫印迹（Western blot）测定FAS、HSL、LPL蛋白表达水平。【结果】1）新疆褐牛净肉率极显著高于安格斯牛（P＜0.01）,而背膘厚度显著低于安格斯牛（P＜0.05）。其余所测定的胴体性状相关指标均无品种间差异（P＞0.05）。2）新疆褐牛肉色L*显著低于安格斯牛（P＜0.05）;新疆褐牛平均肌纤维直径和横截面积均显著大于安格斯牛（P＜0.05）;新疆褐牛皮下脂肪组织单位面积脂肪细胞个数极显著多于安格斯（P＜0.01）,其余所测定的肉品质性状相关指标均无品种间差异（P＞0.05）。3）新疆褐牛与安格斯牛背最长肌和皮下脂肪FAS、FABP4、HSL、LPL、LEP等5个基因mRNA表达量均差异不显著（P＞0.05）;新疆褐牛背最长肌组织中FAS蛋白表达量极显著低于安格斯牛（P＜0.01）;HSL蛋白表达量显著低于安格斯牛（P＜0.05）;新疆褐牛皮下脂肪组织中HSL蛋白表达量显著低于安格斯牛（P＜0.05）。【结论】研究发现新疆褐牛产肉性能较好;但安格斯牛肉色较亮,且嫩度较好,体肪沉积能力较强。两品种间脂代谢相关基因产物FAS和HSL蛋白差异可能与安格斯肉牛背膘厚度差异有关。     

可乐猪RYR1基因的群体遗传特性分析

氟烷基因(RYR1基因)是使猪产生劣质肉及应激综合征的主要因素之一。本研究采用PCR-RFLP技术对45头可乐猪RYR1基因的多态性进行了检测,并通过直接测序对检测结果进行了验证。结果表明:试验猪群体中仅存在显性纯合(HalNN)和杂合(HalNn)两种基因型,不存在隐性纯合基因型(Halnn)。其中,HalNN为优势基因型,频率为0.9111;HalN为优势等位基因,频率为0.955 6。同时,在可乐猪群体中,RYR1基因的变异位点为低度多态(PIC<0.25),并偏离了Hardy-Weinberg平衡(P<0.05)。本研究结果为可乐猪的选育及开发利用提供了理论依据。     

氟烷基因与猪经济性状的相关研究

诊断了四川省外种猪中长白猪3个选育群共343个个体及约克夏猪103个个体的氟烷基因型,研究了氟烷基因的遗传规律、在四川省外种猪中的分布以及不同氟烷基因型与猪经济性状之间的关系.研究结果表明,氟烷基因的遗传符合孟德尔分离定律;四川省外种猪中,Haln基因在长白猪中的频率为0.0109～0.1703,平均为0.1089±0.0858,不同选育群中氟烷基因频率差异较大;在约克夏猪中Haln基因频率为0.0291.Haln基因在正常生产过程中对猪的生活力、生长发育性状、胴体性状等无显著不良影响,但对猪肉质性状有显著不良影响.Haln基因对肉质的影响主要表现在肉色、肉pH值和失水率等性状上,Halnn型的肉色评分显著低于HalNN型(P<0.1),pH1显著低于HalNN型(P<0.05),失水率显著高于HalNN型(P< 0.05),HalNn型在此3个指标上均间于Halnn型与HalNN型之间,与二者间差异不显著.     

钙信号对小鼠脂肪组织中GPR120基因转录及脂肪生成的影响

【目的】探讨钙信号对小鼠脂肪组织中GPR120基因转录及脂肪生成的影响。【方法】用外源性葡萄糖酸钙和二氢吡啶钙离子通道的阻滞剂Nifedipine处理小鼠30 d,记录小鼠体质量的变化,测定小鼠皮下脂肪、附睾脂肪和肾周脂肪的沉积量,检测血清中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的浓度,同时利用Real-ti me PCR法分析GPR120基因及与脂肪生成密切相关的转录因子PPARγ、C/EBPα和脂解基因HSL、生脂基因FASmRNA的表达情况,用SPSS软件分析小鼠附睾脂肪中GPR120与脂代谢相关基因表达的相关性。【结果】葡萄糖酸钙可延缓小鼠体质量的增加,减少体脂含量(P0.01),并使小鼠血清中的TG、TC和LDL-C浓度极显著降低(P0.01),HDL-C浓度显著升高(P0.05),可导致GPR120、PPARγ、C/EBPα和FAS的mRNA表达水平降低,且分别达到极显著(P0.01)或显著(P0.05)水平,并可使HSLmRNA表达水平极显著升高(P0.01);Nifedipine处理能使小鼠体质量增加(P0.05),促进体脂沉积(P0.01),并使小鼠血清中的TG和TC浓度显著升高(分别为P0.05和P0.01),GPR120、PPARγ、C/EBPα和FAS的mRNA表达水平极显著升高(P0.01),但却使HSLmRNA的表达水平极显著降低(P0.01)。相关性分析表明,GPR120 mRNA的表达水平与PPARγ、FAS和C/EBPα间呈显著正相关。【结论】钙信号在GPR120调节小鼠脂肪生成的过程中可能起到负调控作用。     

