超声波辅助法提取三叶青原花青素工艺的研究

以三叶青块根为原料提取原花青素。通过使用超声波辅助法提取原花青素,以葡萄籽原花青素作为分析标品,利用香草醛-盐酸法绘制原花青素含量标准曲线,并对三叶青原花青素含量进行初步定量分析。单因素提取试验分析结果表明,乙醇体积分数、料液比、浸提时间和浸提温度4因素对三叶青原花青素的提取率影响较大,可作为后续工艺优化的主要控制因素。正交试验分析结果显示了最优提取工艺条件为乙醇体积分数为50%,料液比为1∶20,浸提温度为40℃,浸提时间为20min,此条件下的原花青素提取率可达最高。     

正交设计优化柠檬酸提取蓝莓花青素工艺

以蓝莓为原料,蓝莓花青素含量为指标,在单因素试验基础上,采用正交试验设计法优化柠檬酸提取蓝莓花青素的工艺。验证试验确定了柠檬酸提取蓝莓花青素最佳提取工艺,即柠檬酸浓度为30%,料液比(g/m L)为1∶15,提取温度为50℃,提取时间为90 min。在最优工艺下花青素含量为3.62 mg/g。     

茶树花多糖微波辅助提取工艺

采用微波辅助法从茶树花中提取茶多糖,通过单因素试验、正交试验,以茶多糖提取率为指标,研究茶树花多糖微波辅助提取的最佳工艺。结果表明,茶树花微波辅助提取的最佳工艺参数为:微波强度100%,浸提时间1 h,料液比1 g∶15 m L,提取温度50℃。在此条件下,茶树花多糖提取的最佳工艺参数为:醇沉浓度80%,醇沉温度25℃,醇沉时间6 h,提取率为2.61%。微波提取法能显著缩短提取时间,较大程度地提高茶多糖的提取率。     

澳洲茶树渣多糖、黄酮的提取及含量测定

试验旨在研究并优化澳洲茶树渣多糖、黄酮提取工艺。根据影响澳洲茶树渣多糖、黄酮提取效率的主要因素，通过折线图的分析确定多糖提取最佳工艺条件，运用正交试验确定黄酮最佳提取条件。结果表明：料液比1:10(g/mL)时多糖提取率最高，为7.66%；提取时间5 h时多糖提取率最高，为9.33%；提取温度95℃时多糖提取率最高，为9.37%。乙醇浓度为70%时黄酮提取率最高，为0.458 3%；料液比为1:50(g/mL)时黄酮提取率最高，为0.499 9%；提取温度为70℃时黄酮提取率最高，为0.415 2%；提取时间为3 h时黄酮提取率最高，为0.432 1%；通过正交试验优选出黄酮提取的最佳条件为A1B3C3D3，即乙醇浓度为60%、料液比1:40(g/mL)、提取温度80℃、提取时间2.5 h，提取率为0.531%。     

响应面法优化蓝莓花青素提取工艺研究

为优化蓝莓(Vaccinium Spp)提取工艺,试验选用水浴回流提取方法,研究了乙醇体积分数、提取温度、提取时间和液料比等因素对蓝莓花青素提取的影响,并用Box-Behnken法进行了响应面优化。结果表明,蓝莓花青素水浴回流提取的最优工艺参数为乙醇体积分数59%、提取温度62℃、提取时间62 min、液料比8∶1,在此优化条件下蓝莓花青素的提取量为8.444 7 mg/g,与理论值8.453 1 mg/g相差不大。     

火龙果果皮花青素提取工艺研究

以单因素实验为基础,采用L9(34)正交试验优化火龙果果皮花青素的提取工艺条件。以花青素提取液的吸光度为试验指标,考察不同提取条件对花青素提取率的影响。试验结果得出最优提取条件为以下。提取剂:甲醇:水:乙酸=85:15:0.15溶液,pH值3.5,料液比1:5,温度50℃,提取时间25min,提取次数为2,计算得出提取量为59.9mg/g。     

