芜菁花叶病毒外壳蛋白基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

本文报道采用反转录酶一聚合酶链式反应，体外扩增芜菁花叶病毒外壳蛋白基因及其克隆，并在大肠杆菌中获得表达的结果。从杭州市郊区感病的油菜上分离到一致病力极强的芜菁花叶病毒分离物，提纯后，经５０ｎｇ／ｍｌ蛋白酶Ｋ和０．５％ＳＤＳ处理，苯酚／氯仿和氯仿抽提两次，酒精沉淀，获得了纯化的病毒ＲＮＡ，该ＲＮＡ与ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）１３退火后，在ＡＭＶ反转录酶的作用下合成了单链ｃＤＮＡ，然后加入用以扩增ＴｕＭＶ－Ｃ     

芜菁花叶病毒外壳蛋白基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

本文报道采用反转录酶—聚合酶链式反应，体外扩增芜菁花叶病毒（ＴｕＭＶ）外壳蛋白基因及其克隆，并在大肠杆菌中获得表达的结果；从抗州市郊区感病的油菜上分离到一株致病力极强的芜菁花叶病毒分离物，提纯后，经５０ｎｇ／ｍＬ蛋白酶Ｋ和０．５％ＳＤＳ处理，苯酚／氯仿和氯仿抽提两次，酒精沉淀，获得了纯化的病毒ＲＮＡ，该ＲＮＡ与ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）＿（１５）退火后，在ＡＭＶ反转录酶的作用下合成了单链ｃＤＮＡ，然后加入用以扩增ＴｕＭＶ－ＣＰ基因的上下游引物，３５个循环后，得到了一条长约０．８５ｋｂ的片段，将该片段克隆到ｐＵＣ１８质粒的ＳａｌⅠ限制性酶切位点，分析了限制性酶切图谱，分析表明该片段含有ＥｃｏＲⅠ和ＸｂａⅠ以及引物设计时带人的ＭｃｏⅠ三个酶切位点，该片段克隆到大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）原核表达载体ｐＫＫ２３３－２质粒的ＮｃｏⅠ和ＨｉｎｄⅡ位点后，经ＩＰＴＧ诱导，以该病毒的抗血清为第一抗体，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测该基因的表达产物，结果表明该基因的表达产物为ＴｕＭＶ－ＣＰ蛋白，因而认为所获得的扩增片段确为芜菁花叶病毒外壳蛋白基因。     

大鼠肝酷蛋白激酶Ⅱ的分离纯化和鉴定

依次采用ＤＥＡＥ－纤维素、肝素－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ，酷蛋白－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ和羟基磷灰石层析将大鼠酷蛋白激酶Ⅱ纯化了２４８６倍，回收率９．５％。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ表明ＣＫⅡ由三个不同亚基组成，分子量分别是３７，３５和２６ＫＤ。该激酶利用酷蛋白为底物，Ｃａ＾２＋，Ｃａ＾２＋－磷脂酰丝氨酸的ｃＡＭＰ对ＣＫⅡ的活性无影响，而肝素对该酶的活性有抑制作用。     

酶联免疫印迹对弓形虫抗原组分的研究

用酶联免疫印迹对弓形虫抗原组分分析的结果显示：经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ后的弓形虫抗原组分分别为１．７８ＫＤ，２１．３ＫＤ，３０ＫＤ，３６．５ＫＤ，３９．１ＫＤ和５０．２ＫＤ。电转印至硝酸纤维膜上的各抗原组分，用ＥＬＩＢ分析，弓形虫感染宿主的血清能与抗原组分蛋白起反应，其中３９．１ＫＤ和２１．３ＫＤ分子量组分蛋白带色显色最深，提示这二种组分蛋白是弓形虫ＩｇＧ抗体识别的主要组分蛋白，而对照血清与各组分蛋白为     

一串红花叶病及其病原研究

１９８９－１９９２年间对杭州等地一串红花叶病的发生及其病原进行了系统研究，从病株上分离得到的１７个病毒分离物，经生物学和血清学反应测定均符合黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）的特点，病毒分离物Ｍ－２２不能经由桃蚜传播使黄苗榆等供试寄主发病。用０．５ｍｏｌ／Ｌ磷酸钾卤缓冲液对Ｍ－２２进行提纯，提纯病毒经醋酸铀负染，测定其粒大子小为３０．２ｎｍ．ＳＤＳ－聚丙燃酰胺凝胶电泳测定Ｍ－２２的外壳蛋白分子量约为２８ｋＤ，     

