抗生素对台湾青枣茎段和愈伤组织生长的影响

探讨了卡那霉素 (Kan)、羧苄青霉素 (Cb)、头孢霉素 (Cef)和氨苄青霉素 (Amp) 4种抗生素对台湾青枣幼嫩茎段和疏松的愈伤组织生长的影响 ,初步确立了对台湾青枣 (ZiziphusmauritianaLam .)进行农杆菌介导的遗传转化研究中的抑菌和转化体的筛选策略 .Kan 75mg·L-1时 ,5 0d后茎段基本停止生长并开始变成白色 (白化 ) ;Kan2 5mg·L-1时 ,胚性愈伤组织生长受到明显的抑制 ,Kan 5 0mg·L-1时 ,其生长基本停止且开始褐变 ,Kan 75mg·L-1以上时胚性愈伤组织完全变褐 .适当浓度的Cb或Cef对芽的伸长生长有一定的促进作用 ,Cb +Cef却对芽的伸长出现轻微的抑制效应 .Amp对茎段生长有抑制作用     

Effects of L-cysteine on Agrobacterium-Mediated Transformation of Soybean Cotyledmary Nodes

通过在共培养基中添加L-半胱氨酸,研究了L-半胱氨酸对农杆菌介导的大豆子叶节转化的影响.结果表明:L-半胱氨酸对大豆子叶节的转化有明显的促进作用,其中质量浓度为500mg/L时转化效率最为显著.以此浓度为基础,通过GUS染色和分子检测,得到了大豆转基因植株,使转化效率由不加L-半胱氨酸的1.17％提高到了2.21％.     

TDZ和6-BA对大豆子叶节再生体系中丛生芽诱导的效应

以栽培大豆品种‘Jackson’为试材,用萌发5 d的子叶节作外植体,接种于不同激素配比的萌发培养基和诱导培养基中,分析和比较TDZ(噻二唑苯基脲)和6-BA(6-苄基腺嘌呤)单独和复配使用时对大豆子叶节再生体系中丛生芽的诱导效应,并对其优化组合进行了筛选。结果表明:在种子萌发培养基中,0.5 mg·L-16-BA或TDZ单独使用时,前者能使丛生芽诱导率达到75.56%,诱导效应好于后者,但每个子叶节出芽数低于后者。在诱导培养基中,0.5 mg·L-16-BA和1.0 mg·L-1TDZ复配使用时,丛生芽诱导率最高且每个子叶节出芽数最多,分别为84.75%和3.04。     

大豆不同外植体组织培养及再生研究

利用不同大豆品种的顶芽、胚轴、子叶节、子叶、叶片等做为外植体,进行组织培养再生研究。结果表明：不同大豆品种诱导分化芽的能力差别较大,供试品种中,辽豆11号和辽豆10号的再生能力较强,诱芽率分别为39．8％和36．0％。对诱芽率的影响,经L_（16）（4）~5正交实验可知外植体＞品种＞培养基。外值体对诱芽率影响依次为：子叶节＞顶芽＞子叶＞下胚轴。6－BA对不同外植体诱导芽发生的适宜浓度不同,顶芽、下胚轴为0．5mg·l~（－1）,子叶为1．0mg·1~（－1）,成熟子叶为4．0mg·L~（－1）。     

L-半胱氨酸对农杆菌介导的大豆子叶节转化的影响

通过在共培养基中添加L-半胱氨酸,研究了L-半胱氨酸对农杆菌介导的大豆子叶节转化的影响。结果表明:L-半胱氨酸对大豆子叶节的转化有明显的促进作用,其中质量浓度为500 mg/L时转化效率最为显著。以此浓度为基础,通过GUS染色和分子检测,得到了大豆转基因植株,使转化效率由不加L-半胱氨酸的1.17%提高到了2.21%。     

4种化合物对离体培养二色胡枝子组织分化的影响(英文)

以BADH基因为选择标记基因进行遗传转化最适宜的选择剂、抑菌剂种类和浓度,通过不同浓度NaCl、甜菜碱醛、PEG及甜菜碱醛和NaCl的不同组合等进行胡枝子子叶节分化,茎段增殖以及生根培养,发现NaCl和甜菜碱醛都能抑制二色胡枝子的子叶节分化、茎段增殖和生根,可作为遗传转化中的选择剂。培养基中添加0.8 g/L NaCl就能完全抑制二色胡枝子子叶节和茎段增殖,可作为遗传转化过程中子叶节和茎段增殖阶段的选择剂浓度。培养基中添加0.5 g/L NaCl能抑制生根,适合作为离体培养生根阶段的选择剂浓度。随着培养基中甜菜碱醛浓度的增加,子叶节分化能力下降,当甜菜碱醛达到1.5 g/L时子叶节不再分化,这可作为以甜菜碱醛为选择剂时子叶节分化阶段的最佳筛选。培养基中同时添加NaCl和甜菜碱醛时,NaCl 0.7 g/L+甜菜碱醛0.3 g/L就抑制了离体培养过程中茎段增殖和生根,比较适合二色胡枝子离体培养时茎段增殖和生根的筛选浓度。对头孢霉素的研究发现:培养基中添加200~300 mg/L头孢霉素对离体培养的二色胡枝子子叶节分化影响不大,培养基中添加100mg/L的头孢霉素对离体培养的二色胡枝子茎段增殖和生根无显著影响。     

