绿僵菌超低容量油剂防治萧氏松茎象试验研究

应用金龟子绿僵菌Ma1291-2和MaWP-01菌株油剂进行林间感染和防治萧氏松茎象试验。结果表明,室内培养48 h后,2株菌株的分生孢子在油剂中的萌发率达80%以上;感染试验中,2种处理后的萧氏松茎象死亡率都极显著高于对照;Ma1291-2和MaWP-01菌株防治处理,1 a后萧氏松茎象虫口密度极显著低于对照,防治效果分别为(46.71±1.28)%和(37.57±1.26)%,2 a后萧氏松茎象虫口密度仍然显著低于对照,防治效果分别为(45.47±1.70)%和(36.69±0.90)%。说明该2株菌株的油剂对萧氏松茎象有一定的控制效果,且Ma1291-2菌株更有应用价值。     

萧氏松茎象绿僵菌无纺布菌条防治试验

进行了金龟子绿僵菌Ma1291-2菌株无纺布菌条的制作和萧氏松茎象防治试验。结果表明,Ma1291-2菌株无纺布菌条最佳接种量为1∶3,产孢量为(1.11±0.08)×108孢子.cm-2;该菌条对萧氏松茎象室内感染试验,校正死亡率和僵虫率分别为64.25%和62.25%,LT50为14.43 d;林间防治试验,2个试验区效果分别达(53.80±1.74)%和(51.54±1.35)%,林间无纺布菌条上含孢量15 d前为107-108孢子.cm-2,以后急速下降,30 d后为103孢子.cm-2,孢子萌发率变化较小,30 d内在80%以上。结果说明Ma1291-2菌株无纺布菌条对防治萧氏松茎象有一定的应用价值。     

感染萧氏松茎象幼虫的绿僵菌菌株的初步筛选

应用10个绿僵菌菌株对萧氏松茎象幼虫进行致病力试验,结果表明,以浓度为(1.5±0.5)×106个.mL-1的孢子悬液喷菌,校正死亡率最高为91.90%,最低为15.28%,僵虫率最高为91.32%,最低为24.80%,LT50为5.39-10.12 d,单头虫体平均产孢量为106-107个.头-1.Ma1291-2、MaWP-01菌株对萧氏松茎象幼虫致病力较强,喷菌7 d后僵虫率分别为89.56%、91.32%,LT50分别为5.49、5.72 d,经不同剂量测定LC50分别为2.5707×104、1.9871×104个.mL-1,这2个菌株对萧氏松茎象生物防治有较大的开发利用价值.     

应用诱捕器监测萧氏松茎象的研究

应用诱捕器进行林间萧氏松茎象成虫的诱捕试验.连续3年的结果表明,诱捕器能准确地监测萧氏松茎象成虫种群动态.萧氏松茎象成虫活动主要在3月～6月,4月～5月是成虫数量出现的高峰期,8月份成虫种群数量急剧下降.结果还显示,开展成虫诱捕后的第3年林间萧氏松茎象种群虫口减退率为70.63%.这说明诱捕技术能有效降低萧氏松茎象种群密度.采用标记释放回捕法研究萧氏松茎象成虫的林间扩散距离.2006～2007年连续2年诱捕器的回捕率分别为56.25%和45.37%.诱捕器的诱捕范围在150 m内,其中以16～60 m诱捕成虫的数量最多,分别占总数的66.67%和46.94%.这说明成虫运动性不是很强,应用诱捕器来监测和捕杀成虫是可行的.     

金龟子绿僵菌致病的分子机理研究进展

金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)是一类重要的昆虫病原真菌,在害虫生物防治中起着重要作用.与化学农药相比,昆虫病原真菌开发的真菌杀虫剂作用时间持久、无环境污染、对非靶标生物安全,但存在致死时间长,杀虫效率低,防效不稳定等缺点,严重阻碍了真菌杀虫剂的广泛应用,为解决这一问题,从分子水平揭示昆虫病原真菌的致病机理尤为重要.从分子水平阐述了金龟子绿僵菌对寄主的识别与粘附、绿僵菌侵染寄主过程中附着胞的形成、绿僵菌对寄主体壁的穿透机制和绿僵菌进入寄主血淋巴后的适应机制.     

