山东丹参细胞悬浮培养体系及生长模型的建立

【目的】建立和了解山东丹参疏松愈伤组织和悬浮细胞生长规律。【方法】以叶片为外植体研究疏松愈伤组织诱导增重以及细胞悬浮培养体系,并对疏松愈伤组织和悬浮细胞进行生长模型的拟合。【结果】疏松愈伤组织最佳诱导和增殖培养基为MS+2,4-D 0.5mg/L+KT 1.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L+酸水解酪蛋白1g/L,细胞悬浮培养基为MS+2,4-D 0.5mg/L+KT 1.5mg/L+6-BA 3.0mg/L+NAA 1.0mg/L+蔗糖30g/L+酸水解酪蛋白1g/L。【结论】山东丹参疏松愈伤组织和悬浮细胞生长曲线为"S"型,Richards方程模型能够很好地描述疏松愈伤组织和悬浮细胞生长曲线变化。     

荆半夏胚性愈伤组织的诱导

以竹叶型荆半夏叶柄为外植体,研究不同培养基、激素配比、不同叶柄处理方式对愈伤组织诱导的影响。结果表明,单独添加2,4-D或6-BA均能诱导半夏叶柄愈伤组织,但诱导率较低,愈伤组织质量相对较差。叶柄不同部位对愈伤组织诱导有显著影响,叶柄下段适合愈伤组织诱导,黄化处理能提高叶柄愈伤组织诱导的效果。正交试验结果表明,4因素对半夏愈伤组织诱导影响从大到小为2,4-D浓度叶柄位置6-BA浓度蔗糖浓度。从诱导率和愈伤组织质量考虑,取半夏叶柄下段接种于培养基MS+2.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-BA+60 g/L蔗糖上进行培养,效果较好。     

烟草悬浮细胞系的构建

烟草既是一种重要的经济作物,也可作为良好的试验材料。以BY-2烟草为材料,进行悬浮细胞培养体系的构建。结果表明:不同激素和浓度配比处理对烟草愈伤组织诱导具有较大影响,愈伤组织最佳诱导配方为MS+3.0 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L 6-BA+30 g/L蔗糖+15 g/L琼脂;当接种量为3 g/150 mL、转速为140 r/min、蔗糖浓度为3%,且配方为MS+3.0 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L 6-BA时,悬浮细胞增殖最快,分散性最好,生长呈现"S"形规律,继代周期为8 d。     

半夏叶柄愈伤组织诱导与分化最适培养基筛选

以半夏(Pinellia ternata(Thunb.)Breit)叶柄为外植体,研究不同培养基配方对诱导脱分化、愈伤组织增殖及分化的影响。结果表明,适合半夏叶柄诱导脱分化的最佳培养基是MS+1.0 mg/L 2,4-D+0.2 mg/L 6-BA;最适愈伤组织增殖培养基是MS+1.0 mg/L 2,4-D+0.2 mg/L 6-BA;最适分化培养基是MS+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA。     

半夏疏松愈伤组织诱导条件的优化研究(英文)

[目的]建立半夏细胞悬浮培养体系。[方法]以半夏叶柄为外植体,采用正交试验设计研究了2,4-D、NAA、毒莠定和KT4种植物生长物质及其配比对疏松愈伤组织形成的影响。[结果]2,4-D和毒莠定对半夏叶柄愈伤组织诱导效果最显著,KT和NAA次之。诱导半夏叶柄形成疏松愈伤组织的适宜培养基为MS+0.5mg/L2,4-D+1.0mg/LNAA+1.0mg/L毒莠定+1.5mg/LKT。[结论]为通过半夏细胞悬浮提取有效成分和生产人工种子奠定了基础。     