TDZ对商洛黄芩不同外植体愈伤诱导的影响

以商洛黄芩的种子、叶片和带节茎段为外植体研究不同浓度TDZ对黄芩不同外植体愈伤诱导再生情况的影响。研究结果表明,叶片在MS＋NAA 0.2 mg.L-1＋TDZ 0.75 mg.L-1培养基上再生效果最好,愈伤诱导率为75.99%,带节茎段在MS＋NAA 0.2 mg.L-1＋TDZ 1.0 mg.L-1培养基上再生效果最好,愈伤诱导率为80.73%,黄芩种子在MS＋NAA 0.2 mg.L-1＋TDZ 1.0 mg.L-1培养基上再生效果最好,愈伤诱导率为76.14%。通过比较三者最高愈伤诱导率,得出商洛黄芩最佳再生外植体为黄芩带节茎段,最佳TDZ浓度培养基配方为MS＋NAA 0.2 mg.L-1＋TDZ 1.0 mg.L-1。     

4种化合物对离体培养二色胡枝子组织分化的影响

以BADH基因为选择标记基因进行遗传转化最适宜的选择剂、抑菌剂种类和浓度,通过不同浓度NaCl、甜菜碱醛、PEG及甜菜碱醛和NaCl的不同组合等进行胡枝子子叶节分化,茎段增殖以及生根培养,发现NaCl和甜菜碱醛都能抑制二色胡枝子的子叶节分化、茎段增殖和生根,可作为遗传转化中的选择剂。培养基中添加0.8g/L NaCl就能完全抑制二色胡枝子子叶节和茎段增殖,可作为遗传转化过程中子叶节和茎段增殖阶段的选择剂浓度。培养基中添加0.5g/L NaCl能抑制生根,适合作为离体培养生根阶段的选择剂浓度。随着培养基中甜菜碱醛浓度的增加,子叶节分化能力下降,当甜菜碱醛达到1.5g/L时子叶节不再分化,这可作为以甜菜碱醛为选择剂时子叶节分化阶段的最佳筛选。培养基中同时添加NaCl和甜菜碱醛时,NaCl 0.7g/L+甜菜碱醛0.3g/L就抑制了离体培养过程中茎段增殖和生根,比较适合二色胡枝子离体培养时茎段增殖和生根的筛选浓度。对头孢霉素的研究发现:培养基中添加200~300mg/L头孢霉素对离体培养的二色胡枝子子叶节分化影响不大,培养基中添加100mg/L的头孢霉素对离体培养的二色胡枝子茎段增殖和生根无显著影响。     

影响农杆菌介导大豆遗传转化的因素

以大豆子叶节为外植体,采用农杆菌介导的遗传转化方法,探讨农杆菌菌液浓度、侵染时间、抗氧化剂、表面活性剂Silwet L-77及草丁膦(PPT)筛选浓度等因素对大豆转化效率的影响。结果表明:适合大豆转化的农杆菌菌液浓度D600nm为0.8,子叶节外植体侵染时间以30min为宜,外植体侵染后在含有25mg·L-1LA共培养基中暗培养3d有利于提高转化效率。此外,PPT筛选的适宜浓度为5mg·L-1。根据大豆子叶节农杆菌转化特点,研究中采用了延迟筛选的方法。     

水山药“九斤黄”组织培养及微型块茎诱导

利用山药珠芽进行种茎繁殖,对山药品种具有更新复壮作用;为降低山药种植成本,促进山药品种更新复壮,探索适宜水山药品种"九斤黄"微型块茎诱导的培养条件。通过不同浓度NAA/6-BA激素组合对茎尖诱导的作用,以及不同浓度NAA/KT激素组合、不同活性炭浓度、不同蔗糖浓度处理,筛选适宜微型块茎诱导的配方条件。结果表明:MS培养基中添加0.1mg.L-1 NAA+2.0mg.L-16-BA为水山药"九斤黄"茎尖诱导最佳浓度,植株再生率达到了91.7%;"九斤黄"微型块茎诱导最适宜培养基配方为:MS基本培养基+0.1mg.L-1 NAA+1.0mg.L-1 KT+2.0g.L-1 AC+50.0g.L-1蔗糖+8.0g.L-1琼脂粉。再生微型块茎的种植仍然保持原品种种性,但外观商品性获得提高。     

