紫花芸豆胰蛋白酶抑制剂部分性质研究

[目的]研究紫花芸豆（Phaseolus vulgaris）胰蛋白酶抑制剂（PVTI）的部分性质。[方法]探索了不同温度、不同还原剂和变性剂处理对PVTI抑制活性和蛋白构象的影响。[结果]PVTI是一种对热稳定蛋白;部分二硫键对活性中心有重要贡献;经尿素处理,PVTI的荧光光谱没有明显变化,但残留了较少的抑制活性,推测亚基的解离影响了抑制活性而每个亚基的内部结构未受到影响;经盐酸胍处理,Trp残基完全暴露于极性环境中,整个蛋白质分子处于一种松散伸展的状态,PVTI活性全部丧失。[结论]该研究可为PVTI的功能研究及其进一步应用奠定基础。     

茶多酚钝化大豆胰蛋白酶抑制因子（STI）的研究

探索钝化豆类中胰蛋白酶抑制因子(STI)的生物抑制方法.通过测定胰蛋白酶活性来间接反映大豆STI的活性.在探明STI对胰蛋白酶抑制效果的基础上,进行了茶多酚(TP)在不同浓度、pH值、温度和时间条件下对鲜豆奶中的STI及STI标准品(KSTI及BBI)的钝化效果.结果表明:鲜豆奶中的STI和STI标准品均对胰蛋白酶活性具有很强的抑制作用;当鲜豆奶试液、KSTI及BBI的添加浓度分别为0.5 mg/ml、28.0 μg/ml和21.0 μg/ml时,对胰蛋白酶活性的抑制程度最大,抑制率分别为86.67%、100.00%和97.94%;当TP试液与鲜豆奶试液的比例为1:2(体积比)时,TP对STI的钝化效果最好,抑制率为52.30%;当TP:KSTI为25:1(质量比)、作用温度45 ℃、pH4.5、作用时间90 min时,TP对KSTI的抑制率达83.15%;当TP :BBI为20:1(质量比)、作用温度40 ℃、pH4.5、作用时间60 min,TP对BBI的抑制率达76.58%.     

湿热处理对大豆粉品质的影响

在不同的时间、温度以及蒸气压条件下,对大豆粉进行湿热处理,测定其尿素酶活性(UA)和蛋白质溶解度(PS)及胰蛋白酶抑制因子(TI)的活性.结果表明:在温度为110 ℃(0.05 MPa)的条件进行湿热处理,5 min即可将TI灭活96%,PS为66.1%,与其它各处理组相比,是较合适的加工处理条件.     

发光杆菌Photorhabdus sp. HBgy13菌株对4种蔬菜病原菌的抑菌活性

测定了发光杆菌属Photorhabdus sp. HBgy13菌株对番茄菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum), 冬瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、萝卜褐腐病菌(Rhizoctonia solani)、黄瓜灰霉病菌(Botrytis cinerea)等4种蔬菜病原真菌的抑制作用,并对该菌株发酵液中抑菌活性成分的理化特性及滤液活性进行了研究.结果表明该菌株对黄瓜灰霉病菌和萝卜褐腐病菌有较好的抑制作用;该菌株在200 r/min,28℃,96 h发酵后,抑菌活性达到最大,抑菌圈分别达到2.28 cm和2.74 cm;发酵液经50℃处理10 min后,对黄瓜灰霉病菌和萝卜褐腐病菌抑制活性分别下降34.2%、43.7%,经80 ℃处理10 min后,对这2种病菌的抑菌活性消失,说明发酵液中的抑菌活性成分不耐高温;发酵液经紫外线处理30 min后抑菌活性完全消失;发酵液pH值为7时,抑菌活性最强.滤液对黄瓜灰霉病菌和萝卜褐腐病菌的抑制活性分别为原液的33.0%和33.2%.     

章鱼内脏胰蛋白酶抑制剂的分离纯化与性质研究

通过热处理、硫酸铵盐析、膜超滤及SP-Sepharose离子交换层析,从章鱼内脏中纯化得到一种胰蛋白酶抑制剂（Octopus Trypsin Inhibitor,OTI）.Tricine-SDS-PAGE电泳结果显示,OTI的分子质量约为6500 u.性质分析结果表明：OTI在pH=1.0～11.0缓冲液中孵育30 min,抑制活性稳定;在100℃下加热1 h、2 h后仍分别具有90%和65%的抑制活性,具有良好的pH值稳定性和热稳定性;OTI能够显著抑制胰蛋白酶的活性,对胰凝乳蛋白酶、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶几乎无抑制活性;OTI能够有效抑制蓝圆鲹肌肉中肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶（MBSP）引起的肌球蛋白降解.     