马铃薯茎段愈伤组织培养体系的优化

以克新12号、克新13号、东农303和早大白4种马铃薯试管苗茎段为材料,研究各品种的组织培养体系。结果发现,克新13号和克新12号的最适愈伤组织诱导培养基为MS+30 g/L蔗糖+8 g/L琼脂+2 mg/L 6-BA+1 mg/L 2,4-D;东农303为MS+30 g/L蔗糖+8 g/L琼脂+2 mg/L 6-BA+0.5 mg/L 2,4-D;早大白为MS+30 g/L蔗糖+8 g/L琼脂+2 mg/L 6-BA+0.5 mg/L 2,4-D。用上述最适诱导培养基培养,各品种的愈伤诱导率分别为100%,100%,100%和90%。克新13号愈伤组织分化的最佳培养基为MS+30 g/L蔗糖+8 g/L琼脂+4.0mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+1.0 mg/L GA3;克新12号和早大白为MS+30 g/L蔗糖+8 g/L琼脂+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+1.0 mg/L GA3;东农303为MS+30 g/L蔗糖+8 g/L琼脂+2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/LNAA+1.5 mg/L GA3。用上述最适诱导培养基培养,各品种的分化率分别为80%,90%,100%,76.7%。     

紫果西番莲愈伤组织诱导分化及不定芽增殖研究

以紫果西番莲离体培养的子叶为实验材料,对其愈伤组织进行诱导、分化及不定芽增殖。结果表明:在愈伤组织诱导中,以MS培养基+2,4-D 1.0 mg/L+TDZ 0.5 mg/L+琼脂3.8 g/L+蔗糖30 g/L的诱导效果最好,其诱导率为73.33%。在愈伤组织不定芽诱导中,以MS培养基+2,4-D 0.5 mg/L+TDZ 2.0 mg/L+琼脂3.8 g/L+蔗糖30 g/L的诱导率最佳,为46.67%。对不定芽继续进行增殖培养,以MS培养基+6-BA 1.0 mg/L+IAA 0.3 mg/L+琼脂4.0 g/L+蔗糖30 g/L最佳,增殖倍数为2.97。从而建立了西番莲植株再生体系,可进行优良材料的离体快繁。     

小叶女贞愈伤组织培养技术研究

探讨小叶女贞愈伤组织最佳培养条件,为进一步建立悬浮培养体系奠定基础。通过选取小叶女贞幼嫩外植体接种于不同植物生长调节剂的MS培养基中,进行愈伤组织诱导与增殖研究,以纯化的愈伤组织建立悬浮细胞系。结果表明,小叶女贞愈伤组织最适诱导培养基为MS+2,4-D 0.3 mg/L+6-BA 1.5 mg/L,初期增殖培养基为MS+2,4-D 0.3 mg/L+6-BA 1.5 mg/L,长期继代培养基为MS+2,4-D 1.5 mg/L+6-BA0.3 mg/L,可获得疏松的愈伤组织。结果表明,小叶女贞通过外植体诱导与增殖愈伤组织,可建立悬浮细胞系。     

不同激素配比对高寨贡茶愈伤组织诱导的影响

为了解不同激素配比对高寨贡茶愈伤组织诱导的影响,将消过毒的茶树一年生枝条和幼嫩叶片接种于分别添加不同浓度的6-苄氨基嘌呤(6-BA)、2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、玉米素(ZT)、3-吲哚丁酸(IBA)的MS培养基上,外加30g/L蔗糖和8g/L琼脂,pH 6.0,进行愈伤组织诱导试验。结果表明:高寨贡茶茎段和叶片诱导愈伤组织的最适培养基为MS+2.5mg/L 6-BA+0.6mg/L 2,4-D+0.25mg/L ZT+0.3mg/LIBA,茎段诱导芽的最适培养基为MS+2.5mg/L 6-BA+0.2mg/L 2,4-D+0.5mg/L ZT+0.5mg/L IBA,另加30g/L蔗糖、8g/L琼脂(pH 6.0),培养30d后可得到大量的愈伤组织和芽。     

苦豆子愈伤组织诱导及细胞悬浮培养体系的建立

以苦豆子子叶和胚轴为材料,对苦豆子愈伤组织诱导和继代增殖的最佳培养条件进行研究,旨在建立苦豆子悬浮细胞体系。结果发现,子叶和胚轴为愈伤组织生成的最佳外植体,愈伤组织最佳诱导培养基是MS+0.5 mg/L2,4-D+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA;最佳继代增殖培养基是MS+1.0 mg/L NAA+4.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L2,4-D。以胚轴诱导的愈伤组织是细胞悬浮培养的理想材料,初始接种量10%~20%,添加3%蔗糖,有利于悬浮细胞体系的生成。     

