促性腺激素促进雄性小鼠体内卵巢移植体卵泡卵母细胞生长发育的研究

 【目的】探索外源促性腺激素对卵巢在雄性受体内生长、卵泡发育和卵母细胞成熟与发育能力的影响。【方法】将1日龄小鼠卵巢移植到7～12周龄雄性小鼠肾囊下,回收前用促性腺激素对受体进行处理或不处理,同龄雌性小鼠用促性腺激素进行处理后作为对照。移植21 d后回收移植卵巢,观测移植体的回收率及生长和卵泡发育;对卵母细胞进行体外成熟、体外受精,观察2-细胞胚和囊胚发育率。【结果】移植21 d后,未处理组移植体回收率为85.4%,与处理组（90.7%）差异不显著（P＞0.05）。未处理组移植体卵泡发育至成熟阶段,回收卵母细胞均处在GV期,平均每枚移植体回收卵母细胞数为（41.4±25.8）枚,2-细胞胚胎发育率为17.5%,未能发育至囊胚;处理组移植体有黄体形成,有的卵泡中有扩展的卵丘卵母细胞复合体,平均回收卵母细胞数为（33.4±20.1）枚,其中MⅡ期卵母细胞为（8.5±7.1）枚,GV期、MⅡ期卵母细胞受精后2-细胞胚胎的发育率分别为33.9％和44.3%,囊胚发育率分别为0.48%和6.3%;试验组间回收卵母细胞数差异不显著（P＞0.05）,2-细胞胚胎发育率、囊胚发育率差异极显著（P＜0.01）。试验组卵母细胞2-细胞胚胎发育率显著低于对照组（P＜0.01）,处理组MⅡ期卵母细胞囊胚发育率与对照组差异不显著（P＞0.05）。【结论】外源促性腺激素对雄性小鼠卵巢移植体具有促进卵泡发育、卵母细胞成熟和胚胎发育的作用,但不增加卵母细胞产量。     

移植时间对小鼠卵巢卵母细胞在雄性体内生长发育的影响

将1日龄小鼠卵巢移植入成年雄鼠肾囊下,分别于移植后21,28和35 d回收移植卵巢,对移植体的大小形态、回收率、回收卵母细胞数及其大小进行评价.结果表明:三时间段回收的移植体均生长增大,有腔卵泡明显,回收率达87.5%～92.9%,差异不显著;35 d移植体平均直径达(2 574.7±785.9) μm,显著大于21 d(2 075.3±329.8) μm和28 d(2 088.9±297.7) μm 移植体(P＜0.01);回收移植体均能分离到卵母细胞,随着移植时间的延长回收卵母细胞数下降,其中21 d移植体回收卵母细胞最多,为(40.5±29.8)个,与35 d移植体回收卵母细胞数(11.1±7.6)个相比差异极显著(P＜0.01),28 d移植体回收卵母细胞数(28.4±21.1)个,与前二者差异均不显著;回收卵母细胞形态正常,达到GV期,平均直径达(74.2±2.1)～(75.0±5.9) μm,组间差异不显著;28 d移植体中回收到MⅡ期卵母细胞.随着移植时间的延长,移植体增大,回收卵母细胞数减少.说明在卵巢异位移植中要获得丰富而又充分生长的卵母细胞应根据卵巢卵泡发育规律选择合理的移植时间.     

卵巢移植对雄性受体鼠精子及生殖能力的影响

将1日龄小鼠卵巢移植入成年受体雄鼠肾囊下,分别于移植后21d(A组)和28d(B组),回收卵巢移植体和卵母细胞,采集附睾尾精子,并对睾丸及精子进行形态学检测,计算畸形精子数.移植受体雄鼠的繁殖能力将依据与雌鼠合笼交配后的窝产活仔记录进行评价.结果表明,卵巢移植体生长并有卵泡发育,A、B组回收卵母细胞数组间无显著差异(P0.05);移植组不同时期卵巢移植体对雄鼠睾丸及精子形态无明显影响,其畸形率与对照组(正常雄鼠)相比差异不显著(P0.05);移植受体雄鼠与母鼠配种的窝产活仔数与对照组无显著差异(P0.05).初步证实在卵巢异性移植构建雌、雄性腺同体的生理环境中,卵巢移植体对受体雄鼠精子及生殖能力无明显影响.     

