小地老虎的真核和无核精子在生殖道中的后期变化

通过电镜和光镜观察,追踪了小地老虎的真核和无核精子(束)在雄蛾和雌蛾的生殖道中发生的一系列后期变化.结果表明:真核精子在雄蛾贮精囊和复射精管中仍以精子束形式存在,但片层外长物全部消失;在雌蛾的受精囊中,其本体结构则从外套中脱壳“孵化”出来。无核精子在贮精囊中形成外套,在受精副囊中的无核精子绝大多数被分解.作者推论:大量的无核精子伴随着真核精子,对于真核精子的移动、营养、存活乃至最终的受精作用,都起着至关重要的作用。     

交配对棉铃虫雌蛾生殖的调控

研究交配对棉铃虫雌蛾生殖的影响，结果表明：（1）有效交配明显刺激卵巢发育与产卵，交配后24h，交配蛾的卵巢与体重比值较同龄处女蛾提高56．6％，交配雌蛾一生产卵量是处女雌蛾的1．8倍，差异极显。大量的卵的产出使交配后雌蛾体重锐减。死亡时只有羽化的45．2％，明显低于处女雌蛾。（2）有效交配极显抑制了雌蛾的求偶，使雌蛾求偶率降低了87．1％。（3）交配使3日龄雌蛾的性信息素在2h后下降91％。（4）已有效交配的雌蛾当晚不再交配，表现出典型的拒绝行为。（5）有效交配雌蛾寿命为10.4d，显短于无效交配的雌蛾（15．6d)。极显短于单头饲养雌蛾（18．9d).     

奶牛卵胞质内单精注射(ICSI)的研究

[目的]探讨不同状态奶牛精子卵胞质内单精注射（ICSI）的效果。[方法]体外成熟培养24h的奶牛卵母细胞注入不同状态精子，观察其体外发育情况。[结果]结果表明，试验1，研究精子用5mmol DTT（二硫苏糖醇）预处理与精子不经过预处理的对照组的效果。经DTT处理后。精子解聚率和雄原核率显著高于对照组（30．4％和11．6％，47．8％和27．9％，P〈0．05），两组的卵裂率差异不显著（85．0％和80．0％）。囊胚率和孵化率显著高于对照组（45．8％和26．O％，31．3％和14．0％，P〈0．05）。试验2，比较死、活精子的卵胞质内单精注射的效果，两者之间卵裂率（75．0％和79．4％）、囊胚率（27．9％和30．9％）和孵化率（13．2％和16．2％）均无显著性差异（P〉0．05）。试验3，比较睾丸或附睾（头、体、尾）精子卵胞质内单精注射的效果，卵裂率（79．1％、81．8％、73．2％和75．0％）、囊胚率（23．3％、20．4％、19．5％和18．2％）和孵化率（14．O％、13．4％、12．2％和9．1％）均无显著性差异（P〉0．05）。[结论]DTF预处理奶牛精子有助于提高ICSI的效率；死精子能用于奶牛卵母细胞的ICSI；从睾丸精子到附睾尾精子，虽其成熟程度有很大不同，但对ICSI受精不产生显著影响。     

小菜蛾精子发生的形态学观察

从形态学方面对小菜蛾精子发生过程进行了系统观察．结果表明,小菜蛾精巢主要在末龄幼虫期的4龄发育,4龄当天即开始出现成熟的精子,幼虫期主要生成无核精子,有核精子主要在成虫期形成．小菜蛾的二型精子（Dichotomic Spermatogenesis）在其初级精母细胞期发生分化,精巢中出现无核和有核2种初级精母细胞．小菜蛾成虫每个精子束中含有256个精子,无核精子长度大约为20μm,而有核精子长度约为12μm．小菜蛾精原细胞染色体数目为30对．     

猪精子冷冻技术的研究

 采用手握法采集健康成年的长白公猪猪精子，室温离心后，采用液氮熏蒸法细管冷冻猪精子。以精子活力为判定指标，比较了平衡时间和甘油浓度对猪精子冷冻的影响。结果表明:(1)Ⅱ组精子冷冻复苏后精子活力（35.83±5.38）%要高于其他组（P＜0.05）；(2)Ⅰ组和Ⅱ组冷冻复苏精子的活力［（29.75±4.38）%，（28.40±8.55）%］要高于其他组（P＜0.05），由此得出最佳平衡时间和甘油浓度。     

