双氧水对鼻咽癌细胞生长特性的影响及其机制的初步研究

目的:观察H2O2对人低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)生长、增殖能力的影响,并探讨其可能机制。方法:用M TT及平板克隆形成实验、W estern B lot等检测H2O2诱导CNE-2Z后增殖能力、EGR-1、p53、p16、Cyclin D1的表达。结果:不同浓度H2O2可不同程度地抑制CNE-2Z细胞的生长增殖能力,同一时间点各实验组细胞抑制率相比差异有统计学意义,抑制率与H2O2浓度间表现出明显的剂量-效应关系。平板克隆形成实验的抑制率较M TT更明显。CNE-2Z无EGR-1、p16蛋白表达,可见p53、Cyclin D1蛋白表达;诱导培养后EGR-1、p53、Cyclin D1蛋白表达明显增加。结论:一定浓度的H2O2能抑制CNE-2Z细胞生长,其作用可能与EGR-1及p53蛋白表达增强有关;Egr-1基因在CNE-2Z中具有可诱导性,在肿瘤治疗中有一定的应用前景。     

脂质体转染反义PKCα对CNE-2Z细胞生长的影响

目的 :观察脂质体转染反义 PKCα对 CNE- 2 Z细胞生长的影响。方法 :用脂质体法转染反义 PKCα,以 MTT法测细胞生长。结果 :(1)脂质体浓度为 2 .0 0 0～ 8.0 0 0 mg· L- 1时 ,随着脂质体浓度增加 ,细胞生长指数逐渐降低 (P<0 .0 5 ) ;但当浓度为 1.0 0 0 mg·L- 1时 ,其对细胞生长似无影响。 (2 )在 4.0 0 0～ 16 .0 0 0 mg· L- 1的范围内增加转染的反义PKCα的浓度 ,细胞生长指数逐渐降低 (P<0 .0 0 1)。结论 :小剂量脂质体转染反义 PKCα可抑制 CNE- 2 Z生长 ,反义PKCα的剂量与细胞生长抑制呈量效关系。     

氯化钴诱导HepG2细胞低氧应激模型的建立

探索氯化钴(CoCl_2)诱导人肝癌细胞系HepG2建立低氧应激模型的条件,并评价该模型。不同浓度氯化钴处理HepG2细胞后,PCR法检测低氧诱导因子1α(HIF-1α)、激活转录因子4(ATF4)、腺苷酸激酶4(AK4)基因的表达;细胞计数法绘制对照组细胞和氯化钴处理组细胞的增殖曲线。随着CoCl_2浓度升高和处理时间的延长,HIF-1αm RNA和ATF4 m RNA表达显著升高、AK4 m RNA表达显著下降、HepG2细胞增殖速度显著下降(P0.05)、细胞膜不完整边界不清。氯化钴化学模拟低氧过程中影响了缺氧主要调节因子HIF-1α的水平,因此以氯化钴用于构建模拟HepG2细胞缺氧诱导模型是可行的,ATF4和AK4可能在参与HepG2细胞抗低氧应激反应中起关键作用。此模型的建立为进一步研究AK4基因的生理学功能奠定了基础。     

异鼠李素对鼻咽癌细胞生长和增殖的影响

目的 观察异鼠李素对鼻咽癌细胞生长和增殖的抑制作用.方法 采用不同质量浓度(10、20、40、80 mg/L)异鼠李素处理CNE-2细胞,分别用MTT法、台盼蓝染色、平皿培养和倒置显微镜观察细胞生长抑制率、细胞活力、集落形成、形态变化.结果 异鼠李素组的CNE-2细胞生长抑制率均高于对照组(P<0.05),且抑制作用呈...     