獭兔体外成熟卵母细胞孤雌激活及体细胞核移植

[目的]建立利用獭兔体外成熟卵母细胞进行孤雌激活及体细胞核移植的技术体系,促进獭兔现代育种技术的发展。[方法]以獭兔屠宰场废弃卵巢为试验材料,利用体外成熟、孤雌激活、体细胞核移植等方法,研究了獭兔体外成熟卵母细胞支持胚胎发育的能力。[结果]1)直径大于1 mm卵泡内的卵母细胞孤雌激活后的发育能力显著强于0.7~1.0 mm卵泡内的卵母细胞。2)卵母细胞体外培养(IVC)15~21 h后孤雌激活,卵裂率显著高于IVC 12 h组。3)2.5μmol·L-1Ionomycin处理5 min,再用2 mmol·L-16-二甲基氨基嘌呤(6-DMAP)与5μg·m L-1亚胺环己酮(CHX)联合处理1 h,孤雌激活效果最好。4)IVC 14 h后,78%的卵母细胞极体与核偏移角度小于10°;IVC 18 h后,34.6%的极体偏离核的角度大于45°。5)体外成熟的獭兔卵母细胞可以较好支持体细胞核移植的重构胚,核质作用期间采用MG132处理,降低了重构胚的囊胚率。[结论]从大于1 mm卵泡内回收卵母细胞并IVC 18 h后,采用2.5μmol·L-1Ionomycin处理5 min,再用2 mmol·L-16-DMAP与5μg·m L-1CHX联合处理1 h,是獭兔孤雌激活和体细胞核移植的最佳方案。     

小鼠胚胎卵巢体外培养中卵细胞的生长及其数量的调节

利用胚胎卵巢体外长期培养技术研究了小鼠卵巢中卵细胞的生长发育状况。材料取自B6D2雌小鼠F1代胚胎，服龄为11．5日和13．5日。用Orcein染色法鉴别雌雄。分离出的卵巢培养12～14d。5d后换一次培养液，以后每2d换1次。培养8d后，13．5日龄胚胎卵巢中卵细胞已形成与体内相似的有规则的分布。在卵巢皮质部有大量的卵母细胞和少量体细胞，而在髓质部只有少量的卵母细胞和大量的体细胞。大量的未生长的小卵母细胞（直径＜25μm）紧密地分布在皮质的外侧，而生长印母细胞则主要分布在皮质的内侧和髓质。11．5日龄胚胎卵巢经过10～12d培养，没有形成上述分布规律，所有观察到的卵细胞都是生长中的卵母细胞。卵细胞数量也显著低于13．5日龄胚胎的卵巢（34．4±6．53比566．7±49．5）。用IGF－I和FSH处理11．5日龄胚胎卵巢可显著增加其卵细胞的数量（分别为88对55，P＜0．01和140对20，P＜0．005）。较老龄的胚胎卵巢组织对于11．5日龄胚胎卵巢卵细胞数量均有促进作用，其中以16．5日龄胚胎卵巢的作用较强（165对65，P＜0.005）。实验结果表明小鼠胚胎发育到达11．5～13．5日龄时期对于卵巢来说是获得形成卵巢内卵细胞分布规律能力的重要时期。11．0日龄胚胎卵巢缺乏某些因子的作用，因而不能在体外正常发育。     

青山羊胚胎期卵巢组织发生的研究

50日龄的卵巢皮质与髓质的分化不明显,为原始皮质和原始髓质,卵原细胞处于繁殖期。65日龄出现初级卵母细胞团,有的初级卵母细胞处于减数分裂的核网期。80日龄,皮质与髓质分区明显并出现原始卵泡。初级卵泡、次级卵泡和三级卵泡最早形成时间分别是在95日龄、110日龄和140日龄的皮质深层。胚胎发育早期(50～65日龄),卵母细胞的分化生长快于退化。65日龄后,卵母细胞的退化大于分化生长。125日龄后达到动态平衡。     

天府黑兔卵巢中卵泡发育的组织学研究

为了探索天府黑兔卵巢中不同发育阶段卵泡的组织定量结构,采用连续石蜡切片技术,对4只天府黑兔母兔的卵巢进行组织切片,在光学显微镜下观察,并利用组织形态测量软件测量不同发育阶段卵泡的直径、卵母细胞的直径和透明带厚度。结果表明:原始卵泡的直径为(40.23±0.27)μm,其卵母细胞的直径为(23.86±2.23)μm;初级卵泡的直径为(56.26±6.72)μm,其卵母细胞直径为(31.03±1.33)μm;次级卵泡的直径为(181.32±17.12)μm,其卵母细胞直径为(81.35±3.14)μm;三级卵泡的直径为(750.69±32.69)μm,其卵母细胞直径为(106.21±4.34)μm。卵泡直径(x)和卵母细胞直径(y)在发育过程中的回归关系是y=2.297x0.643(r2=0.88)。     