一个重要的精子受体—猪透明带糖蛋白β-D-半乳糖残基

 【目的】证明末端半乳糖残基在猪透明带糖蛋白中的分布以及它在精子结合和侵入中的作用。【方法】体外成熟的猪卵母细胞去除周围卵丘细胞，用异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate，FITC) 络合西非单叶豆凝集素(Bandeiraea simplicifolia lectin-I，BS-I) 或蓖麻凝集素(Ricinus communis agglutinin，RCA-I)处理30min，分别观察末端-D-半乳糖残基或-D-半乳糖残基在透明带中的定位分布。荧光显微镜观察显示，BS-I和RCA-I都标记于整个透明带上且比较集中于透明带的外层，其中BS-I显示微弱荧光反应，而RCA-I呈强荧光反应且在透明带的外层反应尤为强烈。植物凝集素处理的卵母细胞用于体外受精，分别在受精2h或12h观察精-卵结合和精子入卵情况。【结果】RCA-I处理组卵母细胞平均精子结合数显著低于对照组（18 vs 95），而精子入卵则完全被阻断；可是BS-I处理组的卵母细胞的精子结合数少量被抑制（59 vs 95），而且精子入卵率与对照组无显著差异。【结论】猪透明带末端-D-半乳糖残基作为精子受体的重要组成成分，参与精-卵结合和受精。     

不同pH人工精浆对性逆转金鳟雄鱼精子活力的影响

研究了性逆转金鳟雄鱼（XX，伪雄鱼）精子在不同pH的人工精浆（ artificial seminal plasma,ASP）溶液中的活动情况。结果显示，随着pH的提高精子活力不断增强。伪雄鱼精子在不同ASP—pHs中培养1h后，pH9．5～10．5培养组精子活力超过正常雄鱼精子（XY）活力水平，且正常雄鱼精子与pH8．5～9．5培养组的精子活力不存在显著性差异（P〉0．05）。将金鳟伪雄鱼精液培育在pH8．5～10．5的ASP中，0～180min内，pH10．5中的精子寿命和激活比例都最佳，180min之后的精子寿命超过80s，激活比例在90％以上，显著好于其他pH组（P〈0．05）。在低温储藏12h后，正常雄鱼精子在ASP—pH10．5溶液中寿命时间最长，为（284．05±78．37）S，其次是同等稀释条件下的伪雄鱼精子寿命，其时间为（203．89±43．68）s，正常雄鱼精液原浆精子寿命最短，为（122．19±37．61）s。直接用金鳟伪雄鱼精液受精，发眼率和仔鱼上浮率仅为12．50％和8．77％，而通过pH10．5的ASP培养后，其发眼率和孵化率分别提高到了52％和49．95％。因此，在高pH的ASP中培养金鳟伪雄鱼精子能提高其活力和延长寿命。通过这种处理也能够显著的提高金鳟全雌和全雌三倍不育后代的育苗生产效率。     

亚洲型舞毒蛾的羽化和生殖行为节律

为了探究亚洲型舞毒蛾(Lymantria dispar asiatica)的羽化和生殖昼夜节律,在自然光周期和温湿度条件下对亚洲型舞毒蛾成虫的羽化、求偶、交配及产卵行为进行了观察,并利用触角电位反应测定了处女雌蛾性信息素的合成量与日龄之间的关系。结果表明:亚洲型舞毒蛾雌蛾在化蛹后11 d,雄蛾在化蛹后12 d分别出现羽化高峰;雌雄蛾的羽化行为均发生在光期前2 h(02:00)至暗期3 h(21:00),雄蛾羽化高峰期为光期6 h(09:00),较雌蛾(11:00)提前2 h。雌蛾羽化约2 h后开始求偶,1日龄雌蛾的求偶率随时间的推移逐渐上升,而其他日龄的雌蛾仅在光周期开始后的1 h内求偶率降至当日最低(75%),其余时间达到或接近100%;2日龄雌蛾体内的性信息素合成量最高,以后逐日下降。成虫羽化当日即可交尾,室内交尾高峰期发生在光期11 h(14:00)左右,次高峰出现在暗期6 h(00:00)。产卵高峰期发生在光期3 h(06:00)左右,次高峰出现在暗期2 h(20:00)。综上可见,亚洲型舞毒蛾成虫的羽化和生殖行为存在明显的昼夜节律。     