云南澜沧县思茅松林虫生真菌多样性研究

【目的】探究云南澜沧县思茅松林虫生真菌多样性组成，为进一步开发、利用和保护思茅松林虫生真菌资源提供理论依据。【方法】 2019—2020年，采用踏查法对云南省澜沧县思茅松林内被虫生真菌感染的罹病虫体进行采集，采用划线法和弹射法对虫生真菌进行分离培养，结合形态学方法对虫生真菌进行种类鉴定。【结果】从物种组成看，云南省澜沧县思茅松林虫生真菌有5属9种，分别为白僵菌属球孢白僵菌和布氏白僵菌、绿僵菌属黄绿绿僵菌和金龟子绿僵菌、棒束孢属细脚棒束孢和环链棒束孢、虫草属高雄山虫草、线虫草属下垂虫草和蜂头虫草，其中球孢白僵菌和细脚棒束孢为优势种，相对多度分别为44.09%和33.33%。从物种多样性分析来看，澜沧县思茅松林下虫生真菌物种多样性丰富，分布均匀，垂直地带分布特征明显。从侵染寄主昆虫种类看，球孢白僵菌的寄主范围最广，共16种，其中鞘翅目昆虫占侵染个体总数的41.46%，叶甲被侵染的数量最多，占29.27%；细脚棒束孢和环链棒束孢的侵染寄主主要为松毛虫和鳞翅目蛹，其中细脚棒束孢的侵染寄主中鳞翅目蛹数量最多，占58.06%；白僵菌、棒束孢和高雄山虫草均可感染松毛虫，白僵菌和绿僵菌均可感染金龟子和膜翅目蚁科。【结论】云南澜沧县思茅松林虫生真菌物种多样性丰富，优势种为球孢白僵菌和细脚棒束孢，在松林害虫生物防治中具有良好潜力，应加强对球孢白僵菌和细脚棒束孢的保护和利用。     

高毒力杀蝗绿僵菌的紫外线诱变选育

以金龟子绿僵菌M105复壮菌株M1053为出发菌株,通过紫外线诱变选育,获得Pr1酶活是出发菌株1.36倍的诱变株M105-52。经测定,诱变株的遗传性能稳定,紫外线抗性和杀蝗毒力均有显著提高。     

绿僵菌mad2敲除株构建及其生物学和诱导植物响应的功能分析

【目的】昆虫病原真菌绿僵菌兼具植物内生性。已知黏附素MAD2是绿僵菌两种黏附蛋白之一,在实现绿僵菌与植物的黏附、定殖中起重要作用,但其作用机理知之甚少。本研究通过构建金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae）mad2敲除突变株（Δmad2）,探究MAD2蛋白对绿僵菌生物学功能的影响。【方法】从NCBI中获取mad2前后基因组DNA序列,设计扩增mad2前后同源臂特异性引物,以绿僵菌基因组DNA为模板,扩增得到前后同源臂基因S1、S2;设计特异性引物Hyg-F/R,以pKH-KO载体为模板,扩增得到带有启动子序列的潮霉素基因hyg;再通过overlap PCR构建mad2的同源敲除盒S1H、S2H;最后利用PEG介导的原生质体转化,获得稳定遗传的mad2敲除株。通过对比敲除株与野生株（WT）的生长特性、黏附作用、杀虫毒力以及诱导花生共生基因转录水平的变化,分析MAD2蛋白的生物学功能。【结果】原生质体转化获得了敲除mad2的同源重组转化子;敲除株与野生株对比分析表明,敲除株的孢子萌发率显著低于野生株,萌发中时间比野生株延长5.47 h;培养12 h和14 h时,敲除株的菌丝长度显著均小于野生株,分别为野生株的77.8%和76.3%;培养12 d的产孢量也比野生株减少33.3%。敲除株对洋葱内表皮的黏附力明显降低,但对蝗虫后翅的黏附性无显著影响。敲除mad2并不影响绿僵菌对家蚕的毒力。敲除株处理花生12 h后,与野生株处理相比,花生共生受体SYMRK、钙信号解码相关基因（CaM、CCaMK和DELLA）、脂质氮素转运相关基因（LTP1、NRT24、ABCC2）的转录水平出现显著下调;而与空白对照相比,mad2缺失后SYMRK转录水平仍有一定的上调,CaM、CCaMK和DELLA的转录水平产生显著抑制,对ABCC2、LTP1、NRT24的转录无明显影响。【结论】金龟子绿僵菌黏附素MAD2影响菌株的孢子萌发、早期菌丝生长、产孢及对植物的黏附力,但对昆虫的黏附和杀虫毒力无影响;在菌株与花生互作早期,MAD2触发了花生共生基因的转录。     