侵染绿花椰菜的黄瓜花叶病毒（CMV）研究

从杭州市郊菜园表现严重花叶、矮化症状的绿花椰菜病株上获得一病毒分离物Ｃ－９３１。汁液摩擦接种６科２１种植物，Ｃ－９３１可侵染其中的６科１９种；体外抗性测定表明Ｃ－９３１的稀释限点（ＤＥＰ）为１０￣（－２），致死温度（ＴＩＰ）为５５－６０℃，２５℃体外存活期（ＬＩＶ）为４ｄ；提纯病毒粒体球形，平均直径２８ｎｍ；在琼脂双扩散反应中Ｃ－９３１能与ＣＭＶ抗血清呈阳性反应；ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得其衣壳蛋白亚基分子量为２９ｋＤ；用ＣＦ－１１纤维素柱提取受侵植物组织中ｄｓＲＮＡ，电泳鉴定表明共有５个核酸组分，长度（ｋｂ）分别为３．３，３．０，２．２，０．９和０．３５．根据上述性状，Ｃ９３１被鉴定为黄瓜花叶病毒，且该分离物含卫星ＲＮＡ。     

侵染姜的烟草花叶病毒的鉴定

从莱芜市莱城区大田表现严重花叶的姜上分离到一种病毒,接种到１３ 科４３ 种鉴别寄主上,能侵染５ 科２５ 种植物。该病毒分离物的钝化温度为９５ ～９８ ℃,稀释限点为１０ － ７ ～１０ － ８ ,体外存活期为１２８ｄ 以上。提纯病毒呈典型的核蛋白吸收,最大吸收峰为２５８ｎｍ ,最小吸收峰在２４３ｎｍ , Ａ２６０／ Ａ２８０ ＝ １ ．３２ 。病毒外壳蛋白分子量为１７ ．３ Ｋ Ｄ,杆状粒体长度为３００ｎｍ ,该分离物与烟草花叶病毒的抗血清有明显的阳性反应。根据这些特性,该病毒分离物属于烟草花叶病毒属的烟草花叶病毒。     

水稻簇矮病毒：植物呼肠孤病毒属的一个新成员

水稻簇矮病毒（ＲＢＳＶ）是由黑尾叶蝉（Ｎｅｐｈｏｔｅｔｉｘｃｉｎｃｔｉｃｅｐｓ）和二点黑尾叶蝉（Ｎ．ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ）传播的持久性病毒，但不经卵传递；病害表现有奇特的多蘖症或节枝症，且其病株汁液与水稻矮缩病毒（ＲＤＶ）抗血清不起免疫反应．采用差速离心和蔗糖密度梯度离心，可获得ＲＢＳＶ提纯制剂，提纯制剂经紫外扫描，呈典型的核蛋白吸收曲线，Ａ２６０／２８０＝１．６４．在电镜下观察提纯病毒，可见大量比较均一的球状粒体，直径为６０．０ｎｍ．病毒粒体有双层衣壳，蛋白亚基清晰可辨．通过免疫扩散和免疫电镜试验，病毒粒体与ＲＢＳＶ抗血清有明显的血清学反应，而这种抗血清与ＲＤＶ、水稻瘤矮病毒（ＲＧＤＶ）不起反应．提纯ＲＢＳＶ制剂以苯酚－甲基苯酚－ＳＤＳ方法提取核酸．将其注射到昆虫介体内，具有侵染性．核酸制品有典型的核酸紫外吸收曲线，Ａ２６０／２８０＝２．０２．根据核酸在不同离子强度下对ＲＮａｓｅ的稳定性等的测定，表明其核酸属双链ＲＮＡ．根据紫外吸收测定，ＲＮＡ在ＲＢＳＶ粒体中的含量为１７．５％．用聚丙烯酰胺凝胶电泳测定，其ＲＮＡ的总分子质量为１６．６６×１０６．各组分相对分子质量分别为２．７０×１０６、２．３０×１０６、１?     