湖南棒蝠蛾成虫生殖系统的解剖

研究湖南棒蝠蛾（ＮａｐｉａｌｕｓｈｕｎａｎｅｓｉｓＣｈｕｅｔＷａｎｇ）生殖系统的形态构造。分为雌性内部生殖器官、雌性外部生殖器官、雄性内部生殖器官及雄性外部生殖器官四部分。雌性内生殖器中，卵巢为多滋式，一对，各由四根卵巢管组成，两组卵巢管汇合成中输管通外生殖腔，外方开口为产卵孔；受精囊为肾形，通过受精囊管与生殖腔相通，在受精囊顶端有分叉的受精囊腺；无附腺。雌性外生殖器由袋状交配囊和产卵器组成；无导精管。雄性内生殖器，有睾丸一对，各呈四裂花瓣状，外被淡绿色睾丸膜；输精管一对，基部与肾形贮精囊中部相连；贮精囊端部具附腺。雄性外生殖器构造复杂，抱器瓣无钩，背兜前下方有一瘦长叶，外缘有钩齿，囊形突狭长     

荔枝蒂蛀虫羽化及交配行为研究

[目的]研究荔枝蒂蛀虫羽化规律及其交配行为。[方法]在室内观察荔枝蒂蛀虫的羽化规律、成虫交配行为。[结果]荔枝蒂蛀虫雌、雄茧蛹集中在进入暗期6h后的时间段内羽化,进入暗期2h为羽化高峰;荔枝蒂蛀虫茧蛹第6～9天为羽化高峰期,雌雄性比接近1：1。暗期8h后为荔枝蒂蛀虫的交配高峰期。荔枝蒂蛀虫雌蛾羽化当天不进行交配,2～8日龄雌蛾均可交配．2、3日龄雌蛾进入交配高峰期;1～15日龄雄蛾均可交配,2-5日龄雄蛾进入交配高峰期。[结论]该研究摸清了荔枝蒂蛀虫羽化规律及其交配行为。     

甘蔗黄螟精子的超微结构及辐射对其影响

本研究观察了正常黄螟睾丸中精子细胞的超微结构。并研究在蛹后期照射~(60)COγ—射线3.0万伦琴处理舌对当代雄虫,和照射1.5万伦琴处理后羽化的雄虫,与正常雌虫配对所产的子代雄虫(F_1)睾丸的精子细胞超微结构的影响。 经辐射处理后的当代雄成虫和(F_1)代雄成虫,其睾丸中的精子绝大多数具有正常的超微结构。从结果表明往后期蛹,用本试验的两个处理剂量,对当代及F_1代雄成虫精子的超微结构影响很小。在应用上,既能达到理想不育效果,又不影响其交尾受精竞争能力。本研究结果为应用辐射不育技术防治黄螟提供理论依据。     

Sry基因探针FISH检测奶牛XY精子纯度

为探讨荧光原位杂交技术（FISH）在评价奶牛精子纯度方面的应用价值，制备地高辛标记Sry基因探针，对分选X、Y精子及常规精子标本进行RNA水平的精子荧光原位杂交分析。结果显示，荧光原位杂交测定分选X、Y精子及常规精子纯度分别为94.6%、93.3%、50.3%，与对应精子纯度比较差异不显著（P>0.05），杂交信号多出现在精子尾部中段。可见：建立的Sry基因探针FISH方法评价奶牛精子纯度鉴定结果准确可靠，为其他精子纯度评价方法提供可靠的技术支持。     