均匀设计法优选菱壳中抗胃癌成分的半仿生提取工艺

以SGC7901胃癌细胞存活率为指标,运用半仿生提取方法回收菱壳中的抗胃癌活性成分,考察提取时间、料液比、胃蛋白酶用量、胰蛋白酶用量对提取物抗胃癌活性的影响,并运用均匀设计法确定其最佳提取工艺.结果表明:菱壳与pH≈2提取液按料液质量体积比1∶10,不加入胃蛋白酶,37℃提取30 min后.离心收集沉淀,添加4%胰蛋白酶,菱壳与pH≈8提取液按料液质量体积比1∶10,37℃提取30 min,可获得最佳抑制效果,细胞存活率仅为45.52%.本实验表明,采用半仿生法提取菱壳中的抗胃癌活性成分是可行的.     

重组酵母E22植酸酶的分离纯化及酶学性质研究

对用黑曲霉植酸酶基因构建的一株重组酵母E22所产植酸酶进行分离纯化并研究各种酶学性质,表明E22植酸酶分别在pH2.5～3.0和pH5.5左右具有2个最适pH峰,有活性pH范围为pH2.0～7.5,pH2.5时的最适温度为45℃左右、对植酸钠的Km值为0.000 2 mol/L、比活为493 328.7 u/mg、受Fe2+抑制,pH5.5时的最适温度为55℃.对植酸钠的Km值为0.000 1 mol/L、比活为624 376.2 u/mg、受Ca2+和Zn2+抑制,85℃热处理10 min酶活性保留70%,pH2.5下用胃蛋白酶、pH5.5下用胰蛋白酶处理6 h后酶活均保留90%左右,分子量为61.7KD,等电点在4.5到5.0之间.     

无种皮南瓜籽胰蛋白酶抑制剂的分离纯化与部分性质研究

采用分级盐析和Sephadex G-50的方法分离纯化无种皮南瓜籽胰蛋白酶抑制剂,用BAPNA法进行抑制活性的测定,用SDS-PAGE法测定蛋白质的分子量,用不同的温度处理方法对它的热稳定性进行研究,并对抑制剂的Lys和Cys进行了化学修饰。结果表明在饱和度为60%的硫酸铵作用下,能够沉淀出活性较强的胰蛋白酶抑制剂,其分子量为29 512 Da,并且具有一定热稳定性,在80℃恒温处理1 h仍保持一定的抑制活性。证明了无种皮南瓜籽胰蛋白酶抑制剂是一种分子量较小的,以Lys为活性中心的具有一定热稳定性的蛋白质。     

大豆中胰蛋白酶抑制剂的钝化方法研究

[目的]对大豆中胰蛋白酶抑制剂进行钝化处理,降低其活性,提高大豆饲料的营养价值。[方法]采用正交试验设计对大豆中胰蛋白酶抑制剂的化学钝化法（亚硫酸钠法）和物理钝化法（微波法和超声波法）进行比较,确定最优钝化工艺条件。[结果]大豆中胰蛋白酶抑制剂的化学法钝化最优工艺条件为：Na2SO3浓度为0.03 mol/L,温度75℃,钝化时间60 min;物理微波法钝化最优工艺条件为：微波功率240 W,时间90 s,粉碎度为过60目筛;物理超声波钝化法最优工艺条件为：加水量30 ml,时间30 min,粉碎度为过60目筛。[结论]3种钝化方法处理后,大豆中胰蛋白酶抑制剂活性均明显降低。     

植物病原细菌拮抗菌及其拮抗物质测定——Bacillus cereus G35的产素特性与质粒关系

用同步培养和异步培养从91株大气腐生菌中筛选出13株对9种植物病原细菌有抑制作用的拮抗菌株,其中Bacillus cereus G35菌株的去菌上清液经硫酸铵沉淀、透析去盐、Sephadex G-50凝胶过滤,所得分段收集液对280nm有两个明显的吸收峰,抑菌活性与第二吸收峰吻合,对蛋白酶E和蛋白酶K敏感,对100℃温度处理10min和酚抽提处理敏感,对胰蛋白酶部分敏感,对核糖核酸酶及温度60℃,80℃ 30min处理稳定,其活性物质提取量在一定范围内随硫酸铵饱和度提高而增大。培养基种类、温度、培养时间对该菌株产生拮抗物有不同程度影响,在KMB培养液中30℃振荡培养18h后,拮抗物产生达到稳定,紫外线处理能促进洁抗物产生。此外,还报道了有关B.cereus G35变异株G35-M的某些研究结果。