云南省楚雄州部分猪场衣原体血清流行病学调查

[目的]了解云南省楚雄州猪衣原体病的流行情况。[方法]从楚雄州部分规模化猪场及散养户采集1257份猪血清,采用间接血凝试验进行猪衣原体感染的血清流行病学调查。[结果]共检出阳性样品232份,阳性率为18.4%。在规模猪场的956份样品中,阳性样品193份,阳性率为20.2%;在母猪样品132份,阳性样品38份,阳性率为28.8%;在育肥猪血清824份中,阳性样品155份,阳性率为18.8%。在散养户301份样品中,阳性样品39份,阳性率为13%;母猪样品53份,共检出11份阳性样品,阳性率20.8%;育肥猪248份中,阳性样品28份,阳性率11.3%。[结论]猪衣原体病在云南省楚雄州呈一定的流行趋势。     

饲料及饲料原料中沙门氏菌污染状况研究

为检测不同饲料及饲料原料中沙门氏菌污染情况,对饲料品质管理提供依据。试验利用PCR技术对动物源性饲料产品、植物源性饲料产品、微生态制剂以及酶制剂等共计207批样品进行了沙门氏菌的检测。结果表明,沙门氏菌阳性菌株8株,其中动物源性饲料检出率为11.4%,微生态制剂原料检出率为11.1%,微生态制剂检出率为10%,酶制剂检出率为8.3%,配合饲料检出率为1.25%,植物源性饲料和饲料粉尘检出率为0。沙门氏菌在饲料产品及饲料原料中均有一定的存在,应采取相应措施提高饲料品质。     

黏附与脱落性大肠杆菌PCR快速检测方法的建立

利用PCR方法扩增黏附与脱落性大肠杆菌(AEEC)的紧密素eaeA基因,并对不同来源的样本以增菌培养、选择性培养和PCR方法进行分离鉴定,旨在建立AEEC的PCR快速检测方法体系.结果表明,PCR方法可检测出肠出血性大肠杆菌(EHEC)和肠致病性大肠杆菌(EPEC),而其他类型的大肠杆菌和非大肠杆菌均未出现特异性的片段,该PCR体系能检测出12pg的模板DNA.同时基于EHEC和EPEC的eaeA、bfpA、stxl、stx24个基因建立了多重PCR检测方法,可以快速区分出EHEC、典型EPEC和非典型EPEC.本PCR法对于AEEC的鉴定具有特异性强、灵敏度高、速度快和易操作的优点,在实践中具有很大的推广价值.     

内蒙古部分地区致犊牛腹泻产肠毒素大肠杆菌的调查研究

为了阐明内蒙古部分地区致犊牛腹泻产肠毒素大肠杆菌的流行情况,该研究以内蒙古自治区乌兰察布和鄂尔多斯地区部分牛场腹泻病例为研究对象,采集患病犊牛样本,采用PCR方法检测产肠毒素大肠杆菌（Enterotoxigenic E. coli,ETEC）的ST和LT基因进行ETEC菌株鉴定。研究结果显示,乌兰察布地区ETEC检测总阳性率为11.71%,鄂尔多斯地区ETEC总阳性率为9.44%,其中0~2月龄阳性率为21.49%,2~6月龄阳性率为5%,6~18月龄阳性率为0。由此可知,乌兰察布地区ETEC检测总阳性率高于鄂尔多斯地区,两个地区ETEC的流行情况和感染情况均以0~2月龄犊牛为主,为进一步开展犊牛腹泻疾病的防控提供了依据。     

闽江流域福州过境段大肠杆菌毒素基因的定性定量分析与季节性变化

分别于不同季节在闽江流域福州过境段的洪山桥和解放大桥断面采集水样,进行大肠杆菌的分离、鉴定,用多元PCR方法对不同季节分离的大肠杆菌毒素基因的时空分布进行定性与定量分析。从分离的2 015株粪大肠杆菌中发现840株潜在的致病性大肠杆菌,分别属于肠出血性大肠杆菌（EHEC）、肠聚集性大肠杆菌（EAEC）、肠致病性大肠杆菌（EPEC）和肠产毒性大肠杆菌（ETEC）;检出的10种毒素基因中,以扩散性黏附素基因（aidA-1）、热稳定性肠毒素基因（astA）和耐药性因子（sepA）为最多;细菌总量、大肠杆菌总数和致病性大肠杆菌总数在冬季较少,春季较多,夏秋季节达到全年数量的高峰;潜在的致病性大肠杆菌毒素基因的种类和数量也是在冬季最少,春夏季上升,秋季最多。     