精子与慢病毒共孵育条件的优化以及转基因猪的制备

【目的】探索慢病毒与精子共孵育的方法,并制备转基因猪。【方法】采用正交试验分析精子密度、病毒量、精子与慢病毒共孵育时间、精子与慢病毒共孵育温度对精子活力的影响,采用PCR和Southern blotting检测转基因。【结果】①优化慢病毒与精子共孵育条件为：100 µL慢病毒原液（5×105cfu）与1.0×107个/mL精子在17℃下孵育30 min;②与病毒孵育后的精子（109个/mL）给母猪人工授精时,经PCR检测49头仔猪中有14头呈阳性;③Southern blotting结果表明,8头PCR阳性仔猪中,4头融合了外源基因。【结论】优化了精子与慢病毒共孵育的条件（100 µL慢病毒原液（5×105cfu）与1.0×107个/mL精子在17℃下孵育30 min）,成功制备了转基因猪,并检测有外源基因的融合。     

不同冷冻-解冻精子浓度对猪卵母细胞体外受精的影响

[目的]探讨体外受精时不同精子浓度对精子穿入成熟卵母细胞及后续发育的影响。[方法]以冷冻-解冻精子为材料,以1×106、1×107个/ml 2种精子浓度进行体外受精,研究不同冷冻-解冻精子浓度对猪卵母细胞体外受精的影响。[结果]当精子浓度为1×106、1×107个/ml时,精子穿入率分别为83.18%、88.23%,单精入卵率分别为40.55%、9.02%,多精入卵率分别为59.45%、90.98%,平均每个卵母细胞中的精子数分别为2.03、3.26个,雄原核形成率分别为84.10%、86.40%,单精入卵率、多精入卵率有显著差异(P<0.05),其他指标无显著差异(P>0.05)。[结论]该研究为应用冷冻-解冻精子建立猪卵母细胞的体外生产系统提供了依据。     

猪精液颗粒冷冻技术的研究

为提高猪冻精质量,加速猪冻精在生产上的应用,本试验以解冻后的精子活率、顶体完整率和体外受精(IVF)结果作为判定指标,探讨了冷源和Equex.STM对猪精液颗粒冷冻效果的影响。手握法采集成年、健康种公猪精液,分别采用含有Equex.STM的稀释液和普通稀释液进行两步法稀释,然后以干冰或液氮为冷源进行精液冷冻。结果表明,以干冰为冷源滴冻精液冻后活率为0.487833±0.046761,顶体完整率为0.782±0.039704,而以液氮为冷源的方法冻后活率为0.3334±0.055734、顶体完整率为0.5578±0.068482,前者在这两项指标上均显著优于后者(P<0.05)。另外,在稀释液中添加Equex.STM,以干冰为冷源进行滴冻,可使冻精顶体完整率极显著提高(P<0.01)。以含有Equex.STM的稀释液采用干冰滴冻的冻精进行IVF,胚胎卵裂率、囊胚率分别为0.5316±0.125582和0.216±0.053198。结果表明,采用Equex.STM作为冷冻保护剂并以干冰作为冷源可以获得高质量的猪冷冻精子。     

温度和pH对公子小丑鱼幼鱼消化酶活性的影响

研究了温度和pH 对人工养殖下的公子小丑鱼（Amphiprion ocellaris）幼鱼的胃、肝脏、肠道中蛋白酶、淀 粉酶、脂肪酶活性的影响,并对各部位消化酶活性进行比较。结果表明,在胃、肝脏、肠道中均可以检测出蛋白酶、淀 粉酶、脂肪酶的活性,其中蛋白酶活性顺序为胃跃肠道跃肝脏,淀粉酶活性顺序为肠道跃肝脏跃胃,脂肪酶活性顺序为肠 道跃肝脏跃胃。胃、肝脏、前肠、中肠、后肠蛋白酶的最适pH 值分别为2.2、7.5、7.0、7.0 和8.0;淀粉酶肝脏的最适pH 值 为6.0,其余部位均为7.0;脂肪酶肝脏的最适pH 值为7.0,其余部位均为7.5。胃、肝脏、肠道的蛋白酶最适温度均为 40益;胃淀粉酶最适温度为40益,肝淀粉酶最适温度为35益,肠道淀粉酶最适温度为30益;胃、肝脏、肠道的脂肪酶的 最适温度均为40益。     