饲粮水平对猪IMF含量、脂肪酸合成酶mRNA表达量及血液激素含量的影响

试验选用84头10 kg左右杜洛克×长白×大约克(DLY)三元杂交阉公猪,随机分成2组,组内设6个重复,每个重复7头猪,研究了在NRC(1998)标准(对照组)、荣昌猪(GB 7223-1987)饲养标准(试验组)2种饲粮条件下营养水平对DLY猪生长肥育期背最长肌I MF含量、HSL及FAS mRNA表达量和血液激素含量的影响。结果表明:降低饲粮营养水平可降低35、80及110 kg DLY猪血清胰岛素含量和35及80 kg猪生长激素含量;同时可升高20、50及110 kg DLY猪血清肾上腺素含量和35、50及110 kg DLY猪胰高血糖素含量。各阶段试验组背最长肌肌内脂肪含量均高于对照组,DLY猪50 kg时达到了显著水平;除50 kg组外,其余各阶段试验组背最长肌HSL mRNA及FAS mRNA表达量均高于对照组;降低饲粮营养水平有升高20、35及80 kg DLY猪FAS mRNA/HSL mRNA的趋势。     

西门塔尔牛肌内和皮下脂肪miRNA表达谱及miR-27b靶基因分析

【目的】通过分析西门塔尔牛肌内脂肪和皮下脂肪差异表达miRNA,及对重要的候选miRNA-27b进行靶基因预测及相关生物信息学分析,探索miRNA在动物肌内脂肪生长、发育过程中的作用及其调控机制。【方法】利用miRNA微阵列芯片技术对肌内脂肪和皮下脂肪miRNA表达谱进行检测和分析以筛选差异表达miRNA;qRT-PCR方法验证4个在肌内脂肪显著高表达的候选miRNAs;采用Targetscan生物信息学计算方法预测目标miR-27b（对肌内脂肪沉积可能起重要调节作用）的靶基因,并对靶基因进行GO注释描述、富集分析及KEGG富集。【结果】miRNA芯片分析发现肌内脂肪和皮下脂肪共有88个差异表达极显著miRNA（P＜0.01）。候选的4个在肌内脂肪高表达miRNAs（miR-140、miR-145、miR-143、miR-27b）的qRT-PCR检测结果与芯片分析结果具有很好的一致性。KEGG富集显示,目标miR-27b的预测靶基因在MAPK、Wnt、Hedgehog、TGF-beta、GnRH等信号通路中显著富集,其中在MAPK信号通路中富集度最高。【结论】牛肌内脂肪和皮下脂肪组织中确实存在一些差异表达的miRNAs,某些重要的在差异高表达miRNA（如miR-27b）可能以独特的通路（如MAPK信号）来调节牛肌内脂肪的形成过程。     

猪Krox20基因的cDNA克隆与表达分析

根据已报道的人和鼠的Krox20基因,以同源性高的区域设计1对简并引物,以猪脂肪组织RNA为模板,通过RT-PCR方法,获得了猪的Krox20基因的部分cDNA,长度是938bp。多种组织的半定量RT-PCR研究表明,仔猪时期,该基因在心脏、肝脏、脾脏、大肠、小肠、脂肪组织和肌肉中均有表达,9月龄成年猪也在上述组织中有所表达,但是表达量不如仔猪,并且还在性腺中检测到该基因的表达。     

Isolation, Cloning, and Identification of Expressed Sequence Tags from the Backfat Tissue in Duroc and Tongcheng Pigs by mRNA Differential Display

mRNA differential display technique was performed to discuss the differential expression of genes in fat tissue between introduced European and Chinese indigenous pigs. Four anchor primers in combination with five arbitrary primers （20 sets in total） were used and nearly 300 bands were observed in polyacrylamide gel, among which 29 differential display bands were obtained. Twelve of 29 cDNA fragments were identified using reverse Northern dot blot, and subsequently cloned and sequenced. Eight of 12 cDNAs had no matches in GenBank and were submitted to GenBank, and the other 4 showed similarity to identified genes from GenBank. Three among 8 novel ESTs were selected to be further identified by semiquantitative RT-PCR. In our experiment, silver staining DDRT-PCR and DIG primer DNA labeling reverse Northern dot blot were used to avoid radioactive pollution. The result showed that the expressions of 5 among 8 novel ESTs were stronger in the backfat of Tongcheng pigs and the others were weaker than that in Duroc pigs. These novel ESTs were prepared for selecting genes related to adipose cells.     

金华猪与长白猪脂肪组织中HSLmRNA丰度的差异研究

运用半定量RT-PCR法对不同生长阶段的金华猪和长白猪背部脂肪组织中激素敏感脂肪酸酶(HSL)基因mRNA的表达丰度进行测定.结果表明:两品种在35、80和125日龄时均检测到了HSL mRNA,两品种猪背部脂肪组织中HSL基因的表达随日龄增加无显著性变化.金华猪HSL mRNA丰度在80日龄时比长白猪低24.24％ ...     

