均一化cDNA文库的研究进展及其应用（摘要）

均一化cDNA文库是可获得表达序列标签和发现基因的一个新的有效平台。它降低在文库中高拷贝存在的cDNA的丰度,提高了发现随机序列和稀有基因的效率。本文综述了构建均一化cDNA文库的原理,步骤及其在植物和动物中的应用,以期可促进均一化cDNA文库的发展和它在发现新基因中的应用。     

苹果砧木珠眉海棠盐胁迫应答基因的微列阵研究

以盐胁迫下苹果的耐盐砧木珠眉海棠为材料,用SMARTTM方法构建了cDNA文库。随机挑取5 000个cDNA克隆制备芯片,得到差异表达的基因388个,其中249个表达上调、139个表达下调。分析其中变化量在8倍以上的42个基因,并对部分基因进行RT-PCR验证,结果与芯片杂交结果一致。根据功能把这些基因分为5类:光合作用相关基因、物质转运相关基因、基础代谢相关基因、逆境相关基因以及其他基因。其中直接参与盐应答的基因占34%,包括上游调控蛋白、合成植体内小分子渗透调节物的限速酶、胁迫产生的活性氧清除剂、直接调节离子运输和储存的蛋白等。用此cDNA微列阵体系,将基因芯片技术与cDNA文库相结合,成为全面研究盐胁迫下基因表达的有效途径。为进一步研究盐应答基因功能及盐胁迫机制提供参考。     

cDNA文库构建策略及其分析研究进展

 cDNA文库构建和筛选是基因克隆的重要方法之一，它是目前发现新基因和研 究基因功能的基本工具。从cDNA文库中可以筛选到目的基因，并直接用于该基因的表达。经典 cDNA文库存在克隆的片段短等缺点，而全长cDNA文库则能提供完整的mRNA信息，从而克隆cDNA全长；对文库进行均一化处理即均一化cDNA文库，可以增加克隆低丰度mRNA的机会；差减cDNA文库在研究生物体某一时期基因差异表达上具有重要的意义；改进的固相cDNA很大程度上提高了建库的效率和质量。本文以阐述基本原理为主，介绍几种近年来常用的cDNA构建的方法及其优缺点。     

cDNA文库构建及其在植物抗性研究中的应用

cDNA文库是指生物不同生长发育时期特定组织或器官所转录的全部mRNA经反转录形成的cDNA与栽体连接后形成的克隆的集合,cDNA文库是在基因组水平上研究某一生物特定器官、组织和发育时期基因表达的前提和基础.笔者就近年来cDNA文库的构建及其在植物抗性研究中的应用作一综述.     

橡胶树胶乳均一化全长cDNA文库的构建与EST测序分析

 【目的】构建橡胶树胶乳均一化全长cDNA文库,降低胶乳中存在的高丰度表达基因的拷贝数,提高胶乳表达基因的分离鉴定和EST测序分析效率。【方法】以橡胶树无性系热研7-33-97的胶乳为材料,将胶乳全长cDNA与Gateway供体载体pDONR222重组,构建了橡胶树胶乳的非剪切型全长cDNA原始文库,经检测原始文库的滴度为6.0×106 cfu/mL,平均插入片段长度大于1.5 kb,重组率约为100%,全长cDNA比例约为76%;利用基因组DNA饱和杂交技术对胶乳原始cDNA文库进行均一化处理,构建橡胶树胶乳的均一化全长cDNA文库。【结果】胶乳均一化全长cDNA文库的总库容量(总CFU)为1.87×105,重组率大于95%。定量RT-PCR检测表明,橡胶树胶乳2个高丰度表达基因,即小橡胶粒子蛋白(SRPP)和橡胶延长因子(REF)基因,在均一化cDNA文库中的表达量均下降了约1 000倍。【结论】构建了均一化效果良好的橡胶树胶乳全长cDNA文库,并对文库中随机的12 000个克隆进行了测序,获得高质量的有效EST(expressed sequence tag)序列为11 951条,经拼接共获得单一基因(unigene)为3 394个,其中包括片段重叠群(contig)2 061个和单一EST序列(singlet)1 333个。此cDNA文库将可用于橡胶树功能基因组研究、新基因筛选、高通量EST测序以及橡胶树胶乳cDNA芯片的制备。     