红苋R104种子谷蛋白亚基组成及二硫键连接蛋白研究

应用还原和非还原单向ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及二者结合的双向电泳技术，研究了红苋Ｒ１０４种子谷蛋白的亚基组成。谷蛋白由多种亚基组成，高分子量二硫键连接蛋白占其多数，经还原裂解成Ａ（５４ＫＤ）、Ｂ（４０ＫＤ，３９ＫＤ）、Ｃ（３３ＫＤ，３１ＫＤ）、Ｄ（２２ＫＤ，２０ＫＤ，１８ＫＤ，）和Ｅ（１５ＫＤ）５组主要单肽链单元，提出了二硫键连接蛋白的组成模式，并发现低分子量谷蛋白亚基存在肽内二硫键     

干旱对小麦幼芽蛋白质组分及等电点的影响

通过水平薄层变性聚丙烯酰胺弟前夕民聚集（ＩＥＦ）、十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）和双向电泳（ＥＦ×ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）研究表明，干旱引起小麦幼芽蛋白质组分及含量变化，主要在分子量为２０－４８ｋＤ、等电点（ｐＩ）为５．３４－５．６５，并且干旱诱导小麦幼芽产生４１．５ｋＤ蛋白亚基，ｐＩ蛋白亚基，ｐＩ为５．６５；分子量为３６．２和１５．８ｋＤ的两个蛋白亚基含量明显增加。     

大鼠肝酪蛋白激酶Ⅱ的分离纯化和鉴定

依次采用ＤＥＡＥ－纤维素、肝素－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ，酪蛋白－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ和羟基磷灰石层析将大鼠酪蛋白激酶Ⅱ纯化了２４８６倍，回收率９．５％。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ表明ＣＫⅡ由三个不同亚基组成，分子量分别是３７，３５和２６ＫＤ。该激酶利用酪蛋白为底物，Ｃａ~（２＋），Ｃａ~（２＋）－磷脂酰丝氨酸和ｃＡＭＰ对ＣＫⅡ的活性无影响，而肝素对该酶的活性有抑制作用。     

红苋R104种子谷蛋白亚基组成及二硫键连接蛋白研究

应用还原和非还原单向ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及二者结合的双向电泳技术，研究了红苋Ｒ１０４种子谷蛋白的亚基组成。谷蛋白由多种亚基组成。高分子量二硫键连接蛋白占其多数，经还原裂解成Ａ（５４ＫＤ）、Ｂ（４０ＫＤ，３９ＫＤ）、Ｃ（３３ＫＤ，３１ＫＤ）、Ｄ（２２ＫＤ，２０ＫＤ，１８ＫＤ）和（Ｅ（１５ＫＤ）５组主要单肽链单元，提出了二硫键连接蛋白的组成模式，并发现低分子量谷蛋白亚基存在肽内二硫键。     

弓形虫抗原SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳初步分析

用十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对弓形虫抗原进行了初步分析。结果显示：多肽蛋白带分布在５０．２ＫＤ以下区域，组分蛋白带有６条，分子量分别为１７．８ＫＤ、２１．３ＫＤ、３０．０ＫＤ、３６．５ＫＤ、３９．１ＫＤ和５０．２ＫＤ。     

干旱对小麦幼芽蛋白质组分及等电点的影响

通过水平薄层变性聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦（ＩＥＦ）、十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）和双向电泳（ＩＥＦ×ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）研究表明，干旱引起小麦幼芽蛋白质组分及含量变化，主要在分子量为２０～４８ｋＤ、等电点（ｐＩ）为５．３４～５．６５，并且干旱诱导小麦幼芽产生４１．５ｋＤ蛋白亚基，ｐＩ为５．６５；分子量为３６．２（ｐＩ５．３５）和１５．８ｋＤ（ｐＩ５．７０）的两个蛋白亚基含量明显增加     