紫色小白菜中花青素的提取工艺优化

【目的】探讨从紫色小白菜"紫罗兰"叶片中提取花青素的最佳工艺条件。【方法】以紫色小白菜叶片的冻干粉(粒径≤0.45mm)为材料,筛选花青素提取剂(乙酸、甲醇、乙醇、丙酮)、提取剂体积分数(5%,10%,15%,20%,25%,30%,35%,40%,45%,50%,55%)和提取方法(浸提法、超声波法),对影响花青素提取率的提取温度(25,35,45,55,65,75℃)、料(g)液(mL)比(1∶5,1∶10,1∶20,1∶30,1∶40,1∶50)、提取时间(1,5,15,30,45,60min)、提取次数(1,2,3,4次)进行单因素试验,以确定最佳提取工艺。【结果】紫色小白菜花青素的最佳提取剂为乙酸,提取剂最佳体积分数为35%,最佳提取方法是浸提法;最佳提取工艺为:提取温度25℃,料(g)液(mL)比1∶10,提取时间1min,提取2次。在此条件下,第1次提取液中花青素的质量浓度为0.812g/mL,相对提取率为70.39%;第2次提取液中花青素的质量浓度为0.225g/mL,相对提取率为22.22%,2次相对提取率累计为92.61%。【结论】确定了紫色小白菜花青素的最佳提取工艺,此工艺能够在不引入叶绿素干扰的情况下较充分地提取花青素,且花青素的质量浓度较高。     

紫嫣茶中花青素水提工艺及其提取物抗癌活性

以"紫嫣"茶为原料,在单因素试验的基础上,采用L9(33)正交试验,以其中的花青素含量达到最高为目的,优化该茶的最佳水提工艺条件,并在该条件下,以不含花青素成分但儿茶素含量相当的"天青"茶为对照,比较了其水提物对肝癌、乳腺癌、结肠癌细胞的抗癌活性。结果表明,"紫嫣"茶在温度80℃,时间20min,料液比1:45各因素下提取出的水提物中花青素含量最高;正交试验优化后,温度70℃、时间20 min及料液比1∶50浸提,花青素含量为(2.290±0.122)mg·g-1。抗癌活性结果表明,浓度为400μg·m L-1时,"紫嫣"茶对肝癌细胞SMMC-7721的抑制率为(100±0.16)%;在200、300和400μg·m L-1时,对乳腺癌细胞MCF-7和结肠癌细胞SW480的抑制率为78%～93%。与"天青"茶相比较,"紫嫣"茶对3种癌细胞的抑制作用均优于对照茶样,为开发富含花青素的速溶茶特色产品提供参考。     

云南特色豆类中原花青素的提取工艺优化及含量测定

为云南特色豆类资源的深度开发利用提供科学依据,以乙醇为提取剂,采用超声辅助提取法提取云南3种特色豆类的原花青素,研究提取剂浓度、提取时间和料液比等因素对提取效果的影响,并采用香草醛-盐酸法测定原花青素的含量。结果表明:原花青素最佳提取条件为乙醇体积分数60%,提取时间20min,料液比为1∶10。该工艺条件下紫花腰子豆、保山透心绿蚕豆和剑川荷包豆提取的原花青素平均含量分别为2.646mg/g、2.559mg/g和0.896mg/g。     

黑莓籽中原花青素的提取

采用低浓度盐酸-香草醛法测定黑莓籽原花青素含量.通过单因素和正交试验对影响黑莓籽原花青素提取工艺的关键因子及其相互作用进行分析,优化得出的工艺参数为:乙醇浓度70%,料液比1:6,提取温度60℃,提取时间80Min,pH值为4.5.在这种条件下,提取黑莓籽中原花青素得率为4.81%.     