药用植物草麻黄细胞的悬浮培养

[目的]对草麻黄的子叶诱导出的愈伤组织,进行悬浮培养。[方法]采用组织培养的方法进行了愈伤组织诱导、愈伤组织继代和悬浮培养研究。[结果]MS+2.0 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L 6-BA为诱导子叶形成愈伤组织的理想培养基;MS+1.5 mg/L 2,4-D+1.5 mg/L6-BA是愈伤组织的适宜继代培养基;2.0 mg/L 2,4-D+1.5 mg/L 6-BA+300 mg/L水解酪蛋白(CH)是愈伤组织悬浮培养的适宜培养基,愈伤组织干重增加量为0.80 g。[结论]初步选择出草麻黄愈伤组织细胞的悬浮培养条件,为麻黄细胞扩大培养及有效成分提取奠定基础。     

西洋参花药愈伤组织诱导培养条件的优化

为了提高西洋参花药培养的愈伤组织诱导率,试验以吉林省集安西洋参花蕾为材料,初步研究不同浓度2,4-D、6-BA和蔗糖对花药愈伤组织诱导的影响,优化西洋参花药愈伤组织诱导培养条件。结果表明:在MS基本培养基附加2,4-D 2mg/L+6-BA 0.5mg/L+蔗糖60g/L+琼脂5.5g/L+水解乳蛋白0.5g/L的条件下,西洋参花药愈伤组织的诱导率可达37.53%。2,4-D对西洋参花药愈伤组织的诱导必不可少;2,4-D和6-BA的合理搭配能提高西洋参花药愈伤组织的诱导率;60g/L的蔗糖能有效促进西洋参花药愈伤组织的诱导。     

半夏疏松愈伤组织诱导条件的优化研究

[目的]建立半夏细胞悬浮培养体系。[方法]以半夏叶柄为外植体,采用正交试验设计研究了2,4-D、NAA、毒莠定和KT 4种植物生长物质及其配比对疏松愈伤组织形成的影响。[结果]2,4-D和毒莠定对半夏叶柄愈伤组织诱导效果最显著,KT和NAA次之。诱导半夏叶柄形成疏松愈伤组织的适宜培养基为MS＋0.5 mg/L 2,4-D＋1.0 mg/L NAA＋1.0 mg/L毒莠定＋1.5 mg/L KT。[结论]为通过半夏细胞悬浮提取有效成分和生产人工种子奠定了基础。     

半夏再生体系的建立

【目的】优化半夏再生条件,以获得优质半夏种苗.【方法】筛选出适宜的外植体后,使用3种激素2,4-D,KT,IAA利用正交设计法设置9个处理组对半夏愈伤组织进行诱导.选取长势良好,大小均一的半夏愈伤组织接于4种培养基中进行愈伤组织增殖.选取半夏叶柄诱导出的愈伤组织将其接于5种培养基中进行愈伤组织分化,观察不同培养基对半夏愈伤组织生根和出芽的影响,最后进行炼苗与移栽.【结果】在叶柄、叶片及块茎3种外植体中,叶柄是半夏愈伤组织诱导的最佳外植体;最有利于半夏愈伤组织诱导的培养基为MS+0.5 mg/L 2,4-D+1.5 mg/L KT+1.0 mg/L IAA;在暗培养条件下,将半夏愈伤组织继代于MS+2.0 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L KT+1.0 mg/L IAA中生长最快;MS+0.2 mg/L 2,4-D+1.5 mg/L 6-BA培养基最有利于半夏愈伤组织的生根和出芽.     

红叶石楠离体培养与高效再生体系建立

以红叶石楠(Photinia×frasery)带芽茎段、叶片为外植体,对其启动培养、叶片愈伤诱导与分化、芽增殖、生根培养及试管苗驯化等技术进行了较为系统的研究,建立了红叶石楠离体培养的高效再生体系。结果表明,幼茎启动培养适宜培养基为MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L+GA0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L,诱导率达63.3%;叶片愈伤诱导适宜的培养基为MS+6-BA0.5mg/L+2,4-D1.0mg/L+NAA1.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L,愈伤诱导率达86.0%;愈伤分化不定芽的适宜培养基为N6+6-BA1.5mg/L+IAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L,诱导率达21.6%,增殖率为1.4倍;芽增殖培养适宜的培养基为MS+6-BA3.0mg/L+KT0.5mg/L+NAA0.3mg/L+GA0.7mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L,最高增殖率达6.1倍;生根培养方法为用25mg/LNAA溶液浸泡0.5～1.0h后接种于1/2MS培养基中,生根率达93.4%以上;试管苗驯化的适宜混合基质为泥炭∶珍珠岩=3∶1,成活率可达96.7%。     