猪腔前卵泡卵母细胞体外成熟培养初探

【研究目的】为了进一步挖掘猪的遗传潜力,为体外受精、动物克隆和转基因等胚胎生物技术研究提供大量优质卵源。【方法】以极体排出情况为判断标准,采用一步法和两步法成熟培养猪腔前卵泡卵母细胞,来考察猪腔前卵泡卵母细胞最佳成熟方式。【结果】采用任何一种方法卵母细胞经体外成熟后都没有达到MⅡ。然而,腔前卵泡体外培养5d后,分离出的卵丘卵母细胞复合体再培养12d,卵母细胞平均直径达到102.68μm(102.68±12.21),接近正常成熟卵母细胞的体积,为卵母细胞的成熟创造了条件。【结论】用两步法培养猪的腔前卵泡,其卵母细胞能够达到接近正常成熟卵母细胞的体积,说明采用两步法培养猪腔前卵泡卵母细胞是可行的。     

家兔原始卵泡卵母细胞体外发育的培养体系研究

本研究根据家兔卵巢的发育特征初步探讨了家兔卵巢卵母细胞体外发育的培养体系。采集新生或30日龄家兔卵巢在不同培养液中培养,并分析家兔卵母细胞的体外发生与成熟情况与体内正常发育的兔卵巢卵母细胞之间的差异,来筛选和优化家兔卵巢卵母细胞的体外培养体系。本试验从高糖DMEM、FSH浓度、BSA/血清等3个方面来筛选较好的培养条件,结果表明:①不添加高糖DMEM的M199培养液与添加的相比,卵巢上卵母细胞数量要多,但随着培养时间的延长,组织块上卵母细胞的形态会变得不清楚;②家兔卵巢组织在FSH浓度为50和100m IU/m l、添加血清的DMEM/F12培养液中生长较好,体外培养24d后,卵母细胞数量多,直径增加到65μm;③与添加BSA的培养液相比,添加血清的培养液中的卵巢卵母细胞生长状态较好,体外培养28d后,卵母细胞数量多,并且直径可达65μm。     

不同直径卵泡对绵羊卵母细胞体外发育能力的影响

以屠宰场绵羊卵巢为材料,采用抽吸法收集小卵泡、中卵泡、大卵泡卵母细胞,研究不同卵泡直径对卵母细胞回收效果、比例分布以及对卵母细胞直径、谷胱甘肽(GSH)含量和体外发育能力的影响。结果表明,3种卵泡卵母细胞比例分布差异极显著(P0.01);3种卵泡卵母细胞的回收率无显著差异(P0.05),但中、大卵泡卵母细胞可用率极显著高于小卵泡卵母细胞(P0.01);小卵泡卵母细胞的直径极显著小于中、大卵泡卵母细胞(P0.01);中、大卵泡卵母细胞成熟培养24 h后GSH含量显著高于小卵泡卵母细胞(P0.05);经孤雌激活体外培养后,中、大卵泡卵母细胞的成熟率分别极显著(P0.01)、显著(P0.05)高于小卵泡卵母细胞,中、大卵泡卵母细胞囊胚率极显著高于小卵泡卵母细胞(P0.01);中卵泡卵母细胞囊胚细胞总数显著高于小卵泡卵母细胞(P0.05),但与大卵泡卵母细胞差异不显著(P0.05)。因此,直径≥2 mm的卵泡的卵母细胞适合体外培养和体外胚胎的生产。     

虹鳟卵巢发育的组织学研究

采用石蜡切片技术,对虹鳟的卵巢发育进行组织学观察,研究各期卵巢的形态、特征及变化.结果表明:虹鳟卵巢的发育可分为6个时期,相对应的卵母细胞也分为6个时相;4月龄卵巢处于第Ⅰ期,以第Ⅰ时相卵母细胞为主,细胞核占细胞大部分;8～13月龄卵巢处于第Ⅱ期,第Ⅱ时相卵母细胞质嗜碱性,滤泡细胞、外周环和丝状环出现;15～26月龄卵...     

