微量法提取高质量小麦DNA供大规模PCR分析

介绍了一种在提取小麦DNA实验中常用的CTAB提取方法基础上改良的微量DNA提取方法.通过提取多个材料的DNA并经分光光度计检测,琼脂糖电泳结果表明,这种方法提取的DNAOD260/280在2.00～1.8间波动,较常规大量法提取DNA的质量高,能满足100～200余次的PCR反应的需要.采用该法对提取的普通小麦DNA以及转抗除草剂基因Bar的转基因植株DNA分别进行SSR标记检测和PCR扩增,结果表明SSR标记扩增效果与大量法无明显的差异,抗性植株DNA能扩增出Bar基因的特征带.     

一种简易的拟南芥幼苗微量DNA提取方法

报道了一种简易的拟南芥幼苗微量DNA提取方法。陔方法可在常温下进行DNA提取，而且样品用量少，仅需10mg左右，用100μL重蒸水回溶DNA沉淀所获得的粗提液可直接用于PCR检测。结果表明：应用该法提取的DNA完整性好，PCR效果佳，适用于拟南芥转基因植株鉴定。     

花生DNA快速提取方法及应用

为了能够高效快速提取群体花生DNA,本研究在碱裂解法的基础上进一步简化步骤,以不同浓度NaOH溶液为提取液,采用直接吸取上清进行PCR和吸取部分上清中和后进行PCR,分析了两种方法的提取效果。结果表明,用1.000 mol/L NaOH溶液裂解后,吸取部分上清中和后的DNA扩增效果更好,与用SLS常规法提取的DNA质量效果相同。该方法简便快捷,在很短的时间内能够提取大量花生群体材料的DNA,并具有较高的稳定性,可在花生分子标记辅助选择育种中广泛应用,为不同基因型花生的高通量快速筛选奠定了基础。     

蒙古黄芪总DNA提取方法的改进研究

[目的]改进蒙古黄芪（Astragalus membranaceus var.mongholicus）总DNA的CTAB提取法。[方法]以蒙古黄芪为试验材料,通过提取试验研究了利用改进CTAB法从植物组织中提取总DNA的效果。[结果]提取DNA的凝胶电泳图谱上呈现出清晰、整齐的条带且拖带较少,说明所提DNA的纯度较高,质量较好。利用改进CTAB法提取的DNA进行trnS-trnG扩增的产量高,说明提取的DNA可用于测序等后续分析。用提取的基因组DNA为模板,用多对特异性ISSR引物对其进行PCR扩增,聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱表明各基因组DNA均扩增出多态性谱带,且带型清晰,易区分,说明利用提取的基因组DNA进行ISSR分子标记检测的效果良好。[结论]改进CTAB法可有效消除次生物质对DNA的干扰,提取的基因组DNA可用于叶绿体trnS-trnG测序分析和ISSR分子标记分析。     

甘薯DNA的小量快速提取

以甘薯幼叶为试验材料,用小量快速法提取转基因甘薯总DNA。所提取的DNA以0.8%琼脂糖凝胶电泳检测和用试ECORI对DNA进行酶切。结果证明,该方法提取的DNA质量较高,可满足RAPD标记、PCR检测和Southernblot杂交等技术分析的需要。为甘薯及其他多糖类植物DNA的提取提供了一个所需材料量少、简便、快速的方法。     

转基因大豆及其深加工产品的PCR检测

以PCR技术为基础,建立了从大豆及其深加工产品中检测转基因成分的方法。大豆及其深加工产品采用改良的CTAB法进行DNA提取纯化,大豆色拉油DNA则用试剂盒方法进行了提取纯化。对提取的DNA用PCR方法对大豆特异性内源基因lectin进行扩增,设计CaMV35启动子和NOS终止子特异性引物对其是否含有转基因成份进行初步的定性PCR筛选,并用抗除草剂基因CP4EPSPS对阳性结果进行确证。实验结果表明,改良的CTAB法对大豆深加工产品的DNA有很好的提取效果,而试剂盒方法对色拉油的DNA有良好的提取效果;PCR检测转基因的方法快速高效,检测结果与标准相符。     

玉米基因组DNA快速提取方法

探讨了用NaOH裂解法从玉米单子粒胚乳中和用十二烷基肌氨酸钠法从玉米叶片中快速提取基因组DNA的方法,分析了2种方法提取的基因组DNA的效果及应用价值.结果表明,虽然得到的DNA质量基本一致,都可用于玉米品种纯度检验和分子标记辅助选择,但优化的、从叶片中快速提取的基因组DNA可长期保存,并用于多种后续序列分析工作.     