绿僵菌和白僵菌对刚竹毒蛾的毒力比较

3株金龟子绿僵菌(M1、M2、M3)和3株球孢白僵菌(B1、B2、B3)经室内侵染试验证明,皆能侵染2～3 龄刚竹毒蛾幼虫.3个金龟子绿僵菌菌株中以M3对刚竹毒蛾的毒力最强,LC50、LT50分别为:LC50 M1 = 3.12×107个·L-1、LC50 M2 = 7.01×107个·L-1、 LC50 M3= 7.55×106 个·L-1;LT50 M1 = 6.50～11.65 d、LT50 M2 = 7.66～11.53 d、LT50 M3= 5.88～10.50 d.3个球孢白僵菌菌株中以B1对     

金龟子绿僵菌对马尾松林节肢动物群落多样性的影响

在施用金龟子绿僵菌菌剂前后调查了林间节肢动物群落的分布概况,结果表明:林间施菌区的物种总数及群落个体总数均较对照区要略少;垂直分布格局中,灌木层的物种数和多样性指数最大;时序动态分析中,6月份的多样性指数达最大值(1.6683);改善了整个马尾松林节肢动物群落的多样性和稳定性.     

芦苇内生真菌的多样性分析

采用稀释平板法对芦苇(Phragmites australis)根、茎、叶组织的内生真菌进行了分离纯化及形态学鉴定。共分离纯化得到内生真菌194株,分属于木霉属(Trichoderma)、曲霉属(Aspergillus)、链格孢属(Alternaria)、青霉属(Penicillium)、毛霉属(Mucor)、镰孢菌属(Fusarium)和拟青霉属(Paecilomyces)等7个属;其中镰孢属、青霉属和链格孢属为优势菌属,分别占总菌株数的46.39%、26.29%和10.31%。芦苇不同器官中均有内生真菌存在,根中92株、茎中84株、叶中18株;根的优势属为镰孢菌属和链格孢属,叶的为青霉属、茎的为镰孢菌属;根、茎、叶内生真菌多样性指数分别为2.178、1.272和1.019;物种多样性和丰富度指数,从大到小依次是根茎叶,均匀度指数是叶茎根。     

马尾松内生真菌的分离鉴定及多样性

采用组织块法从马尾松(Pinus massoniana)根、茎和叶中共分离出102株不同形态型的内生真菌,经显微形态观察,将其鉴定为11个属,分属于6科6目4纲3门。其中根部12株涉及6个属,茎部23株涉及9个属,叶部67株涉及11个属。毛霉属(Mucor)和木霉属(Trichoderma)为马尾松内生真菌中的优势属。马尾松内生真菌广泛存在于植株的根、茎、叶中,具有丰富的生物多样性;在不同器官上的种群和数量分布存有明显差异性,从叶部分离到的内生真菌数量和涉及属的数目最多,茎部次之,根部最少。     

绿僵菌油悬浮剂防治蝗虫药效试验

绿僵菌是自然环境中存在的专一杀蝗昆虫病原真菌,其有效成分为金龟子绿僵菌孢子,可附着在蝗虫体上萌发,穿透蝗虫体壁感染并杀死各种飞蝗和土蝗,在环境条件适宜时还可在田间蝗虫种群间侵染扩散,起到持续控制的作用。为有效控制蝗虫危害,探索新型生物杀虫剂绿僵菌油悬浮剂对蝗虫防治效果,温泉县开展了大面积示范试验。     

化学杀虫剂对绿僵菌胞外蛋白酶和几丁质酶活性的影响

研究了几种化学杀虫剂对金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)胞外蛋白酶和几丁质酶活性的影响。结果表明,化学杀虫剂对绿僵菌的胞外蛋白酶和几丁质酶活性影响较大,供试的12株金龟子绿僵菌大部分菌株的胞外蛋白酶和几丁质酶活性均明显降低,仅有Ma202、Ma207菌株的胞外蛋白酶和几丁质酶活性略有提高。     

萧氏松茎象幼虫空间格局的地统计学分析

应用地统计学的方法分析了萧氏松茎象幼虫空间格局,在2 m×2 m的样方下分别建立了东→西和南→北2个方向的变异函数理论模型,并应用克立格插值法对其种群密度进行估计.结果表明:球状模型对萧氏松茎象幼虫种群在2个方向上的理论变异函数均有很好的拟合,萧氏松茎象幼虫在东→西方向和南→北方向的变程即相关距离分别为7.654 7 m和7.467 2 m,空间连续性强度分别为0.513 9和0.453 7,表明其空间格局为中等强度的聚集.     