表皮生长因子对胎鼠卵巢卵泡体外发育和类固醇激素分泌的影响

表皮生长因子（EGF）是参与卵巢功能调节的一个重要肽类因子，关于EGF对小鼠胚胎期卵巢卵泡发育和类固醇激素发育的 今未见报道。本研究以单个卵巢的放泡数、生长卵泡数和5个最大卵母 平均直径为卵泡发育优劣的衡量指标，利用我们早期研究建立的无血清培养体系研究了EGF对胎鼠卵巢卵泡发育和类固醇激素分泌的作用。结果发现：①EGF处理组胎鼠卵巢总卵泡数、生长卵九和卵巢内5个最大卵母细胞平均直径从培养第7天起即显著高于ITS对照组直至培养结束；②EGF在培养后期显著促进胎鼠卵巢分泌睾酮，但对雌二醇的基础分泌无影响；③EGF处理组胎鼠卵巢在培养过程的后期引起贴壁的卵巢边缘脱离培养板底壁发生卷边现象，丧失卵母细胞皮持－髓质生长模式。结果提示：EGF在胎鼠卵巢原始卵泡生长起始中起重要作用， 同时EGF促进胎鼠卵巢小腔前卵泡／卵母细胞进一步生长、发育和体外存活；EGF促卵泡发作用与雌二醇的作用无关。     

Myc-induced T cell leukemia in transgenic zebrafish

The zebrafish is an attractive model organism for studying cancer development because of its genetic accessibility. Here we describe the induction of clonally derived T cell acute lymphoblastic leukemia in transgenic zebrafish expressing mouse c-myc under control of the zebrafish Rag2 promoter. Visualization of leukemic cells expressing a chimeric transgene encoding Myc fused to green fluorescent protein (GFP) revealed that leukemias arose in the thymus, spread locally into gill arches and retro-orbital soft tissue, and then disseminated into skeletal muscle and abdominal organs. Leukemic cells homed back to the thymus in irradiated fish transplanted with GFP-labeled leukemic lymphoblasts. This transgenic model provides a platform for drug screens and for genetic screens aimed at identifying mutations that suppress or enhance c-myc- induced carcinogenesis.     

Histological Study on the Polyovular Folliclular Development of Chinese Prematural Lubei White Goat

The present study was conducted to investigate the histological characteristics of Polyovular follicles in Chinese Lubei white female goats with age 2-5 months. The results suggested that the healthy antral follicles with twin-oocyte could be observed. There were many multi-oocyte phenomena in primordial and primary follicles with a proportion of nearly 75% in primordial follicles. Primordial follicle was in the outer of cortex in ovaries and most of them remained active. The nest of multi-nuclear primordial follicle was developing into primordial follicle with 1 to 3 nuclei.     

阉割对公猪生长性能和胴体品质的影响

【目的】探讨阉割对生长期公猪的生长、胴体性状和肌肉品质的影响。【方法】选取36头全同胞雄性仔猪,根据配对原则分成18对,每对随机抽出1头在5周龄时阉割,另1头作对照。5、12、21和30周龄时空腹称重,采集血液测定血清睾酮含量;21、30周龄屠宰测定胴体性状,采集背最长肌样品,用近红外扫描和气相色谱-质谱分析方法测定肌内脂肪含量和脂肪酸组成。【结果】12、21和30周龄时,未去势公猪的血清睾酮含量极显著高于去势公猪(P0.01);21周龄时,去势公猪的体重高于未去势公猪(P0.05),但在30周龄时,未去势公猪体重极显著高于去势公猪(P0.01),21和30周龄时,去势公猪平均膘厚、板油重和脂肪率极显著高于未去势公猪,平均皮厚和瘦肉率极显著低于未去势公猪(P0.01);30周龄时,未去势公猪胴体重、前蹄重和眼肌面积显著地高于去势公猪(P0.05);21周龄时去势公猪肌内脂肪含量高于未去势公猪(P0.05),背最长肌肌肉部分饱和脂肪酸(SFA)和单不饱和脂肪酸(MUFA)极显著高于未去势公猪(P0.01)、但多不饱和脂肪酸(PUFA)极显著低于未去势公猪(P0.01),公猪血清睾酮含量和肌内脂肪含量之间无显著相关性(P0.05),但与C16:0、C18:1、MUFA及C18:0和PUFA存在极显著负相关和正相关(P0.01)。【结论】公猪阉割后,血清睾酮水平降低,从而影响公猪的生长和胴体性状以及肌肉脂肪酸组成。     

