鼓槌石斛种子萌发培养与小苗组培快繁技术研究

[目的]利用鼓槌石斛蒴果,通过无菌播种萌发发育成苗及小苗快繁技术试验研究,从而获得大量种苗。[方法]用鼓槌石斛种子通过无菌播种获得大量原球茎,分别转接到4组不同的诱导芽培养基上,筛选出最适合鼓槌石斛小苗分化和成长的培养基,以其设置以N6为基本培养基,添加浓度均为1.0、1.5、2.0 mg/L的NAA和IAA,筛选最适合鼓槌石斛小苗生根壮苗培养基。[结果]将鼓槌石斛种子在MS＋6-BA1mg/L＋10%香蕉汁＋20 g/L蔗糖＋6 g/L琼脂＋1 g/L AC培养基上进行培养种子,种子萌发率达90%以上;最利于原球茎分化的培养基为N6＋NAA2 mg/L＋BA0.5 mg/L＋10%香蕉汁＋20 g/L蔗糖＋0.5 g/L牛肉蛋白胨＋5.8 g/L琼脂＋0.5g/L AC,培养出的苗整齐度高,均匀;最佳生根壮苗培养基为N6＋NAA 1.5 mg/L＋10%香蕉汁＋20 g/L蔗糖＋5.8 g/L琼脂＋1 g/LAC,苗生根数多、粗壮、整齐,叶浓绿。[结论]该研究结果为鼓槌石斛快速繁育技术提供了参考。     

野生鼓槌石斛的有性扩繁方法

[目的]采集野生鼓槌石斛的成熟蒴果,利用组培无菌快繁技术获得大量野生鼓槌石斛种苗。[方法]将野生鼓槌石斛成熟蒴果消毒灭菌,并将其种子播种于MS培养基上获得大量原球茎,然后分别转接到不同的培养基上,最后在不同阶段的培养基上筛选出适合野生鼓槌石斛分化和生长的培养基。[结果]将野生鼓槌种子在MS培养基上培养,种子萌发率达95%以上;最利于原球茎分化的培养基为3/4MS+NAA 0.8 mg/L+6-BA 0.2 mg/L+土豆泥4%+蔗糖30 g/L+琼脂5 g/L,成苗率高、出苗整齐;最适幼苗生长培养基为3/4MS+NAA 0.8 mg/L+6-BA 0.2 mg/L+香蕉汁7%+土豆泥2%+蔗糖30 g/L+琼脂5 g/L,小苗粗壮、叶片浓绿;最适生根壮苗培养基为3/4MS+NAA 0.8 mg/L+6-BA 0.2 mg/L+香蕉汁7%+土豆泥2%+AC 0.5 g/L+蔗糖30 g/L+琼脂5 g/L,瓶苗生根多而粗壮,叶片浓绿生长整齐。[结论]该研究为野生鼓槌石斛资源的收集与保存提供了参考。     

不同添加物对铁皮石斛组培幼苗生长的影响

以铁皮石斛试管小苗为材料,以MS+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+20 g/L蔗糖+6 g/L琼脂为基础培养基,采用正交试验设计方法研究3种不同添加物(普通香蕉汁、食用马铃薯汁、活性炭)对铁皮石斛幼芽生长的影响。结果表明,香蕉汁对铁皮石斛的鲜质量、根数、茎高有促进作用,在促进茎的伸长方面效果较为显著;马铃薯汁对铁皮石斛的根长、茎粗影响不大,但在鲜质量和茎高等方面有显著性促进作用;添加一定量的活性炭可以促进铁皮石斛根的生长。在基础培养基里添加30%香蕉汁、10%马铃薯汁、0.6 g/L活性炭,有利于铁皮石斛的壮苗生根;添加10%马铃薯汁、0.2 g/L活性炭,有利于铁皮石斛原球茎的增殖和芽的分化。     