精子介导的转基因效率关键影响因素

【目的】精子介导的转基因技术简单易行,其作为制备转基因动物的一种方法已经被很多科学家所认同。但是不同实验室的研究结果显示其稳定性和重复性较低,转基因效率差异极大。现将主要探讨导致这种现象的原因。【方法】小鼠精子获能后分别与0、15、30和300nmol·L^-1 的Cy-3标记DNA（Cy-3-DNA）在37℃共孵育30 min。其后,血细胞计数板检测小鼠精子的活率;共孵育精子进行直接涂片,DPBS洗涤后涂片,DnaseI消化后涂片,精子涂片置于荧光显微镜下,记录视野中的精子总数及显示Cy-3信号的精子数,用于统计精子结合及内化DNA的效率。精子与300 nmol·L^-1 的Cy-3-DNA共孵育后,以50µmol·L^-1的 P₄诱导精子顶体反应,统计顶体反应前后显示Cy-3信号的精子比例。精子分别与15和300 nmol·L^-1 Cy-3-DNA共孵育后,精子进行体外受精,在荧光镜下观察合子期受精卵中Cy-3-DNA的存在位置。按照优化后的条件,精子分别与0、15和300 nmol·L^-1 pEGFP-C1质粒共孵育后进行体外受精,制备转基因胚胎。比较试验组和对照组的受精率和发育效率,采用PCR和RT-PCR方法检测囊胚期外源基因整合和表达情况。【结果】获能后的精子分别与0、3、15、30和300 nmol·L^-1的Cy-3-DNA共孵育后,精子的活率分别为82.21%、73.63%、77.38%、76.33%和77.80%;洗涤前精子结合DNA的效率分别为76%、94%、99%、100%,15、30和300 nmol·L^-1组精子结合率均显著高于3 nmol·L^-1组（P＜0.05）。洗涤后精子结合DNA的效率,分别为45%、66%、84%和87%,消化后精子内化DNA的效率分别为44%、56%、71%和76%,并且洗涤后精子结合及消化后精子内化DNA的效率都为300 nmol·L^-1组和30 nmol·L^-1组均显著高于其他两组,而15 nmol·L^-1组显著高于3 nmol·L^-1组（P＜0.05）;Image J对精子结合Cy-3-DNA的强度进行分析的结果表明,外源DNA的量随着外源DNA浓度的增加而显著增加（P＜0.01）。顶体反应后,精子顶体部DNA会有丢失,但精子头部后区的外源DNA依然会保留,因此,顶体反应前后,精子结合外源DNA的精子比率没有降低。15和300 nmol·L^-1 DNA共孵育的精子体外受精后,荧光显微镜下检测显示,合子期胚胎有外源DNA的荧光信号分布,将荧光信号在雄原核附近密集的胚胎记为阳性胚胎,300 nmol·L^-1 DNA共孵育的精子获得合子期胚胎的阳性率为27.89%,显著高于15 nmol·L^-1组的9.00%（P＜0.05）。精子与pEGFP-C1质粒共孵育后,体外受精,结果表明精子与DNA共孵育后,卵母细胞受精率及胚胎卵发育率与对照组相比差异不显著。单囊胚PCR检测15和300 nmol·L^-1的pEGFP-C1质粒与精子共孵育转基因胚胎阳性率分别为8.72%和21.50%;采用RT-PCR方法在300 nmol·L^-1组的囊胚中检测到了EGFP基因 RNA的表达,在荧光显微镜下没有观察到EGFP绿色荧光蛋白的表达。【结论】精子具备结合和内化外源DNA的能力,并能将外源DNA带入卵母细胞,顶体反应会使精子丢失顶体部DNA,但精子头部后区外源DNA依然保留。受精过程外源DNA在基因组中的整合及外源基因表达激活是精子介导转基因效率的关键影响因素。