天山雪莲叶片全长cDNA文库的构建

以天山雪莲(Saussurea involucrataKar.et Kir)幼嫩叶片为研究材料,利用CreatorTMSMARTTMcD-NA Library Construction技术构建了天山雪莲叶片全长cDNA文库,原始文库滴度达3.93×105cfu/mL,文库插入片段多在1 000 bp左右。随机挑取10个克隆进行测序,通过生物信息学初步分析表明,100%为全长cDNA,大部分可以在GenBank中找到同源序列。天山雪莲叶片全长cDNA文库的构建为雪莲基因资源保存和植物抗寒机理的研究奠定了基础。     

转导芦苇总DNA耐盐变异水稻SSH文库的构建及部分基因特异表达

通过花粉管通道转导芦苇总DNA到水稻辽星1号中,以获得的2个耐盐变异水稻品系H1、H2为材料,对6张叶的水稻幼苗进行0.3%浓度的Na Cl溶液诱导处理24 h。提取经Na Cl溶液诱导后的叶片mRNA,经反转录成cDNA,经过酶解后加接头和2次杂交,构建差异表达的抑制消减(SSH)cDNA文库。以Na Cl溶液诱导后的耐盐变异水稻H1、H2的cDNA为检测子(tester),以水稻辽星1号cDNA为驱动子(driver)。所构建的文库容量分别达到了240、281个,表明所构建的文库质量良好。对文库中克隆进行测序分析,在NCBI水稻数据库中进行BLAST比对,获得了15个没有同源性的EST序列,其中9个EST序列功能与植物的抗盐性有关,通过RT-PCR技术进一步验证了芦苇总DNA转导到水稻中,使水稻获得了抗盐性。     

Pedhn基因的克隆及表达分析

为深入研究胡杨的抗盐分子机制,并获得与之相关的抗逆基因,采用SMART技术构建了胡杨盐胁迫处理cDNA文库。经随机测序,得到一个编号为SSL061的EST序列,与欧美杨的脱水素基因有较高相似性,通过PCR快速扩增文库的方法获得了胡杨脱水素基因（Pedhn）。分析表明,该cDNA的长度为813 bp,拥有681 bp 的开放读码框,共编码227个氨基酸。该序列包括两个重复的富含赖氨酸的K片段和由7个连续的丝氨酸残基组成的S片段,但是缺乏Y片段。RT-PCR结果表明,胡杨在未受胁迫的情况下脱水素基因的转录水平较低,而随着盐胁迫浓度的升高,脱水素基因的转录水平总体呈上升趋势。      

利用抑制消减杂交技术筛选猪蛔虫性别差异表达基因

 为了筛选线虫的性别特异性基因，为线虫乃至寄生虫的性别控制提供新的工具，本研究选择猪蛔虫（Ascaris suum）为模型，分别提取雌性和雄性成虫的mRNA后，采用Clontech公司的PCR-selectTM试剂盒进行反转录合成cDNA并进行抑制消减杂交（SSH），构建猪蛔虫雌、雄虫性别差异表达的消减cDNA文库，并采用地高辛（DIG）标记的cDNA探针进行Southern 杂交检验所构建文库的消减效率。结果表明，雌、雄虫性别差异表达的消减cDNA文库均具有很强的性别特异性。随机从各库中各抽取25个克隆进行测序及在线BLAST分析，发现在25个雄虫ESTs中有20个已知ESTs，5个新的ESTs；25个雌虫ESTs中有11个已知ESTs，还有8个可能为新基因。猪蛔虫性别差异表达的消减cDNA文库的成功构建，为进一步研究性别特异基因的功能奠定了基础。     

枯萎病菌诱导的节瓜抑制差减cDNA文库的构建

以抗枯萎病节瓜品种杂交20号为材料,利用抑制差减杂交(Suppression subtractive hybridization,SSH)技术,构建了枯萎菌(Fusarium oxysporum f.sp.beniacasa)诱导的节瓜SSH-cDNA文库。文库质量检测表明,差减杂交效率较高,质量较好。得到正向差减文库的滴度为3.64×105 CFU/mL,反向差减文库滴度为6.80×105 CFU/mL;正向和反向差减文库的重组率均大于90%,插入片段在400～800bp之间。     