2种提取野生蕈菌DNA方法的比较及其应用

采用CTAB法和SDS-CTAB法分别提取真菌DNA,通过分析比较DNA产量和PCR扩增效果,以筛选优势提取方法应用于野生蕈菌分子鉴定。结果表明,2种方法都能提取获得目的 DNA,并可直接用于PCR扩增分析,但SDS-CTAB法提取的总DNA产量高、质量好,操作方法简便,故作为优势DNA提取方法分析鉴定了16个供试野生蕈菌,其序列提交NCBI获得了基因登录号,进行了分子系统鉴定。     

一种简便快速制备水稻PCR模板的方法及其应用

目前在水稻分子生物学实验中DNA提取的常用方法有CTAB提取法和SDS提取法。CTAB提取法提取的DNA质量高而且量大，主要用于RFLP、Southem杂交等实验；SDS方法提取的DNA杂质略多，也可以大量提取，适合用于基于PCR的分子标记实验。但这两种DNA提取方法所需成本较高，技术性强，叶片用量大，难以满足水稻育种实践的需要，实用性不强。因此，在水稻分子育种实践中，急需一种叶片用量小、提取程序简单快捷的方法提取DNA，以满足开展分子标记辅助选择育种、分子标记快速检测种子纯度等应用研究的需要。许多分子标记都基于PCR技术，如AFLP、SSR、RAPD、SNP、EST等。目前已开发出大量的水稻SSR标记。由于水稻基因组中存在着丰富的SSR标记而且多态性较好，在水稻群体分子标记连锁图谱构建、基因定位、QTL分析等研究中广泛应用，在水稻种子纯度鉴定和分子标记辅助选择育种方面已有研究报道。本文报道了一种简便的DNA提取方法，既能快速提取DNA。又只需要少量叶片，同时利用SSR标记鉴定了“两优培九”种子的纯度。     

不结球白菜线粒体DNA的提取及分析

采用SDS-蛋白酶K法提取了不结球白菜黄化苗的线粒体DNA,经琼脂糖电泳及紫外分光光度分析表明,所提取的DNA纯度高,足以进行后续的研究工作.以所提取的线粒体DNA为PCR进行RAPD扩增,获得了清晰的扩增图谱.     

DNA提取方法对转基因甘蔗PCR检测的影响

研究了不同提取方法和不同生长时期甘蔗提取的DNA对转基因甘蔗植株PCR检测的影响。结果表明,幼苗时期提取的甘蔗叶片模板DNA质量高于田间成熟植株;甘蔗幼苗时期的PCR检测易于成熟植株;CTAB法、SDS法和CTAB-SDS法提取的甘蔗叶片DNA均能满足幼苗期甘蔗抗性植株的PCR检测要求;对成熟转基因甘蔗植株而言,以CT...     

小麦DNA提取方法的比较

目的 用4种方法 对小麦DNA进行提取,从中选取最好的方法 ,满足小麦材料进行分子标记的检测.方法 以小麦幼叶为材料,采用CTAB法1、CTAB法2、CTAB法3和NaOH法,提取小麦基因组DNA.结果 NaOH法提取DNA用时短,方法 简单,但常有DNA样品扩增不出PCR产物的情况;CTAB法提取的DNA质量较高,而且CTAB法3在省略了65℃温浴并将两次氯仿∶异戊醇抽提改为一次抽提,缩短了试验时间,降低了试验成本,提取的DNA可以满足实验需要.结论 试验表明,用CTAB法3提取小麦DNA,既缩短了时间又满足进行分子标记检测的需要.     