蝴蝶兰无菌播种及快繁技术研究

以蝴蝶兰无菌种子为材料,对蝴蝶兰种子消毒和萌发、原球茎诱导、增殖和分化培养、芽生根培养基、壮苗培养基配方进行研究。结果表明,种子经次氯酸钠和洗衣粉消毒,有利于促进种子萌发和原球茎的形成;最适合种子萌发的培养基为MS＋香蕉泥100g/L＋马铃薯50g/L＋NAA 0.5mg/L;原球茎的形成及增殖培养以MS＋6-BA 2.0mg/L＋NAA0.1mg/L＋香蕉泥100g/L为佳,分化培养基为MS＋6-BA 0.1mg/L＋NAA 0.1mg/L＋香蕉泥80g/L＋蔗糖20g/L＋活性炭2.0g/L＋卡拉胶7.0g/L。小苗生根培养基为MS＋NAA 0.1mg/L＋香蕉泥100g/L＋蔗糖20g/L＋卡拉胶7.0g/L＋活性炭2.0g/L,生根率达98%以上;壮苗培养基为MS＋香蕉泥80g/L＋马铃薯汁50g/L＋蔗糖20g/L＋卡拉胶7.0g/L＋活性炭2.0g/L。经过适当驯化处理,将壮苗移栽到疏松的水草或苔藓基质中,注意温度、湿度及光照管理,成活率可达90%以上。     

不同培养基对铁皮石斛种子萌发和壮苗生根的影响

以铁皮石斛种子为材料,通过组织培养技术,不添加植物生长调节剂直接得到丛生芽,并比较天然有机物、活性炭等添加物对铁皮石斛丛生芽壮苗生根的影响,优化铁皮石斛组培快繁技术体系.结果显示,铁皮石斛种子分化最佳培养基为MS+6 g/L琼脂+20 g/L蔗糖+80 g/L香蕉泥;芽苗的壮苗生根试验中,最佳培养基为1/2 MS+0.4 mg/L NAA+0.1 mg/L 6-BA+20 g/L蔗糖+6 g/L琼脂+80 g/L香蕉泥+0.5 g/L活性炭,有利于芽苗的壮苗和生根.该研究可以一次性直接得到优质铁皮石斛幼苗,减少了试验步骤,节省人工、降低成本,提高了试验效率,促进原球茎增殖、提高分化率,促进壮苗和生根,可为铁皮石斛快繁和大规模化生产提供技术支持.     

翅萼石斛组织培养及快繁技术研究

以翅萼石斛蒴果为外植体,通过对其种子无菌萌发和原球茎诱导、原球茎增殖及丛生芽诱导、生根壮苗以及移栽驯化的研究,建立翅萼石斛的组培快繁技术体系。结果表明:翅萼石斛种子萌发和原球茎诱导的最佳培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+蔗糖20 g/L;原球茎增殖和丛生芽诱导的最佳培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+蔗糖20g/L+活性碳1.0g/L,接种45 d后增殖系数约5.8个、生长情况良好;生根壮苗的培养基配方为MS+6-BA 1.0 mg/L+KT 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L+蔗糖30 g/L+香蕉泥100 g/L+活性碳1.0 g/L,生根率达100%,根系及幼苗长势良好。桂林地区移栽驯化宜在3~4月进行,选择水苔做基质,60 d后成活率为76.7%。     

大花蕙兰组织培养快速繁殖的研究

对大花蕙兰组培快繁技术的研究结果表明:原球茎诱导培养基为MS 6-BA 1.0mg/L(单位下同) NAA0.01 香蕉汁50g/L;原球茎增殖及幼苗分化培养基为MS 6-BA 2.0 NAA 0.5 香蕉汁100g/L;壮苗生根培养基为1/2MS NAA 1.0 香蕉汁150g/L,以上培养基均加入活性0.5g/L。试管苗移栽基质为南方树皮,成活率达90%以上。     