北疆地区部分肉牛养殖场饲料中潜在风险微生物的检测分析

[目的]北疆地区是新疆肉牛养殖业的主产区,大多采用暖季放牧冷季舍饲的养殖模式.了解北疆地区肉牛养殖业饲料安全状况.[方法]选择新疆伊犁和塔城地区3个集约化程度较高的肉牛养殖场,采集101份饲料样品,对大肠菌群、沙门氏菌和霉菌进行检测.按照GB/T18869-2002(饲料中大肠菌群的测定)、GB/T13091-2002(饲料中沙门氏菌的检测方法)、GB/T13092-2006(饲料中霉菌总数的测定)所规定的方法进行检测.[结果]在所检测的101份饲料样品中,66份显示为大肠菌群阳性,检出率为65.3;,其中,精饲料、打瓜藤中大肠菌群最高,达到2.4 × 105/100 g,麦草、草垛、秸秆中大肠菌群含量都较低,数量低于2.3×102/100g;在所有饲料样品中均未检出沙门氏菌;在所检测的101份饲料样品中100份出现霉菌阳性,检出率为99.01;,其中麦秆霉菌数量最高,达到8.9×104 cfu/mL.不同肉牛场、不同饲料和饲料原料大肠菌群和霉菌污染变化不同.[结论]所检测的101份饲料样品中均不同程度受到大肠菌群和霉菌的污染.为肉牛饲料微生物污染风险评估提供了基础数据,为肉牛饲料微生物污染限量标准制定奠定了基础.     

天津地区猪饲料中霉菌毒素污染调查

为了解天津及周边地区养猪场饲料中霉菌毒素含量及污染情况,笔者于2016年9月—2017年8月从天津市9个区县及周边的河北部分地区采集265份猪饲料及饲料原料,利用直接竞争酶联免疫吸附试验法分别对样品中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、T-2毒素、呕吐毒素含量进行测定。结果显示:猪饲料及饲料原料中霉菌毒素检出率为23.77%～96.98%,且96.98%的猪饲料及饲料原料受到2种及以上霉菌毒素污染。4种霉菌毒素中,呕吐毒素污染最为严重,超标率为29.81%;其次为玉米赤霉烯酮,超标率为2.26%;黄曲霉毒素B1污染较轻,超标率仅1.13%;样品中未检出T-2毒素超标。     

饲料中三聚氰胺的GC-MS法测定及分析

应用GC-MS法测定饲料中的三聚氰胺。饲料样品中的三聚氰胺经提取、净化、HPLC检测、衍生化、采用CG-MS方法测定,外标法定量。对420批饲料进行检测,用试剂盒筛选后,HPLC法检测出疑似阳性26批,用CG-MS方法定性排除17批,试验表明,HPLC法三聚氰胺检测阳性率为6.1%,GC-MS法确证后阳性率为2.1%,此次GC-MS法回收率为92%。     

百色市动物饲料中沙门氏菌分离鉴定检测报告

随机抽查百色市2009—2012年468份饲料进行沙门氏菌的检测,通过预增菌、选择性增菌和分离培养鉴定,检出阳性样品7份,阳性率1.5%。其中猪浓缩饲料样品检出5份,鸡配合饲料样品检出1份,自配大鸡混合饲料检出1份。检测发现猪浓缩饲料检出的几率较高,鸭、鱼、兔配合料未检出阳性样品,饲料中沙门氏菌污染主要来源于添加的动物蛋白质原料,添加动物蛋白质原料比例越高,检出的几率越大。     

规模化猪场仔猪腹泻4种病原的感染情况调查

采用PCR和RT-PCR技术,对福建省16个规模化猪场的仔猪腹泻样本进行致病性大肠杆菌(EPEC)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪轮状病毒(RDV)的感染情况调查。结果表明:15个猪场EPEC检测为阴性,1个猪场同时检测到大肠杆菌K88的201 bp条带和仔猪水肿病大肠杆菌F18ab菌毛蛋白的510 bp条带,EPEC的阳性率为6.25%。1个猪场检测到TGEV的497 bp特有条带,TGEV的阳性率为6.25%。3个猪场检测到PEDV的854 bp特有条带,PEDV的阳性率为18.75%。3个猪场检测到RDV的342 bp特有条带,RDV的阳性率为18.75%。1个猪场同时感染EPEC和PEDV 2种病原,其余的15个猪场均为单一病原感染。表明福建省规模化猪场的仔猪腹泻仍然存在EPEC、TGEV、PEDV、RDV病原感染,呈现散发流行,与以往的报道相比阳性率明显下降。     