天津白母猪生殖器官发育和生殖激素变化规律

试验选用不同年龄天津白母猪 32头,测定了其性发育过程中生殖器官发育和血清生殖激素含量变化规律。结果表明:天津白母猪初情期前发育过程可以划分为 0～ 2月龄、2～ 5月龄和静止期三个阶段。0～ 2月龄母猪卵巢和输卵管生长缓慢,卵巢上只有腔前卵泡,但子宫发育较快;出生后血清LH和E2 浓度迅速下降并保持较低水平,FSH相对稳定。2～ 5月龄段所有生殖器官都快速生长,尤以卵巢最为突出;3月龄血清LH、FSH和E2浓度均出现一个上升波,同时有腔卵泡开始突出至卵巢表面。在静止期,卵巢和输卵管发育明显减慢,而子宫则仍然较快发育;血清中三种激素浓度保持较低水平。6月龄时三种激素浓度再次上升,6 75月龄时P4 浓度显著升高且个体差异很大。据此综合推断出天津白母猪大致在 190 2 0 0d之间达到初情期     

新西兰白兔中Myh6基因的表达及与肌纤维性状的相关性

【目的】分析Myh6基因在新西兰白兔Oryctolagus cuniculus肌肉中的表达规律及与肌纤维特性的相关性,探究Myh6基因在肌纤维发育过程中的作用。【方法】利用冰冻切片技术测量了2、4、6、8、10、12周龄新西兰白兔背腿肌中不同类型肌纤维的密度、面积、长径和短径等性状,采用qRT-PCR测量了Myh6基因在不同周龄新西兰白兔背腿肌中的表达量,分析了上述性状与Myh6基因表达的相关性。【结果】2~8周龄新西兰白兔各类型肌纤维的密度逐渐变小,面积、长径和短径则逐渐变大(白肌纤维短径除外,仅在2~6周龄有变大趋势)。Myh6基因在4周龄表达量最高。Myh6基因表达量与公兔背部红肌纤维的面积呈极显著负相关(P0.01),与公兔腿部红肌纤维的密度呈极显著正相关(P0.01)。【结论】Myh6基因表达与肌纤维类型和肌纤维的生长发育密切相关。     

苏博美利奴羊胎儿皮肤毛囊结构及形态发育研究

【目的】研究苏博美利奴羊毛囊的组织结构与形态发育过程,为解析细毛羊毛囊发育的分子调控机制奠定组织学基础。【方法】采用石蜡切片技术分析胎龄为第65、85、105和135天的苏博美利奴羊胎儿头部、颈侧、颈上缘、鬐甲、背部、体侧、肩甲、腹部、荐部及股部等10个不同部位皮肤的组织学特性。【结果】苏博美利奴羊毛囊结构同其它动物一样,由毛球、连接组织鞘、外根鞘、内根鞘和毛干等几部分组成。在胎龄65d时初级毛囊(primary follicles, PF)已经发生形成毛芽,毛芽延长,继续向真皮层深入,形成柱状结构,通过由大量真皮细胞在末端聚集,形成帽子结构,各部位表皮均形成完整的结构。胎龄85d时毛囊上部形成一个膨大部,在毛乳头上方形成锥形结构,毛球基本形成,毛乳头长度明显大于宽度;在初级毛囊基底部可见次级毛囊（secondary follicles ,SF）的囊泡结构,并形成皮脂腺原始细胞。在胎龄105d时次级毛囊大量形成,伴随着初级毛囊毛芽伸长,次级毛囊毛芽向真皮层深入,毛乳头直径逐渐增大,皮脂腺开始形成;原始次级毛囊颈部隆突部开始再分化出再分化次级毛囊(secondary-derived follicles ,SD),并可见汗腺,毛管发育完整;已形成完整的毛囊群结构,主要为三元毛囊群,每个毛囊群由1—3个初级毛囊和围绕其周围的几个次级毛囊组成。胎龄135d时大量形成再分化次级毛囊,形成成熟的汗腺,大部分初级毛囊和部分次级毛囊发育成熟,毛囊形成角质化毛干并穿出体表。【结论】苏博美利奴羊胚胎皮肤初级毛囊约50—55d开始形成;胎龄65—75d是初级毛囊形成的重要时期;胎龄80—85d是次级毛囊形成期,此时期,初级毛囊大量形成;胎龄105—135d是次级毛囊大量再分化,再分化次级毛囊形成及发育的关键时期。为了解苏博美利奴羊毛囊的结构及毛囊从发生到发育成熟的形态变化过程,为相关领域研究提供参考依据。     

Study on Development of Northeast China Fine-fleece Sheep Fetal Follicles

Research on development of fetal ovary was traced to late 70 s. Histological study on fetal horse ovarian germinal epithelium was conducted[1], followed research on germcell proliferation was carried out[2]. In the late 80s,development of 37-118 dfetalrhesus ovaries were studied through continuous ultrathin sec-tion [3]. Histological study on late fetal rhesus ovaries were conducted [4]. It was believed that fetal ovaries had ability to biosynthesis estrogen and response to gonadotrophin after…