国兰“绿蕙红舌”的组织培养技术

采用不同培养基对国兰"绿蕙红舌"的种子进行组织培养试验研究,综合分析不同培养基配方在国兰"绿蕙红舌"组织培养过程中对种子萌发与原球茎诱导、原球茎继代增值、原球茎分化及生根壮苗的影响。结果表明,种子萌发与原球茎诱导最适宜培养基为MS+BA 0.5 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1+水解酪蛋白100 mg·L-1+马铃薯汁200 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂4 g·L-1;原球茎继代增值最适培养基为KC+BA0.5 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1+活性碳2g·L-1+马铃薯汁200 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂4 g·L-1;原球茎分化最适培养基为KC+BA1.0 mg·L-1L+NAA 0.2mg·L-1+活性碳2 g·L-1+马铃薯汁200 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂4 g·L-1;生根壮苗最适培养基为1/2 MS+NAA 0.5mg·L-1+活性碳2 g·L-1+马铃薯汁200 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂4 g·L-1。以上培养基pH均为5.1～5.4。     

兜唇石斛种子无菌播种与快速繁殖

以兜唇石斛八成熟蒴果为外植体,通过对其种子无菌萌发培养、无机盐浓度筛选、活性炭浓度筛选、有机物种类及浓度筛选、丛生芽继代增殖及生长素种类及浓度筛选,确定适合兜唇石斛增殖和生根壮苗的培养基,建立兜唇石斛组培快繁技术体系。结果表明,兜唇石斛种子萌发培养基为1/2 MS+0.2 mg/L NAA+土豆粉30 g/L+活性炭0.2 mg/L,80 d左右获得实生小苗;不同基础培养基对兜唇石斛的增殖系数、生根数、根长及株高均显著影响,最适基础培养基为3/4 MS;添加活性炭显著影响兜唇石斛小苗的生长,最适活性炭浓度为0.1 g/L,当浓度大于0.2 g/L时,开始抑制兜唇石斛小苗生长;香蕉粉及土豆粉能明显促进兜唇石斛生长,增殖可添加30 g/L香蕉粉,30 g/L土豆粉,生根壮苗可添加40 g/L香蕉粉;KT对兜唇石斛丛生芽增殖无显著影响,0.5 mg/L的6-BA增殖系数最大(4.84);NAA及IBA对兜唇石斛的生根壮苗效果影响显著,最适浓度为NAA 1.0 mg/L,IBA 0.5 mg/L,培养45 d增殖系数为5.92,平均每株生根数为27.0,平均根长1.88 cm,株高1.92 cm。通过生产实践最终确认生根壮苗培养基为3/4 MS+蔗糖25 g/L+卡拉胶8 g/L+香蕉粉40 g/L+活性炭0.1g/L+NAA 1.0 mg/L+IBA 0.5 mg/L+6-BA 0.5 mg/L;炼苗移栽30 d成活率100%,60 d成活率85%。该文初步建立了兜唇石斛种子无菌播种与快速繁殖技术体系,为兜唇石斛的快速繁殖和种质资源保存提供理论和技术支持。     

铁皮石斛高效快速繁殖体系研究

为了建立铁皮石斛(Dendrobium officinale)种子高效快速繁殖体系,以铁皮石斛种子为外植体,在萌发培养基上萌发为原球茎,原球茎经悬浮培养增殖,再接种于分化培养基分化、生根长成完整植株。结果显示,原球茎增殖最佳培养基为1/2 MS培养基+0.1 mg/L 6-BA+0.4 mg/L NAA+0.33 g/L(NH4)2SO4+0.525 g/L KNO3+30 g/L蔗糖;原球茎分化最佳培养基为N6+0.1 mg/L 6-BA+0.4 mg/L NAA+100 g/L土豆汁+25 g/L蔗糖+6.5 g/L琼脂+1 g/L活性炭;幼苗生根最佳培养基为1/2 MS+0.3 mg/L NAA+50 g/L土豆汁+30 g/L蔗糖+6.5 g/L琼脂+1 g/L活性炭;悬浮培养与固体培养相结合的技术优于固体组织培养技术,其具有生长周期短、节省空间、节约成本,促进原球茎增殖、提高分化率,促进生根的特点,可为铁皮石斛快繁和大规模化生产提供基础。     