遵义市规模养猪场大肠杆菌的耐药性检测

[目的]掌握遵义市规模养猪场大肠杆菌的耐药情况,为贵州省动物源性细菌监测提供数据。[方法]采集遵义市规模养猪场猪肛门拭子和总排污池新鲜粪便(或污水棉拭子)样品335份,分离出阳性大肠杆菌。采用微量肉汤稀释法对分离的大肠杆菌进行耐药性检测。[结果]分离并鉴定到334株阳性大肠杆菌,分离的大肠杆菌对7种抗菌药物的耐药率依次为:磺胺间甲氧嘧啶钠土霉素恩诺沙星头孢噻呋氟苯尼考环丙沙星庆大霉素,多重耐药性主要集中在4耐、5耐、6耐和7耐。[结论]遵义市规模养猪场大肠杆菌的耐药性严重及多重耐药性正在恶化,且猪场总排污池大肠杆菌对各药物的耐药性皆高于猪肛门拭子。     

产志贺毒素大肠杆菌stx2基因荧光定量PCR检测方法的建立及应用(英文)

[目的]建立检测产志贺毒素性大肠杆菌(STEC)stx2基因荧光定量PCR方法。[方法]根据GenBank中已发表的STEC stx2基因序列,在保守区域设计PCR引物和探针,构建重组质粒作为阳性模板,优化反应条件,建立荧光定量PCR方法。[结果]利用优化的荧光定量PCR反应体系建立了标准曲线。表明起始模板浓度与Ct值之间线性关系好,相关系数R2均达0.995以上;此方法特异性好,对10种非STEC肠道病菌无特异性扩增;敏感性高,初始模板的检出下限达1.0×102拷贝数/μl;重复性好,批内、指间变异系数均分别小于1%和5%。[结论]该研究成功建立了检测STEC stx2基因的荧光定量PCR方法,为快速检测样品中STEC提供了技术手段。     

饲料中沙门氏菌的分离鉴定与Dot-ELISA检测

[目的]建立检测饲料中沙门氏菌的Dot-ELISA法。[方法]采用Dot-ELISA法,对随机采集自西宁市某饲料厂的100份成品饲料、85份鱼粉和50份精蛋白进行了沙门氏菌检测。通过生化试验和血清学试验对饲料样品中的细菌进行了进一步的鉴定。[结果]通过Dot-ELISA检测,成品饲料、鱼粉和精蛋白中的沙门氏菌阳性率分别为38.00%、62.35%和60.00%。Dot-ELISA法与常规分离鉴定技术的符合率为82.23%。[结论]Dot-ELISA法具有较好的特异性和敏感性,与常规分离技术具有较高的符合率,可以用于饲料中沙门氏菌的检测。     

云南省昆明地区种鸡J亚群禽白血病血清学调查

[目的]了解云南省昆明地区种鸡场J亚群禽白血病的感染状况。[方法]从云南省昆明市疑似感染禽白血病的某种鸡场采集644份泄殖腔(公鸡)拭子和460份蛋清(母鸡)样品,采用ELISA法对种鸡J亚群禽白血病进行抗原检测。[结果]在检测的460份蛋清样品中,172份抗原呈阳性,阳性率为37.39%;在检测的644份泄殖腔拭子中,520份抗原呈阳性,阳性率为80.75%。A养殖场共检测644份样品,总阳性率为63.66%,其中蛋清样品的阳性率为39.13%,泄殖腔样品的阳性率为82.07%。B养殖场共检测460份样品,总阳性率为61.30%,其中蛋清样品的阳性率为34.78%,泄殖腔样品的阳性率为78.99%。此次检测结果表明云南省昆明地区种鸡群已严重感染J亚群禽白血病。[结论]该研究可为种鸡J亚群禽白血病的防治提供理论依据。     