抗真菌活性菌株BP08的鉴定及培养条件和培养基的优化

【目的】对抗真菌活性菌株BP08进行鉴定,并对其最适培养条件和最佳培养基组分进行优化。【方法】从华南农业大学杀虫植物标本园土壤中筛选出1株BP08拮抗菌株,采用形态和生理生化鉴定方法、16S rDNA序列测定和系统发育分析对菌株BP08进行鉴定;以菌体生物量和发酵液拮抗水稻纹枯病菌活性为指标,通过单因素试验,对培养基初始pH值、发酵温度、装液量、接种量等进行优化,在此基础上以发酵液拮抗水稻纹枯病菌活性为指标,对发酵培养基组分进行优化。【结果】筛选的菌株BP08初步鉴定为短小芽孢杆菌;在培养基初始pH值7.0~8.0,发酵温度30℃,装液量100 mL/L,接种量为3%,180 r/min条件下,菌株BP08生长量及拮抗水稻纹枯病菌的活性较高。培养基最佳碳源、氮源、无机盐分别为葡萄糖、牛肉膏、CaCl2。【结论】短小芽孢杆菌菌株BP08在优化培养条件下能够得到大量的抗真菌物质,具有一定的开发利用潜力。     

株高氯·马拉硫磷降解菌的分离鉴定及培养

【目的】分离能够降解高氯·马拉硫磷的菌株,并对其降解特性进行初步研究,以探寻高氯·马拉硫磷无公害降解方法。【方法】利用富集及驯化培养方法,从长期施用并受高氯·马拉硫磷严重污染的土壤中,分离筛选出1株能够高效降解高氯·马拉硫磷的菌株;在形态特征和生理生化鉴定的基础上,对其16S rDNA 序列进行分析,并研究了其对高氯·马拉硫磷的降解特性和最佳摇床培养条件。【结果】获得了1株能以高氯·马拉硫磷作为惟一碳源和氮源生长的菌株,经形态特征观察、生理生化特性鉴定和16S rDNA 序列分析,初步鉴定其属于假单胞菌属;系统发育树显示,该菌株与荧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescens）的相似性最高,为99.79%,因此确定其为荧光假单胞菌。该菌株最佳摇床培养条件为：培养基初始pH值8.0,摇床转速180 r/min,培养时间24 h,培养温度30 ℃。在此培养条件下,培养2 d 的菌株对500 mg/L高氯·马拉硫磷的降解率达到67%。【结论】分离菌株对高氯·马拉硫磷有明显的降解作用,可试用于高氯·马拉硫磷污染土壤的微生物修复。     

Duddingtonia flagrans冻干制剂厚壁孢子优化培养及其杀线虫幼虫剂量研究

【目的】探究捕食线虫性真菌Duddingtonia flagrans冻干制剂厚壁孢子的批量培养方法及其对线虫幼虫的毒杀剂量。【方法】通过玉米粒或大麦粒培养基的单步培养法,以及先在含有0.05%琼脂粉的沙氏葡萄糖肉汤培养基中培养7d后继而转接到玉米粒或大麦粒培养基的双步培养法,以培养3~5周后洗脱的每克固体培养基中的厚壁孢子数为依据,对D.flagrans的最优培养方法进行筛选;然后使用最优培养法培养D.flagrans厚壁孢子并将其冻干后用于体外杀线虫幼虫试验,研究D.flagrans冻干制剂的杀线虫幼虫剂量。【结果】培养基质不同时,D.flagrans的菌落颜色有一定差异,玉米粒培养基中的菌落颜色呈微黄色,而大麦粒培养基中的菌落呈白色;D.flagrans的适宜培养时间为3周。采用单步培养法时,玉米粒培养基培养的厚壁孢子数量为2.4×10~5个/g,大麦粒培养基培养的厚壁孢子数量为3.2×10~5个/g;而采用双步培养法时,玉米粒培养基培养的厚壁孢子数量为3.0×10~5个/g,大麦粒培养基培养的厚壁孢子数量为3.5×10~5个/g。D.flagrans冻干制剂杀线虫幼虫剂量的阈值为每克粪便4×10~5个D.flagrans厚壁孢子,相应对线虫幼虫的杀虫率为95.2%。【结论】采用双步培养法培养厚壁孢子并将其制备成冻干制剂,在D.flagrans生物防治寄生性线虫病方面有较好的应用前景。     