钩状石斛组织培养技术研究

[目的]解决钩状石斛的快速繁殖和提高组培苗成活率。[方法]在基本培养基MS无菌播种下,获得大量无菌幼苗,增殖过程分别采用不同配比的植物生长激素6-BA和NAA组合,筛选出钩状石斛无菌幼苗增殖最佳浓度配比;壮苗生根培养过程中采用不同浓度的植物生长激素IBA和IAA,观察不同因素对生根的影响。移栽技术研究,采用3种不同基质花生壳、刨花和树皮椐末混合,观察不同基质对钩状石斛组培生根苗移栽成活率的影响。[结果]钩状石斛种子萌发最佳配方:MS+6-BA 0.5 mg/L+香蕉10%+白糖20 g/L+琼脂5 g/L+AC 2 g/L。钩状石斛幼苗增殖最佳培养配方:MS+6-BA2 mg/L+NAA 1 mg/L+香蕉10%+白糖20 g/L+琼脂5 g/L。钩状石斛壮苗生根最佳培养配方:1/2MS+IBA 2 mg/L+香蕉10%+白糖20 g/L+琼脂5 g/L+AC 2 g/L。3种基质均对钩状石斛组培苗根生长情况和苗的成活率都有明显的促进作用,其中花生壳为最适宜基质。[结论]该研究为以后工业化快速生产钩状石斛,及钩状石斛的合理开发和可持续利用提供参考。     

野生贵州地宝兰无菌播种及根状茎繁育技术研究

[目的]研究以贵州地宝兰种子为外植体进行无菌播种快繁技术体系,筛选出各个阶段较优的培养基,以提高繁育系数。[方法]以贵州地宝兰种子为外植体,通过无菌播种获得大量根状茎,经过根状茎增殖培养、诱导芽分化、生根壮苗培养等不同培养基试验,分别筛选出贵州地宝兰最适合各阶段成长的培养基。[结果]适宜贵州地宝兰种子萌发的培养基为:1.0 g/L Hyponex1+1.0 g/L Hyponex2+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L ZT+100.0 mg/L CM+20.0 g/L蔗糖+1.0 g/L AC。适宜原球茎的增殖培养基为:B5+0.5 mg/L NAA+100.0 g/L马铃薯+30.0 g/L蔗糖。适宜诱导根状茎分化培养基为:B5+0.5 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA+100.0 g/L香蕉汁+25.0 g/L蔗糖+1.0 g/L AC。适宜生根壮苗培养基为:B5+1.0 mg/L NAA+0.5 mg/L 6-BA+100.0 g/L香蕉汁+25.0 g/L蔗糖+1.5 g/L AC,pH 5.4~5.8。[结论]该研究为珍稀濒危贵州地宝兰野生种群恢复种植试验提供了重要的种苗资源,也为今后该快速繁育技术提供了参考数据。     