茯砖茶汤不同极性溶剂萃取物对常见致泻菌的抑制效果

通过茯砖茶汤不同极性溶剂萃取部分对常见致泻菌的体外抑菌活性研究,筛选出茯砖茶抑菌活性部分。茯砖茶汤依次用三氯甲烷、乙酸乙酯及正丁醇溶剂萃取后制备样品,用药敏纸片法测定各部分样品对大肠杆菌、沙门氏杆菌、溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、志贺氏菌6种常见致泻菌的抑菌效果。结果表明茯砖茶汤各部分样品对这6种致泻菌的抑制效果有明显的不同,三氯甲烷萃取部分及水层部分对致泻菌抑制作用不明显,乙酸乙酯及正丁醇萃取部分对6种致泻菌均有较强的抑菌活性,且乙酸乙酯部分的抑菌效果更好。     

洱海流域畜禽饲料·粪便·土壤中四环素类抗生素残留分析

[目的]研究洱海流域畜禽粪便、饲料和土壤中的四环素类抗生素残留状况。[方法]以云南省洱海流域养殖业链为研究对象,采样分析了11个饲料样品、10个粪便样品、21个土壤样品中土霉素、四环素、金霉素残留状况。[结果]饲料中四环素、土霉素、金霉素的检出率分别为100%、100%、50%,其中猪饲料中土霉素、金霉素含量最高,其次是鸡饲料,奶牛饲料添加的抗生素相对较低;粪样中土霉素检出率为100%,四环素检出率为80%,金霉素检出率为90%,其中鸡粪中残留的抗生素最高;土壤抗生素残留较低,金霉素的检出率为66.6%,四环素、土霉素均未检出。[结论]洱海流域养殖业残留抗生素对环境和人体健康的风险较低。     

鹦鹉热衣原体real-time quantitative PCR检测方法的研究

[目的]为鹦鹉热衣原体的快速、准确检测奠定基础。[方法]根据鹦鹉热衣原体主要外膜蛋白(MOMP)基因序列设计一对特异性引物,以SYBR GreenⅠ为荧光染料,建立了鹦鹉热衣原体Real-time quantitative PCR检测方法。根据检测结果,计算样品的批内和批间变异系数(CV)。[结果]以提取的鹦鹉热衣原体DNA为模板,用引物Cps-1和Cps-2进行PCR扩增,得到长100 bp的片段。扩增产物回收纯化后,连接到pGEM-T Easy载体上并转化到大肠杆菌DH5α,菌落PCR检测筛选阳性克隆,培养后提取质粒DNA。当模板浓度范围为1.78×102~1.78×108拷贝/μl时,标准曲线相关系数达0.998;批内和批间变异系数(CV%)分别为1.30%~4.59%和5.72%~9.87%。[结论]为鹦鹉热衣原体的感染、流行调查等提供了重要的技术参考。     

水产饲料中沙门氏菌的检测与分析

对2008-2009年福建省抽查的62份水产饲料及30份送检的饲料原料进行沙门氏菌的检测,结果有5份样品检出沙门氏菌(Salmonella Typhimurium),其中有2份是鱼粉,鳗鱼饲料、鳖饲料和鱼蛋白肽各1份,阳性检出率为5.43%.     

猪源ETEC的黏附素基因克隆与原核表达

[目的]克服传统方法制备黏附素抗原的缺点。[方法]应用PCR对猪源性产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)的黏附素F4、F5和F6的质粒中扩增出faeG、fanC和fasG基因片段,克隆测序并与pET 32a(+)构建重组表达载体。将重组表达载体转化E.coli表达菌株BL21(DE3),并分析其免疫原性。[结果]重组表达载体经IPTG诱导获得高效表达。血凝抑制试验表明,鼠抗血清能抑制标准的ETEC强毒株凝集红细胞,抑制效价在1∶128以上。这说明克隆表达的猪源ETEC黏附素蛋白具有良好的免疫原性。[结论]该研究可为进一步开发抗体制剂奠定基础。     

泻痢康防治仔猪黄白痢试验

仔猪黄、白痢是由病原性大肠杆菌引起的新生仔猪腹泻病,由于大肠杆菌易对抗菌药产生耐药性而致疗效不佳.我们根据仔猪黄、白痢的病性和特征,经中医辨证施治,研制了一个中药方剂--泻痢康.为了观察其防治效果,在发生仔猪黄、白痢较严重的长治市优种猪场,添加泻痢康于母猪饲料中和灌服发病仔猪,对仔猪黄、白痢进行了预防和治疗试验,现报告如下.