数字图书馆初探

通过对数字图书馆及其特征、类型的介绍,力求澄清对数字图书馆的模糊认识。通过对数字图书馆建设目标和任务的理解,阐述了数字图书馆建设要以特色建设为主要内容。从数字图书馆发展进程看我国数字图书馆建设的差距,提出了数字图书馆建设应该解决的关键问题。     

关于构建和谐高校图书馆的思考

构建和谐高校图书馆具有重要现实意义,现在高校图书馆存在一些制约和谐发展的因素,建议高校领导重视图书馆资源建设,图书馆要加强专业队伍建设,密切图书馆与学校教师、各专业的联系,促进各分校图书馆馆际和谐,促进馆领导与馆员、馆员与馆员、馆员与读者之间的和谐,努力构建和谐高校图书馆。     

对哈尔滨市6个区级公共图书馆发展状况的思考与分析

通过对哈尔滨市6个区级公共图书馆发展现状的调查分析,发现各区馆间存在发展不均衡现象和存在的问题,建议根据哈市各区馆的实际情况,应积极开展以总分馆制为依托,以文化共享工程为契机,努力增加图书馆硬件设施及自动化、网络化设备的建设,全面推进区级公共图书馆的快速发展。     

福州地区小菜蛾全长cDNA文库构建与分析

采用ZAP Express cDNA Gigapack Ⅲ Gold Cloning Kit试剂盒,构建了小菜蛾(Plutella xylostella)的全长cDNA文库.利用TRIzol试剂盒提取小菜蛾成虫总mRNA,通过Oligo试剂将mRNA反转录成cDNA,再以第一链cDNA产物为模板合成第二链cDNA,该cDNA产物经分级分离和体外包装,即获得小菜蛾cDNA原始文库,其滴度为1.5×106pfu.mL-1.扩增后的cDNA文库的滴度为1.4×1010pfu.mL-1.取适量扩增文库稀释并铺平板,挑取20-25个独立噬菌斑,用M13±通用引物PCR扩增后,测得文库的重组率大于95%,插入cDNA片段的长度平均为1.25 kb.该文库的构建,可为小菜蛾抗药性基因的相关研究提供一个平台.     

数字图书馆建设的实践与思考

数字图书馆作为一种拥有丰富的数字化信息资源、多种形态的媒体内容、能方便地为读者所利用的知识管理体系,已经从理论探索进入实际建设与实际应用阶段.中国高校图书馆在经历了传统图书馆、现代图书馆之后,正在向着数字图书馆发展.图书馆建设要应对这种新的变化与转型,并要不失时机地抓住机遇迎接挑战.分析北京农学院数字图书馆建设的现实需求与客观条件,总结数字图书馆建设的阶段性成果,并就数字图书馆建设过程中的若干问题进行了探讨.     

AI时代医学高校图书馆应用虚拟现实技术探析

随着计算机三维处理能力的增长和数字图书馆的不断发展,虚拟现实技术逐渐向图书馆领域延伸,虚拟现实图书馆成为智慧图书馆的一种新型智能服务形态。通过概述国内外高校图书馆研究虚拟现实技术的情况,从馆藏资源建设、知识管理、文化遗产保存及读者服务方面探索医学高校图书馆提供虚拟现实服务的作用,指出发展的难点,并探索解决方法。     

广纳读者、免费服务是图书馆提高利用率进而促进和谐社会建设的切入点

目前我国图书馆的设置跟国际标准相比，还存在相当大的差距，平均每45万多人才拥有一座图书馆，但图书馆文献资源利用率低，资源浪费严重已成为不争的事实。图书馆只有从广纳读者、免费服务两方面入手．进行管理思想和管理模式的改革，才能不断提高利用率进而为构建和谐社会贡献自己的力量。     

“大思政”格局下高校图书馆服务育人对策研究——以北京农业职业学院为例

“大思政”育人格局是当前高校思想政治教育工作的发展要求，全面构建高校“大思政”育人格局并充分发挥各部门的育人功能，已经成为高校培养时代新人的重要课题。为解决高校图书馆在服务育人过程中存在的问题，深入分析高校图书馆服务育人的综合要素和作用发挥现状，探讨研究图书馆在党建促馆建、学科服务育人、构建立体式全场域服务平台、创新服务机制和个性化服务等方面的实现路径，以期更好地发挥高校图书馆服务育人的功能作用。