人HIF-1α基因重组减毒沙门氏菌载体的构建及稳定性检测

利用RT-PCR方法从低氧预处理的A549细胞中获得HIF-1α基因片段,将其定向插入pIRES-SEQ质粒NheⅠ、MLuⅠ2个酶切位点之间,得到真核表达载体pIRES-HIF-1α;采用电转化方法将其电转化入减毒沙门氏菌Ty21α中,获得重组减毒沙门氏菌菌株TPH;转染A549细胞,RT-PCR法检测HIF-1α基因表达,ELISA方法检测HIF-1α蛋白表达;TPH菌株在氨苄青霉素(+)和氨苄青霉素(-)LB培养板上分别传代40代,每10代提取质粒进行PCR及酶切鉴定.结果表明:试验成功构建了携带HIF-1α基因的重组减毒沙门氏菌TPH,其可在体外细胞中稳定表达HIF-1α基因及蛋白,TPH可稳定遗传.     

低氧环境下甘肃鼢鼠延髓中c-Fos和HIF-1α的表达模式分析

【目的】低氧环境可造成中枢神经系统的损伤,延髓可通过对自身的调控来应对低氧协迫.本研究利用甘肃鼢鼠自身的低氧适应能力来分析其与SD大鼠延髓中不同核团的低氧适应机制.【方法】采用免疫组织化学法,在常氧、急性低氧和间歇性慢性低氧条件下,分析延髓孤束核(NTS)、灰质(GC)及蓝斑核(LC)中c-Fos和HIF-1α的表达.【结果】在常氧条件下甘肃鼢鼠NTS、LC内c-Fos表达极显著高于SD大鼠;间歇性慢性低氧条件下甘肃鼢鼠三核团c-Fos表达均极显著高于SD大鼠;其他条件下差异不明显.3种条件下,甘肃鼢鼠三核团HIF-1α表达量均极显著高于SD大鼠.间歇性慢性低氧条件下,雄性甘肃鼢鼠3种核团及急性低氧条件下孤束核(NTS)HIF-1α表达显著高于雌性,c-Fos表达极显著高于雌性.【结论】甘肃鼢鼠延髓系统较SD大鼠有更强的低氧适应能力,且雌性甘肃鼢鼠较雄性低氧耐受性强.     

HIF-1反义核酸对金鱼HIF-1α及其靶基因VEGF表达水平的影响

金鱼是低氧耐受能力最强的淡水鱼类之一,低氧诱导因子-1(hypoxia induced factor,HIF-1)在动物低氧应答调节中发挥关键作用,目前尚没有关于鱼类HIF-1抑制剂的研究报道。试验分析了HIF-1反义寡聚核苷酸对金鱼肝脏组织HIF-1及其靶基因血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的基因表达差异。荧光定量PCR结果显示,低氧状态下,30,60 mg/kg剂量的反义核酸能有效抑制VEGF基因的表达,但对HIF-1αm RNA水平没有影响。制备金鱼HIF-1兔源多克隆抗体并进行Western Blot分析,结果显示,60 mg/kg剂量的反义核酸抑制低氧所诱导的HIF-1蛋白水平的上升,表明合成的反义核酸能够特异性地抑制金鱼HIF-1 m RNA的翻译。金鱼HIF-1抗体的合成及反义寡聚核苷酸的制备,可为进一步探索金鱼独特的低氧应答机制提供有效研究手段。     

内质网应激在肺泡上皮间质转分化发生中的作用

目的 探讨衣霉素诱导的内质网应激在肺泡上皮细胞-间质转分化(EMT)中的影响及作用机制.方法 以质量浓度为1.25、2.5、5.0 mg/L的衣霉素(TM)分别处理人肺腺癌上皮细胞A549 24 h,MTT法检测细胞活力;RT-PCR和免疫印迹法检测GRP78、CHOP、E-钙粘蛋白(E-cadherin)、Smad2/3、转录因子Snail的表达;以5μg/L TGF-β1分别处理A549细胞24 h或48h后,免疫印迹法检测GRP78和p-elF2α的表达.结果 1.25 mg/L的TM处理A549细胞24 h后,GRP78 mRNA和蛋白表达升高,CHOPmRNA表达上调;E-cadherin蛋白表达下降,Smad2/3活化,Snail表达上调.而TGF-β1处理A549 24 h,GRP78和p-elF2α表达均上调.结论 衣霉素诱导的内质网应激可介导A549细胞发生EMT,同时EMT发生过程中伴随着内质网应激的发生.     