灰岩金线莲种子萌发与组培快繁技术研究

【目的】利用灰岩金线莲种子无菌播种进行组培苗生产,为其工厂化组培育苗提供参考。【方法】采用灰岩金线莲种子为外植体,以MS或1/2MS为基本培养基,探讨不同激素组合对外植体进行无菌播种、原球茎增殖、丛生芽分化及生根壮苗的影响。【结果】采用0.1%升汞处理灰岩金线莲蒴果20 min,灭菌率可达100%,且种子萌发不受影响。在种子萌发培养基中添加香蕉泥有利于种子萌发,最适合种子萌发的培养基为1/2MS+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+60 g/L香蕉泥;在原球茎增殖培养中,低浓度的6-BA和NAA有利于灰岩金线莲原球茎增殖,最适合原球茎增殖的培养基为1/2MS+0.2 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+60 g/L香蕉泥;丛生芽分化的最适培养为MS+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+60 g/L香蕉泥+0.1%活性炭,原球茎分化丛生芽较多,生长势最佳;最适合灰岩金线莲生根壮苗的培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+2.0 mg/L NAA+60 g/L香蕉泥+0.1%活性炭。【结论】利用灰岩金线莲种子进行无菌播种,通过原球茎增殖和分化,可获得大量优质组培苗,是实现工厂化育苗的理想途径。     

野生小花碧冬茄外植体器官分化与植株再生研究

[目的]为野生小花碧冬茄组织快繁技术提供依据,文中研究了组培条件下,不同浓度的6-BA、NAAI、BA处理对野生小花碧冬茄外植体器官分化和植株再生的影响。[方法]以野生小花碧冬茄无菌种子获得的试管苗为材料,筛选其成苗培养和生根培养最适激素组合。[结果]成苗培养中,较高浓度的6-BA配合较低浓度的NAA有利于外植体形成丛生芽,而高水平的NAA会引起愈伤组织的大量产生。对野生小花碧冬茄而言,芽分化最佳培养基组合为MS+蔗糖30 g/L+琼脂粉5 g/L+NAA 0.2 mg/L+6-BA 1.5 mg/L;愈伤组织最佳培养基组合为MS+蔗糖30 g/L+琼脂粉5 g/L+NAA 0.4 mg/L+6-BA 1.0 mg/L;生根最佳培养基组合为1/2MS+蔗糖30 g/L+琼脂粉5 g/L+IBA 1.0 mg/L+NAA 0.4 mg/L。[结论]明确野生小花碧冬茄芽分化、愈伤组织和生根培养的理想激素配比,初步建立了野生小花碧冬茄的高效再生体系。     

蝴蝶兰组织培养与快速繁殖技术研究

以残败花梗为外植体进行组织培养,建立了蝴蝶兰的无菌繁殖体系,研究了培养基中不同种类植物生长调节物质及其浓度比例对休眠芽的萌发、丛生芽的诱导以及试管苗生根的影响,筛选出了最佳培养基组成;研究了活性炭、PVP、温度、暗培养对培养基褐化的影响。结果表明:在1/2 MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+10%香蕉汁+3%蔗糖+0.6%琼脂的培养基上休眠芽的诱导效果最好,诱导率可达87.5%;在1/2 MS+6-BA 6.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+10%香蕉汁+3%蔗糖+0.6%琼脂的培养基上丛生芽的诱导效果最好,增殖系数可达3.15;在1/2 MS+NAA 0.5 mg/L+活性炭1 000 mg/L+3%蔗糖+0.6%琼脂的培养基上生根效果最好,生根率可达95%,平均每株生根3.11条左右,炼苗后移植成活率可达90%。     

文心兰的组织培养和移栽管理技术

以文心兰的侧芽为外植体,对侧芽的选择、处理,外植体的消毒方法、培养基的选择等技术进行研究．结果表明：最适合的材料为叶片还未展开的侧芽,二次消毒对文心兰侧芽消毒效果最好。义心兰理想的诱导培养基为MS＋6-BA5．0mg／L＋NAA0．5mg／L＋椰子水100mL／L．增殖培养基为MS＋6-BA2．0mg／L＋NAA0．2mg／L＋椰子水100mL／L,壮苗培养基为MS＋香蕉20g／L,生根培养基为1／2MS＋NAA1．0rng／L＋香蕉50g＋土豆20g／L＋AC2．0g／L。同时通过对炼苗时间、移栽前的处理及移栽后管理方法的综合研究．摸索出一套适合文心兰移栽的方法．移栽成活率达到90％以上．     