苏丹草农杆菌介导法基因转化条件

以苏丹草幼穗诱导产生的胚性愈伤组织为材料,比较了抗生素羧苄青霉素、头孢霉素及筛选剂卡那霉素对愈伤组织生长、绿芽分化和绿苗生长的影响.结果表明:500 mg/L的羧苄青霉素对愈伤组织生长的影响与对照差异不明显,可提高愈伤组织绿苗分化率;500 mg/L的头孢霉素明显抑制愈伤组织的生长,对分化影响不大;愈伤组织生长期筛选剂卡那霉素浓度为75 mg/L时,愈伤组织的褐化率达到100%;愈伤组织分化期,卡那霉素浓度为10 mg/L时,绿芽能分化成幼苗,所有幼苗的心叶白化、生长速度与对照无差异.培养基中添加500 mg/L的羧苄青霉素、经农杆菌侵染和15 mg/L卡那霉素筛选获得再生植株,经PCR检测,初步证明NPTⅡ选择标记基因已整合到部分转化植株的基因组中.     

一种高效的农杆菌介导大豆子叶节转化体系的建立

以子叶节为外植体的农杆菌介导的大豆遗传转化体系,其转化效率受到受体基因型、无菌苗状态、丛生芽诱导及伸长和生根过程涉及的多种因素的影响。作者筛选了10个大豆栽培品种,选择诱导率最高的东农50作为转化的受体品种,建立子叶节为外植体的遗传转化化体系。还对萌发培养基中6-BA添加量和生根方式进行了研究。结果表明:萌发培养基中不添加6-BA伸长率可达2.51%～20.59%;伸长芽切下后浸入1mg/L的IBA中处理1min后于1/2MS培养基中生根,生根时间缩短,生根率提高至85.25%。经PCR检测,本转化体系的转化率最高可达7.10%。     

抗生素对高粱愈伤组织诱导和生长的影响

用羧苄青霉素等抗生素进行抑菌试验,以羧苄青霉素和头孢霉素的抑菌效果较好.头孢霉素对高梁愈伤组织的毒性表现出比羧苄青霉素大.浓度低于500 mg/L羧苄青霉素对高梁愈伤组织的生长起促进作用;而分化率随着羧苄青霉素浓度的提高而下降.在农杆菌介导高梁遗传转化时,选用羧苄青霉素是合适的,浓度以250 mg/L为宜.高梁愈伤组织对潮霉素的反应比卡那霉素更敏感,高梁不同基因型愈伤组织对卡那霉素和潮霉素的反应在褐化(死亡)率上表现不同.在以潮霉素作为抗性筛选标记时,选择压以50～75 mg/L为宜.     

大白菜离体再生体系的建立及其不定芽对抗生素的敏感性

以大白菜纯合自交系92S105为试材,对激素、外植体类型、苗龄等再生因素进行优化,研究大白菜再生芽对抑菌抗生素及其筛选抗生素的敏感性。结果显示,在MS附加0.3 mg.L-1TDZ和0.5 mg.L-1NAA的再生培养基上,92S105再生率最高,可达到76.19%。生根培养基为1/2MS附加1.0 mg.L-1IBA或1.0 mg.L-1IAA,生根率都达到100%。在遗传转化中,以5 mg.L-1潮霉素作为筛选抗生素,来筛选抗性芽和抗性植株。用头孢噻肟钠和羧苄青霉素作为抑菌剂,均抑制不定芽的分化,但羧苄青霉素对不定芽分化影响较小,所以使用羧苄青霉素作为抑菌剂。     

影响大白菜离体再生及基因转化的因素研究

以耐热大白菜42 号自交不亲和系的子叶为外植体,研究了几种因素对大白菜植株再生的影响和农杆菌介导法转CpTI基因的条件。含0.1 m g/LNAA, 1.0～2.0 m g/LCPPU, 5.0～10.0 m g/LAgNO3 的MS培养基较适合于大白菜42 号自交不亲和系的子叶离体培养再生植株。测定了在含不同激素组合的培养基上离体培养7 d 后的子叶的内源激素含量,在不定芽诱导培养基上子叶内源IAA、ABA 含量分别比培养在不含激素的培养基上下降42.6% 、10.5% , 比培养在生根培养基上下降52.4% 、19.0% ; iPAs 含量、GA1 3 含量分别比培养在不含激素的培养基上上升510.9% 、143.9% ,比培养在生根培养基上上升860.5% 、558.3% 。头孢霉素抑制子叶再生不定芽,而羧苄青霉素则有促进作用。筛选转化体的适宜卡那霉素浓度为5～10 m g/L。     