不同EBR处理对低氧胁迫下马铃薯植株生长和光合作用的影响

以马铃薯品种Favorita为试验材料,研究了外源喷施不同浓度EBR(2,4-表油菜素内酯)处理对低氧胁迫下马铃薯植株生长发育的影响.结果表明,不同浓度EBR处理对低氧胁迫下马铃薯植株生长均有不同程度的促进作用.在处理的初期,高浓度EBR处理对低氧胁迫下马铃薯植株的株高和叶面积促进作用明显,而在处理的后期,中低浓度EBR处理效果明显;0.050和0.100 mg/L EBR处理对低氧胁迫下马铃薯植株的茎粗和匍匐茎数量促进作用明显;对于低氧胁迫下马铃薯光合作用和根系长度促进作用最明显的处理为0.050 mg/L EBR;不同浓度EBR处理对低氧胁迫下马铃薯植株的分枝数作用不明显.因此,对于促进低氧胁迫下马铃薯植株生长发育的EBR最适浓度为0.050 mg/L.     

HIF-2α在高原动物低氧适应中的研究进展

近年来,全基因组扫描和候选基因分析结果都表明低氧诱导因子调控的信号通路相关基因在藏族群体得到高表达。初步揭示了高原动物对高原低氧环境的适应机制,并发现了一系列对藏族人群适应高原低氧环境发挥作用的候选基因。其中低氧诱导因子-2α(HIF-2α)基因在低氧诱导通路中起着最关键作用,加深对HIF-2α的研究有助于进一步认识藏族人群低氧适应的机制。文中对HIF-2α的结构,分布,表达及调控进行了系统的阐释,并着重对HIF-2α在高原人群中的研究进展进行讨论,还对今后的研究发展方向进行了展望。     

活性炭、MS浓度及生长素对树莓试管苗生根及生长的影响

以树莓茎段为材料,研究了不同活性炭、MS培养基及生长素质量浓度对试管苗生根及茎叶生长的影响。结果表明:当活性炭质量浓度为1.0g/L时,发根数量和根干重均达最高,且植株鲜重显著优于其它处理;1/2 MS培养基处理最适宜树莓试管苗生根及生长;3种生长素均在低质量浓度时促进生长,高质量浓度时抑制生长,IAA和NAA处理,在0~1.5mg/L时,质量浓度越高则促进作用越明显,当超过1.5mg/L时开始抑制生长;而IBA处理,当超过1.0mg/L时开始抑制生长,其中,1.0mg/L IBA处理的促进作用最明显,且显著优于其他处理。树莓生根和试管苗生长的最佳培养基组合为1/2 MS+1.0g/L活性炭+30.0g/L蔗糖+1.0mg/L IBA+7.0g/L琼脂粉。     

血清、脂质体及转染时间对反义PKCα转染CNE-2Z的影响

目的：探讨血清、脂质体及转染时间对反义PKCα转染CNE—2Z的影响。方法：脂质体转染反义PKCα，MTT法测细胞生长。结果：(1)l6．0mg/L的反义PKCα可明显抑制细胞生长(P＜0．01)，但5％(体积分数)的小牛血清培养液对转染所致细胞生长抑制无明显影响(P＞0．05)。(2)1．0mg/L与0．5mg/L的脂质体转染效果差异无显著性(P＞0．05)。(3)转染反义PKCα l9h后，细胞生长指数有非常显著降低(P＜0．01)。结论：用1．0mg/L的脂质体、5％的小牛血清培养液转染16．0mg／L的反义PKCα 19h可有效地抑制CNE—2Z的生长。     