通过根癌农杆菌介导法获得新疆甜瓜抗病优质新品系

用新疆甜瓜无菌苗子叶块,通过根癌农杆菌介导法,将黄瓜花叶病毒外壳蛋白ｃＤＮＡ基因导入“新红心脆”等６个品种（系）,经卡那霉素筛选,获得大量Ｋｍ抗性植株,其中部分Ｋｍ抗性植株经Ｌｕｉｓ法检测,表达了胭脂碱合成酶活性。进一步经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ,ＤＯＴ－Ｅｌｉｓａ,ＰＣＲ特异扩增。Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔ等方法检测,结果证明了Ｋｍ抗性植株基因组中整合了ＣＭＶ－ＣＰ基因,长度为１ｋｂ,并能有效表达,表达产     

鸡传染性支气管炎病毒（IBV）结构蛋白的研究

应用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ对病毒的结构蛋白研究结果显示：Ｔ珠病毒与Ｍ４１和Ｈ５２的结构蛋白存在一定的相似性,均具有分子量为９０ＫＤ、８４ＫＤ、６７ＫＤ和４３ＫＤ的蛋白带,但Ｔ株病毒还具有一定分子量为６１ＫＤ的条带,而且它相对含量很高,肾型传支上海地区野毒株与Ｔ株相似,也主要具有这条６１ＫＤ的条带,应用兔抗ＩＢＶ－Ｔ血清转印,显示６４ＫＤ结构蛋白均具有较高的免疫反应怀,推测在肾型传支中该结构蛋白与诱导保护     

应用酚－SDS法提纯新城疫病毒基因组RNA

应用酚－ＳＤＳ法提纯新城疫病毒基因组ＲＮＡ吴艳涛，刘秀梵，张如宽，刘伟忠（江苏农学院动物医学系，扬州２２５００９）新城疫病毒（ＮＤＶ）属副粘病毒科，为有囊膜的单链、负极性ＲＮＡ病毒，基因组ＲＮＡ全长１５ｋｂ。开展ＮＤＶ分子生物学研究，首先需要提取完整...     

传播植物病毒的真菌

传播植物病毒的真菌浙江省农业科学院阮义理传播植物病毒的真菌称介体真菌。由真菌传播的植物病毒约３０种，属于马铃薯Ｙ病毒科，大麦黄花叶病毒属的有大麦黄花叶病毒（ＢａＹＭＶ）、大麦和性花叶病毒（ＢａＭＭＶ）、小麦黄花叶病毒（ＷＹＭＶ）或小麦梭条斑花叶病毒（...     

产蛋下降综合症H_（91）病毒基因组DNA的酶切分析

从发病鸡群中分离的产蛋下降综合症病毒（ＥＤＳ＿（－７６））Ｈ＿（９１）株接种鹅胚收获的尿囊液，用氯化铯密度梯度离心等方法纯化了ＥＤＳ病毒。电镜下观察到病毒无囊膜，大小为７０～８５ｎｍ。从纯化的病毒悬液提取的核酸，经琼脂糖凝胶电泳只出现一条分子量为３４ｋｂ、背景清晰的核酸带。用６种限制性内切酶对其基因组ＤＮＡ进行了酶切分析，各种酶消化分别产生４，４，９，９，１１和３条片段。将此结果与ＥＤＳ标准株ＡＶ＿（－１２７）株基因组ＤＮＡ由相同的内切酶消化的结果进行比较发现，由ＨｉｎｄⅢ和ＳｍａⅠ消化２个病毒基因组ＤＮＡ产生的片段数及大小有些差异。     

甘蔗高粱花叶病毒的分离提纯及SDS-PAGE分析

甘蔗(Saccharum)作为世界上最重要的糖料和能源作物之一,甘蔗花叶病为甘蔗生产带来很大负面影响。基于此,在海南省儋州两院附近采集具有甘蔗花叶病典型症状的甘蔗叶片,利用超速离心法分离甘蔗花叶病病原粗提纯,置于电镜下观察,发现病原为单一组分,未发现其他病毒病原。为进一步验证其外壳蛋白分子量大小,对病毒粗提纯液进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,结果表明:其外壳蛋白分子量约为36 kd,与多数报道的高粱花叶病毒(Sorghum mosaic virus,Sr MV)外壳蛋白分子量接近,初步鉴定儋州两院地区甘蔗花叶病病原为高梁花叶病毒,为建立快速的检测体系及预防措施等提供依据。