不同来源蝉棒束孢遗传异质性研究

蝉棒束孢是一种昆虫病原真菌,也是传统的中药材料,广泛分布于世界各地.利用ISSR-PCR分子标记技术对采集自不同地理位置的42株蝉棒束孢遗传异质性进行分析,9个引物共得到141个特异性条带,其中多态位点比率为94.7％.从种群水平上来看,宣城敬亭山种群(Pop A)的遗传多样性最高,达到81.6％,安徽石台县种群(PopF)的遗传多样性最低,只有27.0％.其中种群内遗传多样性(Hs)为0.2168,Nei基因分化系数(Gst)为0.276 3,不同地方的种群间的平均基因流(Nm)较大,为1.309 8.研究表明,蝉棒束孢遗传谱系是随机分布的,与地理来源没有明显的相关性,不同地理来源的种群间较高水平的基因交流是种群遗传变异的主要原因.     

绿僵菌属分类的研究进展

绿僵菌属真菌是一类广泛用于生防制剂的昆虫病原真菌,其分类历史长达上百年,分歧比较大.为完善绿僵菌属真菌的分类提供参考,对近年来绿僵菌属系统分类的研究现状以及分类方法进行综述,并总结了现行研究中存在的问题,展望了绿僵菌系统学的研究前景.     

不同绿僵菌菌株在玉米根际的定殖及对玉米生长的影响

【目的】绿僵菌(Metarhizium spp.)是我国及全世界应用较广泛且研究较多的一类昆虫病原真菌,除能寄生杀死靶标昆虫外,部分绿僵菌菌株能够在植物根部定殖并促进宿主植物生长。通过探明不同绿僵菌菌株促进宿主植物生长能力的强弱,为进一步开发兼具杀虫与促进植物生长的新型真菌制剂奠定基础。【方法】以贵州省主要粮食作物玉米为材料,通过检测不同来源绿僵菌菌株在玉米根部的定殖能力和促进植株生长能力,筛选对玉米生长增效的绿僵菌菌株。【结果】M.robertsii(Mr2575,Mr23和Mr1046)、M.anisopliae(Ma808,Ma932和Ma939)、M.brunneum(Mb820,Mb1187和Mb2974)及M.acridum(Mac324)等绿僵菌均能定殖玉米根部,但Mac324与Mb1187定殖能力最弱;除此2个菌株外其余绿僵菌菌株均显著促进宿主玉米植株的营养生长。其中,菌株Mb820、Ma939对玉米幼苗叶片发育增效最高达42.8%,Mr23对玉米茎秆生长增效最高达15.7%。所有测试菌株对玉米种子萌发和幼苗叶片叶绿素合成无影响。【结论】菌株Mr23、Ma939和Mb820促进宿主植株生长的能力较优,可作为候选菌株进一步进行毒力测试从而筛选出具有良好杀虫与植物生长增效于一体的绿僵菌生防菌株。     

四川汉源铅锌矿区植物内生真菌的遗传多样性初步研究

【目的】了解铅锌矿区植物内生真菌的分布特点和遗传多样性。【方法】采用传统组织块培养法对四川汉源铅锌矿区6种常见植物进行内生真菌分离,根据菌落形态特征挑选了27株代表菌株,采用随机扩增多态性DNA(RAPD)指纹图谱分析技术进行了遗传多样性分析,并在RAPD分析的基础上测定了8株代表菌株的rDNA-ITS序列,利用MEGA 4.0构建了供试菌株的系统发育树。【结果】从6种植物的300个组织块中分离获得内生真菌186株,内生真菌的分离频率在0.43⁰.85之间,平均为0.62,所有植物茎内生真菌的分离频率最高,叶部次之,根部最低。RAPD分析表明,在76%的相似性水平处,27株供试菌株被分为8个遗传群。系统发育表明,这8个代表菌株分别分布于镰刀菌属(Fusarium),青霉属(Penicillium),座囊菌纲(Dothideomycetes),小不整球壳属(Plectosphaerella),漆斑菌属(Myrothecium),格孢腔菌属(Pleosporales),链格孢属(Alternaria)和拟盘多毛孢属(Pestalotiopsis)8个系统发育分支。【结论】铅锌矿区植物内生真菌具有一定的多样性,值得进一步研究。     

药用植物青阳参可培养内生菌分离与多样性分析

[目的]从云南民间药用植物青阳参的根、茎和叶中分离内生菌,并且进行初步分类鉴定,对分离出的内生菌多样性进行分析.[方法]利用平板分离法分离内生细菌和真菌,通过菌落形态、革兰染色形态观察和生理生化特征鉴定细菌,根据显微形态观察分类鉴定真菌.[结果]从植物根、茎和叶中共分离获得56株内生菌,包括22株细菌和34株内生真菌.22株内生细菌经鉴定归属于6个属,25株真菌经鉴定归属为5目7科12个属.[结论]青阳参植物内生菌存在多样性.不同部位内生菌的数量、组成与种群分布存有差异.该研究为青阳参资源的开发利用提供了理论依据.