普城沙雷氏菌MM产酶条件优化及对西瓜枯萎病的防治效果

为提高普城沙雷氏菌MM几丁质酶产量，增强拮抗西瓜枯萎病病原菌的能力，通过Plackett-Burman设计和响应面法对其培养基成分进行优化，并测定优化后菌株MM发酵滤液对西瓜种子萌发及西瓜枯萎病防治效果的影响。结果显示，在初始pH 7.0、接种量3%、温度30 ℃、摇床转速180 r/min、培养时间72 h的基础上获得最佳产酶培养基：葡萄糖12.748 g/L，牛肉膏2.086 g/L，酵母粉3.091 g/L；优化后菌株MM几丁质酶活为0.485 U/mL，比优化前提高1.14倍，对西瓜枯萎病病原菌的抑菌率提高6.42%。菌株MM发酵滤液不同稀释倍数对西瓜种子的萌发具有促进作用，当发酵滤液稀释浓度为150倍时对种子萌发的促进作用最为显著，为98.53%。盆栽试验显示，菌株MM发酵滤液处理西瓜植株后，其株高、鲜质量、干质量分别增加78.82%、126.90%、82.00%，对西瓜枯萎病防效高达74.55%。     

响应曲面法优化鹿角盘胶原蛋白酶解提取工艺研究

【目的】采用响应曲面法对鹿角盘胶原蛋白酶解提取工艺进行优化。【方法】以马鹿鹿角盘为原料,胶原蛋白提取率为指标,选取料液比、pH值、加酶量、酶解温度、酶解时间5个因素进行单因素试验,确定各因素的最优提取条件。在单因素试验的基础上,选取pH值、加酶量、酶解温度、酶解时间为影响因素,进行4因素3水平的Box-Behnken试验设计,采用响应曲面法分析4个因素对胶原蛋白提取率的影响。【结果】单因素试验结果表明:料液比1∶20、pH值1.8、加酶量4%、酶解温度37℃、酶解时间为6h时胶原蛋白提取率最高。响应曲面法得到的最佳提取工艺为:pH 1.77、加酶量3.94%、酶解温度36.78℃、酶解时间5.39h,考虑到实际情况,对模型预测得到的马鹿鹿角盘胶原蛋白最优提取工艺进行修正,修正后的工艺为:pH 1.8、加酶量4%、酶解温度37℃、酶解时间5h。在此条件下,马鹿鹿角盘胶原蛋白提取率达到83.32%。4个因素对胶原蛋白提取率影响的重要性顺序为:酶解温度加酶量pH值酶解时间。【结论】建立了酶解法提取鹿角盘胶原蛋白的二次多项式模型,获得了胶原蛋白提取率较高的最佳工艺参数,有效缩短了胶原蛋白的提取时间。     

杜仲AFLP反应体系的建立及优化

【目的】建立并优化适合杜仲的AFLP技术体系,为进一步构建其遗传图谱及开展分子标记辅助育种奠定基础。【方法】对杜仲基因组DNA提取方法、酶切与连接体系、预扩增和选择性扩增程序的影响因素进行分析,并对适合杜仲AFLP分析的引物组合进行筛选。【结果】模板DNA的提取采用改进的CTAB法,酶切模板DNA用量500 ng,酶切时间6 h,连接反应时间6 h,预扩增产物最适稀释倍数30倍。同时筛选出E-AAG+M-CAA,E-AAG+M-CAT,E-AAG+M-CTA,E-AAG+M-CTG,E-ACA+M-CAA,E-ACA+M-CTA,E-ACC+M-CTG共7对适合杜仲AFLP分析的引物组合。【结论】经重复验证,建立的AFLP反应体系适用于杜仲的AFLP分析。     

黑翅土白蚁ISSR-PCR体系的建立与优化

采用单因子梯度优化的方法,对已初步建立的黑翅土白蚁ISSR-PCR的反应体系在dNTPs浓度、Mg²⁺浓度、引物浓度、模板量及TaqDNA聚合酶用量等方面进行了优化。结果表明,适用于黑翅土白蚁的ISSR-PCR反应体系中各因素的最佳浓度分别为：dNTPs 0.2 mmol·L^-1,Mg²⁺ 3.0 mmol·L^-1,引物浓度0.4 μmol·L^-1,模板用量DNA 20 ng,TaqDNA聚合酶2.5 U。     