叶用芥菜细胞悬浮培养的初步研究

以叶用芥菜的子叶为外植体,对愈伤组织诱导和细胞悬浮培养的技术体系进行了研究。结果表明愈伤组织诱导的最适培养基为MS+0.3mg/LNAA+1.0mg/L6-BA+0.1mg/L2,4-D,愈伤组织最佳增殖培养基为MS+3.0mg/L6-BA+1.0mg/L2,4-D。悬浮培养过程中细胞生长曲线呈S型,培养2-10d达对数生长期。将小细胞团接种于MS+1.0mg/LNAA+3.0mg/L6-BA分化培养基上,继代两次后,分化出芽,分化芽在培养基MS+0.1mg/LNAA上诱导生根,形成小植株。     

叶用芥菜细胞悬浮培养的研究

以叶用芥菜的子叶为外植体,对愈伤组织诱导和细胞悬浮培养的技术体系进行了研究.结果表明,愈伤组织诱导的最适培养基为MS+0.3 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L 2,4-D,愈伤组织最佳增殖培养基为MS+3.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L 2,4-D.悬浮培养过程中细胞生长曲线呈S型,培养2～10 d达对数生长期.将小细胞团接种于Ms+1.0 mg/L NAA+3.0 mg/L 6-BA分化培养基上,继代两次后,分化出芽,分化芽在培养基MS+0.1 mg/L NAA上诱导生根,形成小植株.     

魔芋愈伤诱导的多因子正交试验

研究花魔芋(Amorphophallus albus)愈伤组织诱导的最佳激素组合培养条件。以魔芋叶柄为外植体,采用4因素3水平正交试验研究2,4-D、NAA、6-BA与KT 4种激素对魔芋愈伤组织诱导的影响。结果表明,2,4-D、NAA、6-BA与KT对魔芋叶柄外植体膨大与愈伤组织形成具有显著效应。利于外植体膨大的最优激素组合为MS+3.0 mg/L 2,4-D+3.0 mg/L NAA+0.3 mg/L 6-BA+0.1 mg/L KT;利于愈伤组织积累的最优激素组合为MS+1.0 mg/L 2,4-D+3.0 mg/L NAA+0.3 mg/L 6-BA+1.0 mg/L KT。试验优化的激素组合条件下魔芋外植体膨大与愈伤诱导有较佳的表现,可用于花魔芋的培养。     

厚朴愈伤组织诱导条件的优化

为了优化出厚朴顶芽愈伤组织诱导的最适培养条件,以MS为基本培养基,探讨了6-BA、NAA、2,4-D以及光照对厚朴顶芽诱导的影响。结果表明:厚朴顶芽诱导的最适培养基为MS+2.0 mg/L2,4-D+0.5 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+8 g/L琼脂,pH 5.8,培养13 d后,顶芽诱导出愈伤组织。诱导出的顶芽愈伤组织在温度(25±2)℃,光周期为12h/d,光照强度为1 500~2 000 lx条件下进行光培养,其比暗培养[(25±2℃)]差。     

红叶石楠愈伤组织抗褐化研究以及悬浮细胞系的建立

以红叶石楠无菌苗叶片为试材,诱导愈伤组织并建立悬浮细胞系。结果表明:红叶石楠愈伤组织初代诱导最佳培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L+2,4-D 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L,诱导率可达97%。继代培养以MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L为宜。针对红叶石楠愈伤组织继代培养过程中易褐化的问题,通过正交试验探讨了不同吸附剂、抗氧化剂及其它因素对褐化的影响。采用MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+Vc 1.0 mg/L+Ch 100 mg/L附加1%蔗糖的继代培养基,可以明显降低红叶石楠愈伤组织的褐化现象。将胚性愈伤组织接种到1/2 MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L附加2%蔗糖,pH 5.5液体培养基中悬浮震荡培养获得了分散性好、色泽鲜艳的悬浮细胞。