一种快速低廉的PCR探针标记方法

【研究目的】探针标记技术是分子生物学和基因工程研究中常用实验技术,需要发展高效、快速、低成本、安全、简捷的DNA探针标记方法;【方法】利用普通的Taq酶进行PCR探针标记,电泳和Southern杂交检测探针标记结果;【结果】电泳检测发现标记产物在电泳时相对非标记的对照表现明显滞后,表明探针标记成功;电泳条带清晰明亮,表明探针标记效率高;Southern杂交条带清晰,说明该方法标记的探针可用于Southern等分子杂交实验;【结论】利用普通的Taq酶进行PCR探针标记,是一种低成本、高效、快速的DNA探针标记方法。     

一种适于SSR-PCR的大豆叶片微量DNA简便提取方法

基于PCR技术的SSR标记已经广泛用于基因鉴定、遗传图谱和分子标记辅助育种。为了建立一种适于SSR-PCR的DNA快速提取方法,利用一种新的磨样技巧和减少DNA提取步骤的方法,以大豆叶片为样品对传统CTAB法进行改进。结果表明:新的提取方法与传统CTAB法相比,具有提取速度快、试剂费用低和不需在液氮中磨样等优势。提取的DNA可用于大豆SSR-PCR分析。     

以PCR鉴定转基因番茄植株的微量DNA提取方法

微量DNA提取法是目前以PCR法鉴定转基因番茄植株T1代单株幼苗的一种简便、快速、有效的方法。该方法需约1h即可完成植物DNA的提取，样品用量仅为30-100mg，产量可达30-80μg／g，粗提DNA(溶于10μlTE缓冲液)不必经过纯化，用TE缓冲液稀释5-10倍即可直接用于PCR分析。     

作物种子DNA的提取及分子标记分析

为寻找适用于分子标记快速检测作物种子DNA的方法.本研究采用改良CTAB法、SDS法和碱提法分别提取4种农作物(玉米、水稻、大豆和高粱)种子DNA,用于RAPD、SSR标记检测.结果表明CTAB法较SDS法更适合于提取玉米胚和高粱种子DNA用于RAPD检测;碱提法提取大豆和水稻种子DNA纯化后,用于RAPD检测得到清晰扩增条带.三种DNA提取方法对作物种子提取的DNA均适用于SSR标记检测.根据分子标记方法选择不同DNA的提取方法提取作物种子DNA,才能快速获得准确有效的分子标记检测结果.     

转基因玉米检测中4种DNA提取方法比较

以1%转基因玉米MON810粉末为材料,对比了酚-三氯甲烷法、PVP法、CTAB法、胍-三氯甲烷法4种经过调整和优化的DNA提取方法在转基因玉米检测中的效果差别,该4种方法均能获得可供进行进一步转基因成分检测分析的DNA,其中CTAB提取法获得的DNA质量相对较高。DNA提取过程中,略去蛋白酶、淀粉酶以及RNA酶的使用步骤,同样可获得质量良好的DNA用于转基因成分检测分析。在转基因玉米检测中,可针对样品情况选择和优化方法。     

小麦DNA提取方法的比较

以小麦幼叶为材料,采用CTAB法1、CTAB法2、CTAB法3和NaOH法提取小麦基因组DNA,通过对小麦DNA提取方法的比较,为满足大批量材料进行SSR分子标记的检测寻找最优方法.结果表明,NaOH法提取DNA用时短、方法简单,但常有DNA样品扩增不出PCR产物的情况;CTAB法提取的DNA质量较高,而且CTAB法3省略了65℃温浴,并将两次氯仿:异戊醇抽提改为1次抽提,既缩短了试验时间和降低了成本,提取的DNA又可以满足进行分子标记检测的需要.     

SSR标记技术在玉米品种纯度鉴定上的利用研究

采用玉米单粒种子DNA的提取新方法,对提取的DNA经4.5%PA胶进行电泳检测。结果表明:此法具有快速、DNA分子量大、不降解和纯度高等优点,完全可以满足利用SSR分子标记进行DNA指纹分析的需要,为DNA指纹鉴定技术在玉米种子纯度及玉米分子标记辅助育种中的广泛应用提供了基础。     

一种适用于动物与植物总DNA提取的方法——改良CTAB法

[目的]介绍一种简单、高效且能用于提取动物与植物的总DNA的方法。[方法]采用改良CTAB法,从24个花生品种嫩叶及小白鼠的肝、肺和肾中提取DNA,进行琼脂糖电泳和蛋白核酸分析仪检测及PCR扩增检验。[结果]所提取DNA电泳条带清晰,整齐均匀,OD260/OD280值介于1.77~1.83,用于PCR扩增获得理想效果。[结论]该研究介绍的改良CTAB法提取动物和植物的总DNA,满足开展PCR扩增的要求。