噬菌蛭弧菌颗粒剂制备条件的优化

试验采用海藻酸钠包埋法对噬菌蛭弧菌(Bdellovibrio bacteriovorus)进行固定化,制备得到噬菌蛭弧菌颗粒。以噬菌蛭弧菌活菌数为考核指标,优化噬菌蛭弧菌固定化条件。通过单因素试验和正交试验,评价了海藻酸钠浓度、氯化钙浓度、蛭弧菌菌液与海藻酸钠胶体溶液的比例(V/V)、玉米油浓度、包埋温度、搅拌时间、搅拌速度和交联时间对噬菌蛭弧菌固定化的影响。结果表明,作为载体配方优化因素的海藻酸钠浓度和玉米油浓度对活菌数具有显著性影响,而氯化钙浓度和蛭弧菌菌液与海藻酸钠胶体溶液的比例(V/V)影响不显著;作为过程优化因素的温度和搅拌速度对活菌数具有显著性影响,而搅拌时间和交联时间影响不显著。在海藻酸钠浓度1.5%、氯化钙浓度6.5%、蛭弧菌菌液与海藻酸钠胶体溶液的比例(V/V)50%、玉米油浓度4.5%、包埋温度47.5℃、搅拌时间40min、搅拌速度450r/min和交联时间36h的条件下,制得的固定化蛭弧菌颗粒活菌数对数值达到7.51。本方法经济、安全、保存效能好,适合在水产养殖中应用。     

金黄节杆菌DR-536分泌新型溶栓酶FA-Ⅰ发酵条件的优化

【目的】对金黄节杆菌DR-536(Arthrobacter aurescens strain DR-536)分泌产生新型溶栓酶FA-Ⅰ的发酵条件进行优化。【方法】通过纤维蛋白平板法,测定不同氮源、碳源、复配氮源、金属离子、NaCl、初始pH、接种量、装液量、发酵时间和培养温度条件下菌株DR-536分泌的溶栓酶产量。【结果】菌株DR-536(A.aurescens strain DR-536)分泌产生溶栓酶FA-Ⅰ的最佳发酵培养基配方为:黄豆粉1.0%,酵母膏1.0%,NaCl2.0%,FeSO40.05%,pH6.0。最佳发酵条件为:接种量4%,装液量20mL/150mL,发酵时间72h,发酵温度30℃。【结论】金黄节杆菌DR-536(A.aurescens strain DR-536)在普通培养条件下能够大量分泌溶栓酶FA-Ⅰ,适于大规模发酵,便于该酶的开发利用。     

埃里格孢菌FEL3产SW发酵培养条件的优化

【目的】对埃里格孢菌(Undifilim oxytropis)FEL3产苦马豆素(SW)的发酵条件进行优化。【方法】在不同碳源(葡萄糖、蔗糖、乳糖、燕麦片、可溶性淀粉)、氮源(豆粉、酵母膏、牛肉膏、蛋白胨、硝酸钠、氯化铵、硫酸铵)、无机盐(MgSO4.7H2O,FeSO4.H2O,ZnSO4.H2O,CaCl2.2H2O,CuSO4.5H2O,KH2PO4)、初始pH(4.5,5.0,5.5,6.0,6.5,7.0,7.5)和接种量(体积分数2%,4%,6%,8%,10%)培养条件下,将埃里格孢菌FEL3接种到液体培养基中,培养15 d后,测定菌丝湿、干质量浓度和菌液中SW浓度,选择最佳培养条件。【结果】当碳源为燕麦片、氮源为豆粉、无机盐为CuSO4.5H2O、培养基初始pH为6.5~7.0、接种量为体积分数8%时,埃里格孢菌FEL3菌丝湿、干质量浓度和菌液中SW浓度均较高。【结论】得到了埃里格孢菌FEL3产SW的最佳培养条件,为用埃里格孢菌FEL3大量生产SW奠定了基础。