三褶虾脊兰无菌播种陕繁技术研究

【目的】建立三褶虾脊兰（Calanthe triplieata）无菌播种快繁技术体系。【方法】以三褶虾脊兰种子为外植体,采用种子→原球茎→完整植株途径,探讨不同组合（0．5mg／L6-BA、0．1mg／LNAA和1．0g／LAC）、附加物[椰汁（CM）、土豆泥、香蕉泥]及基本培养基（花宝1号、1／2花宝1号、MS和1／2MS）对三褶虾脊兰种子萌发、原球茎诱导、增殖、分化、生根的效果,筛选适宜的培养基。【结果】成熟种子在1／2花宝1号＋0．5mg／L 6-BA＋0．1mg／L NAA＋200ml/L CM＋1．0g／L AC＋20．0g／L蔗糖培养基中培养150d左右可形成原球茎,萌发率超过80％以上;诱导原球茎在1／2MS＋100mL／LCM＋2．0mg／L6-BA＋0．1mg／LNAA＋1．0g／LAC＋20．0g／L蔗糖培养基上的增殖效果最好,增殖率为4．5;原球茎接种于花宝1号＋0．1mg／L6-BA＋0．1mg／LNAA＋100．0g／L土豆泥＋1．0g／LAC＋20．0g／L蔗糖培养基上分化培养40d后,再转入花宝1号＋0．1mg／LNAA＋100．0g／L土豆泥＋2．0g／LAC＋20．0g／L蔗糖培养基上培养40d,可诱导形成完整植株。在花宝1号培养基中添加NAA和土豆泥或香蕉泥,原球茎生根率均达100．0％,但土豆泥的成本最低。【结论】建立了比较完善的王褶虾脊兰无菌播种和快繁技术体系,为其种质资源保护、种苗繁育以及产业开发提供技术支持。     

大花蕙兰再生体系建立的研究

[目的]研究并建立大花蕙兰再生体系。[方法]用75%酒精和0.1%升汞进行表面灭菌,以MS为基本培养基,采用L9(33)正交试验设计进行类原球茎增殖的优选,以继代培养40 d后的增殖系数及幼苗分化率为考察指标。[结果]在大花蕙兰离体再生过程中,侧芽是最容易启动的外植体;MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+AC 0.1 g/L是类原球茎诱导的最佳培养基;1/2 MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L是类原球茎增殖和幼苗分化的最适宜培养基;芽分化后,待长至2~3 cm时,小心切下接入1/2 MS+NAA 1.0 mg/L+GA31.0 mg/L+香蕉泥150 g/L培养基中生根壮苗效果最好。[结论]为规模化生产提供依据。     

石斛兰“绿色星辰×出水芙蓉”杂交种子无菌萌发与组培快繁研究

[目的]研究石斛兰＂绿色星辰×出水芙蓉＂杂交种子无菌萌发与组培快繁。[方法]以＂绿色星辰＂为母本,以＂出水芙蓉＂为父本进行杂交,对其杂交种子进行了离体培养和组培快繁研究。[结果]石斛兰杂交种＂绿色星辰×出水芙蓉＂的F1代种子在改良Knudson培养基上（附加1.0mg/L6-BA、1.0mg/LNAA和10%熟香蕉泥）可获得理想的无菌萌发效果,且原球茎在该培养基上也能较快增殖。以1/2MS最适合于该杂种石斛兰F1代无菌实生苗的组培快繁;8种供试培养基用于增殖培养的效果从优到劣依次为：1/2MS〉MS〉1/3MS〉1/4MS≈N6〉改良Knudson≈B5〉H。NAA用于杂种石斛兰＂绿色星辰×出水芙蓉＂F1代无菌实生苗的生根壮苗效果要优于IBA;NAA的推荐浓度为2.0mg/L。[结论]为今后的新品种选育提供了育种材料。