缺氧诱导因子2α在大鼠早期妊娠中的表达与调节

利用原位杂交、免疫组织化学、Western blot以及荧光定量PCR等试验技术,研究HIF-2α基因在大鼠早期妊娠1～9 d、激素处理、人工诱导蜕膜化及体外诱导人子宫基质细胞蜕膜化模型中表达情况。妊娠1～5 d子宫基质细胞中低表达;妊娠第6天在围绕着床位点子宫基质细胞中HIF-2α表达升高;妊娠第7～9天HIF-2α蜕膜中表达逐渐增强;24 h雌激素和孕酮处理HIF-2α在子宫中表达无变化。HIF-2α在人工诱导蜕膜化子宫中高表达。在体外诱导人子宫内膜基质细胞蜕膜化模型中,HIF-2α随诱导天数增加表达升高。体内体外试验结果表明,HIF-2α可能在早期妊娠蜕膜化过程中发挥作用。     

高原鼠兔HIF-1α基因真核表达载体的构建及细胞表达和定位

利用PCR从克隆质粒PMD18-T-pHIF-1α中扩增鼠兔HIF-1α;构建重组质粒pcDNA3.0/6Xmyc-p HIF-1α,用重组质粒转染HEK-293T,HeLa和COS-7细胞,通过免疫印迹分析,检测HIF-1α表达蛋白在细胞中的分布。EcoRI和XhoⅠ酶切鉴定和序列分析表明,构建的pcDNA3.0/6Xmyc-pHIF-1α真核表达载体序列正确;HIF-1α在真核细胞中能够正确表达,且其表达产物主要存在于细胞核中。     

柴胡皂甙-d对人肝癌HepG2细胞增殖及细胞周期的影响

目的 探讨柴胡皂甙-d(SSd)对人肝癌HepG2细胞增殖和细胞周期的影响.方法 (1)常规培养人肝癌HepG2细胞;(2)噻唑蓝(MTT)实验观察不同质量浓度SSd处理HepG2细胞72 h后以及10mg/L的SSd作用HepG2细胞不同时间对HepG2细胞生长指数的影响;(3)流式细胞术(FCM)检测SSd处理HepG2细胞48h后细胞周期的分布.结果 SSd能明显抑制HepG2细胞的增殖,以10mg/L的SSd作用48h的抑制作用最明显.FCM检测显示SSd作用48h后实验组处于S期的细胞数较对照组明显减少(P<0.01).结论 SSd对人肝癌HepG2细胞的体外增殖具有抑制作用,并能使细胞周期中处于S期的细胞数减少.     

EB病毒体外感染鼻咽癌病人及IgA/VCA阳性者的PBMC的上清的作用

本文采用EB病毒(EBV)体外感染鼻咽癌(NPC)病人,IgA/VCA阳性者,IgA/VCA阴性者和新生儿的PBMC,其上清(SN)对CNE-2Z和Raji细胞生长的影响,NPC病人对CNE-2Z有明显抑制作用,生长指数(GR)为0.67—0.74,IgA/VCA阳性和阴性者无明显作用.对Raji细胞则三者均有抑制作用,生长指数为     