抗生素对青香蕉苹果叶片再生的影响

以青香蕉苹果组培苗幼叶为试材,研究了卡那霉素、头孢霉素和羧苄青霉素对青香蕉苹果叶片不定芽再生的影响。用继代10天左右的新梢顶部新展开叶片作为外植体,分别接种在MS＋2．0mg／LBA＋0．3mg／LTDZ＋0．8mg／L IAA＋30．0g／L蔗糖＋6．0g／L琼脂的再生培养基上,添加不同浓度的抗生素。结果表明：5mg／L卡那霉素极显著地抑制青香蕉苹果叶片不定芽再生,600mg／L头孢霉素和400mg／L羧苄青霉素均能完全抑制叶片不定芽再生。     

农杆菌介导的pac1基因转化大豆研究

选用高感大豆花叶病毒病而再生能力较强的大豆品种和品系作为受体,对丛生芽诱导培养基、侵染菌液的制备以及根的诱导方法进行了优化。采用优化后的遗传转化体系以农杆菌介导法将pac1导入大豆,MSB培养基中附加2 mg/L6-BA+0.2 mg/LIBA进行丛生芽诱导,液体YEB重悬活化菌体后侵染,MSB培养基中蔗糖含量15%+2 mg/LIBA+0.2 mg/L6-BA进行生根诱导。共获得8株PCR检测呈阳性植株,经SouthernBlot检测,证明pac1基因已整合到大豆基因组中。转基因植株对病毒的抗性评价正在进行中。     

大豆子叶节高效再生系统的研究

为建立一个大豆子叶节高效再生体系用于大豆的遗传转化,以桂春豆1号、桂早2号、桂夏1号和桂夏豆2号4个大豆品种为材料,子叶节为外植体诱导丛生芽,再生完整植株.实验研究了大豆种子的消毒方法,基因型以及培养过程中植物激素的浓度等影响大豆子叶节再生的因素.结果表明在适宜的条件下,4个大豆品种的丛生芽分化率都可达到90％,丛生芽数基本都在4～6个范围内,4个大豆品种均为子叶节器官发生途径的理想基因型.最适合的种子灭菌方法是双氧水灭菌法;桂春豆1号和桂早2号的适宜芽诱导培养基为B5+ 6-BA 1.6 mg/L+ IBA 0.2 mg/L,桂夏1号和桂夏豆2号为B5 +6-BA 1.0 mg/L +IBA 0.2 mg/L;4个大豆品种的适宜丛生芽伸长培养基为1/2 MS+B5有机+GA3 0.5 mg/L;生根培养基为B5 +NAA0.5 mg/L+ 2.0 g/L活性炭.     

‘幻想’矮牵牛遗传转化受体再生体系建立

[目的]建立‘幻想’矮牵牛的高效遗传转化受体再生体系。[方法]以‘幻想’矮牵牛嫩叶片为外植体,对其暗培养时间、出芽和生根培养基的生长素种类及浓度、筛选抗生素和抑菌抗生素进行优化。[结果]诱导叶片分化的最佳暗培养时间为2 d;最佳出芽培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L;最佳生根培养基为MS+IBA 0.1 mg/L;适宜出芽和生根阶段的卡那霉素筛选压为15 mg/L;适宜的抑菌抗生素头孢霉素浓度为300 mg/L。[结论]该研究为后期‘幻想’矮牵牛的分子及育种研究奠定了基础。     

菜用大豆高效离体再生体系的优化

为筛选较易再生的菜用大豆品种,为遗传转化建立良好的再生体系,以‘春丰早’、‘浙农6号’、‘浙农8号’、‘沪宁95-1’、‘辽鲜1号’和‘台湾75’为材料,研究外植体类型、激素配比、接种时间、接种方式以及基因型对再生频率的影响。结果表明：不同外植体类型中,子叶—子叶柄的再生频率最高;B5培养基+10 mg·L-1 TDZ+005 mg·L-1 NAA+50 mg·L-1 AgNO3为最佳培养基;种子发芽10 d为最佳接种时间;子叶—子叶柄垂直接种时再生频率较高;不同品种中,‘浙农8号’再生频率最高,达8089%;最佳生根培养基为1/2 B5+05 mg·L-1 NAA。