猪类胚胎生殖细胞体外诱导分化为神经细胞的研究

【目的】探讨猪类胚胎生殖细胞向神经细胞分化的潜能。【方法】采用性腺-中肾区基质细胞与猪原始生殖细胞共培养的方法得到猪类胚胎生殖细胞,通过直接分化的方法进行神经细胞定向诱导。【结果】（1）与小鼠成纤维细胞作为饲养层相比,性腺-中肾区基质细胞作为饲养层同样能够支持猪类胚胎生殖细胞生长,二者对猪类胚胎生殖细胞的增殖能力不存在显著影响;（2）猪类胚胎生殖细胞有较强的碱性磷酸酶活性,Q-PCR结果显示多能性基因Oct4、Sox2及Nanog表达,增殖能力呈现“S”型,即生长的潜伏期、对数期及平台期,猪类胚胎生殖细胞经体外悬浮培养能够形成拟胚体;（3）经过诱导猪类胚胎生殖细胞能够分化形成表达神经干细胞、神经元及神经胶质细胞标记物的多种神经细胞类型。【结论】从早期性腺中成功分离培养得到了猪类胚胎生殖细胞,通过简单、快速的神经细胞分化的诱导体系证实了猪类胚胎生殖细胞具有体外定向分化为多种神经谱系细胞的能力。     

奶牛卵胞质内单精注射(ICSI)的研究

[目的]探讨不同状态奶牛精子卵胞质内单精注射（ICSI）的效果。[方法]体外成熟培养24h的奶牛卵母细胞注入不同状态精子，观察其体外发育情况。[结果]结果表明，试验1，研究精子用5mmol DTT（二硫苏糖醇）预处理与精子不经过预处理的对照组的效果。经DTT处理后。精子解聚率和雄原核率显著高于对照组（30．4％和11．6％，47．8％和27．9％，P〈0．05），两组的卵裂率差异不显著（85．0％和80．0％）。囊胚率和孵化率显著高于对照组（45．8％和26．O％，31．3％和14．0％，P〈0．05）。试验2，比较死、活精子的卵胞质内单精注射的效果，两者之间卵裂率（75．0％和79．4％）、囊胚率（27．9％和30．9％）和孵化率（13．2％和16．2％）均无显著性差异（P〉0．05）。试验3，比较睾丸或附睾（头、体、尾）精子卵胞质内单精注射的效果，卵裂率（79．1％、81．8％、73．2％和75．0％）、囊胚率（23．3％、20．4％、19．5％和18．2％）和孵化率（14．O％、13．4％、12．2％和9．1％）均无显著性差异（P〉0．05）。[结论]DTF预处理奶牛精子有助于提高ICSI的效率；死精子能用于奶牛卵母细胞的ICSI；从睾丸精子到附睾尾精子，虽其成熟程度有很大不同，但对ICSI受精不产生显著影响。