囊性纤维化跨膜转导因子与多囊卵巢综合征发病机制的相关性研究

目的:通过观察囊性纤维化跨膜转导因子(CFTR)对人源卵巢颗粒肿瘤细胞(COV434)增殖活力和凋亡等生物学特性的影响,探讨CFTR与多囊卵巢综合征(PCOS)排卵障碍发病机制的相关性,为PCOS提供新的病因诠释及防治靶点。方法:在CFTR特异性阻滞剂CFTRinh-172干预下,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察COV434细胞的增殖活性及凋亡情况,利用Western Blot检测COV434细胞中半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶(Cleaved-Caspase3)蛋白、环氧化酶-2(COX-2)蛋白的表达情况,利用PCR检测肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)基因的表达情况。结果:不同浓度(10μmol/L和50μmol/L)CFTRinh-172阻滞剂作用于COV434细胞后均致其生长活力下降,且随浓度的增加其生长抑制显著,CFTRinh-172阻滞剂处理72h后的COV434细胞生长抑制率差异列更显著,抑制率与作用时间显著正相关;不同浓度(1μmol/L和10μmol/L)CFTRinh-172阻滞剂作用COV434后,Cleaved-Caspase3和COX-2的蛋白表达量随浓度的增加而增加,其中,Cleaved-Caspase3的蛋白表达量在培养48h后明显高于培养24h后;添加不同浓度(1μmol/L和10μmol/L)CFTRinh-172阻滞剂后,COV434中TRAIL基因的24h表达量与对照组相比呈低表达,且随着浓度的增加抑制效果更显著。结论:CFTR缺失通过Cleaved-Caspase3、COX-2及TRAIL分别影响卵巢颗粒细胞的凋亡、血管生成及卵巢内炎症反应,从而推测CFTR缺失可能是多囊卵巢综合征的卵泡发育异常的重要病理生理改变和发病机制之一。     

三氧化二砷对人宫颈癌HeLa细胞凋亡及其血管内皮生长因子表达的影响

目的了解三氧化二砷（As2O3）对人宫颈癌HeLa细胞凋亡及其血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法用不同浓度的As2O3作用于HeLa细胞不同时间段后,光镜和电镜观察细胞形态改变,MTT法测定细胞生长抑制情况,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting方法检测VEGF的表达。结果不同浓度的As2O3处理HeLa细胞不同时间后,能抑制宫颈癌Hela细胞的体外生长,诱导宫颈癌Hela细胞凋亡,并呈浓度和时间依赖性（P〈0.01）。As2O3还下调VEGF的表达。结论 As2O3可抑制体外人宫颈癌HeLa细胞增殖及VEGF的表达。     

荜茇酰胺对人胆管癌HCCC-9810细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨荜茇酰胺(PL)对人胆管癌HCCC-9810细胞增殖、凋亡和生长迁移的影响.方法 用MTT法检测不同浓度(0、5、20 μmol/L)的PL干预后的人胆管癌HCCC-9810细胞增殖活力,并用Hochest33258试验和细胞划痕试验分别检测HCCC-9810细胞的凋亡和生长迁移情况.结果 人胆管癌HCCC-9810细胞经不同浓度(0、5、20 μtmol/L)的PL处理后,其PL浓度越高,细胞增值率越降低(P＜0.01),核变形细胞比例越高(P＜0.01).结论 PL能明显抑制人胆管癌HCCC-9810细胞的增殖,且具有明显的浓度依赖性;PL且可诱导人胆管癌HCCC-9810细胞的凋亡,并明显抑制人胆管癌HCCC-9810细胞生长迁移.     

氟苯尼考对铜绿微囊藻生长和生理特征的影响

试验以5个不同质量浓度氟苯尼考处理铜绿微囊藻,测定其生长及生理响应。结果表明,氟苯尼考质量浓度低于0.1 mg/L时促进铜绿微囊藻的叶绿素a合成,而对藻胆蛋白含量和多糖分泌无直接影响;质量浓度高于1.0 mg/L时则抑制其叶绿素a合成,而藻胆蛋白和多糖含量均随处理质量浓度升高而增加。不同质量浓度的氟苯尼考处理对铜绿微囊藻光合作用相关基因rbcL以及光系统Ⅱ反应中心蛋白编码基因psaB和psbD1均有一定程度的影响。rbcL和psaB基因的表达量在试验前3天均有下调,后期随质量浓度明显上调;psbD1基因在1.0 mg/L组的表达量明显高于其他组。表明水中氟苯尼考质量浓度在1.0 mg/L以上有促进铜绿微囊藻的生长趋势。