Study on Relationship Between Halothane Gene and Behavioral Stereotypies in Pregnant Sows

A simple preparation using the ear tissue for PCR amplification was established for diagnosis of genotypes for halothane in 181 sows. 3 halothane heterozygous pigs were detected. The behaviors of the sows that have different genotypes were observed. The heterozygous sows expressed seem more behavioral stereotyples than halothane resistant. But there is no difference in two genotypes. The behaviour directed trough in heterozygous sows is higher than halothane resistant.     

日粮不同能量水平对乌金猪脂肪组织Leptin和RBP4基因表达的影响

 研究日粮不同能量水平对乌金猪脂肪组织中脂肪细胞分泌因子leptin和RBP4基因表达的影响。选取体重约15kg的乌金猪54头,随机分为3组,分别饲喂消化能为14.22,12.89,11.74MJ/kg的日粮,在30,60,100kg体重时屠宰,分别测定血液中胰岛素和葡萄糖含量及胴体脂肪沉积率,取皮下脂肪组织用荧光定量PCR检测leptin和RBP4基因的表达水平。结果显示,饲喂高能量日粮乌金猪胴体脂肪沉积率和血液胰岛素含量高于饲喂低能量日粮组（P<0.05）,日粮能量水平对血液葡萄糖含量无明显影响（P>0.05）;脂肪组织中leptin基因的表达水平升高（P<0.05）,RBP4基因的表达水平降低（P<0.05）。表明高能量日粮通过上调leptin基因的表达、下调RBP4基因的表达,和胰岛素的作用促进脂肪沉积。     

猪体脂肪形成的细胞学和形态学研究

通过对初生～１８０日龄的关中黑猪和长白猪背部皮下脂肪的组织形态学观察和细胞学参数的测定及其变化模式的综合分析，证明猪体脂肪形成主要是脂肪细胞的肥大作用。脂肪细胞的生长机制在不同经济类型猪种间有明显差异：①无论是脂肪细胞的肥大作用，还是脂肪细胞的增殖能力，关中黑猪都强于长白猪；②关中黑猪脂肪细胞的生长在１２０日龄以后明显加快，而长白猪则较稳定；③关中黑猪的细胞学参数表现为二相分布，而非一般的正态分布或高斯分布。     

从绵羊脂肪组织提取总RNA方法的改进及应用

以绵羊脂肪组织为材料,对脂肪组织总RNA提取方法进行了改进,并分析了脂肪酸合成酶基因(fattyacid synthase,FAS)在绵羊腹部皮下脂肪组织、肠系膜脂肪组织和尾部脂肪组织中表达的差异性.结果表明:利用改进后的方法从绵羊脂肪组织中提取出的RNA无DNA污染、均一、完整、质量可靠.绵羊腹部皮下脂肪中FASmRNA的表达量极显著高于尾部脂肪组织和肠系膜脂肪组织(P<0.01),且尾部脂肪组织和肠系膜脂肪组织中FAS mRNA的表达量差异不显著(P>0.05).     

一例体细胞克隆水牛脂肪及皮肤的组织结构观察

应用光镜及HE染色等技术对体细胞克隆水牛的脂肪和皮肤组织及其细胞类型和形态进行了详细的观察,旨在为以后体细胞克隆牛的研究提供一定的理论依据,结果表明,脂肪组织外周有疏松结缔组织包裹,脂肪小叶不明显;皮肤由表皮和真皮构成,借助皮下组织与深部的肌肉相连,局部表皮有脱落,皮肤土有毛囊分布.     

fat-1基因脂肪组织特异性表达载体的构建及其山羊转基因细胞系的建立

旨在构建一种筛选标记可全部去除的脂肪组织特异性表达fat-1基因的载体,将其转染山羊胎儿成纤维细胞,筛选出稳定整合fat-1基因的转基因细胞系。首先将人工合成的fat-1基因连接至L28-Wnt10b载体(1种带有小鼠脂肪组织特异性启动子Fabp4的载体)上,构建成fat-1基因脂肪组织特异性表达载体L28-fat1;同时经多次克隆构建成1种筛选标记可全部去除的骨架载体MCS-3s-LoxP-RFP;然后,利用Hind III和Not I对上述2种载体进行双酶切,接着进行连接,构建出筛选标记可全部去除的脂肪组织特异性表达fat-1基因的表达载体。采用脂质体介导的方法转染山羊胎儿成纤维细胞,通过G418筛选转基因细胞。酶切鉴定及PCR检测结果表明,成功构建了3s-LoxP-RFP-FABP4-fat1表达载体,并首次获得了脂肪组织特异性表达fat-1基因的山羊胎儿成纤维转基因细胞系,为将来通过体细胞核移植创制脂肪组织特异表达fat-1基因的优质肉用转基因山羊新材料奠定了基础。