农药残留分析中植物酯酶抑制法两种显色剂的性能比较

通过对植物酯酶抑制法两种常用显色剂的性能比较试验研究,结果表明,指示剂2(2,6-二氯靛酚)无论在稳定性上,还是在灵敏度和精确度上都要高于指示剂1(乙酸-β-萘酚与固蓝B盐),说明指示剂2比指示剂1性能更为优越。     

蔬菜中有机磷类农药残留的快速检测

通过研究蔬菜中常用的5种有机磷农药对植物酯酶的抑制作用,以2,6—二氯乙酰靛酚为显色剂,确立了蔬菜中有机磷农药残留的快速检测方法。实验结果表明:该方法能快速检测氧化乐果、甲基对硫磷、甲拌磷、甲胺磷、久效磷等5种有机磷农药在蔬菜中的残留,最低检测限范围为0.002～0.05μg·mL-1。     

有机相中测定酶PSL活性研究

[目的]为实现在有机相中用酶抑法分析有机磷农药残留。[方法]以2,6-二氯靛酚钠为底物和显色剂,制作标准曲线,在4ml的丙酮中分析微生物酯酶PSL的催化动力学和催化活性。[结果]标准曲线相关系数R2=0.9806。酶的用量为2.5mg,1IU=75.7mg/（min.μm）;酶活力为0.033IU;比活力为0.0132IU/mg。[结论]建立了有机相中测定酶活性的分析方法,为有机相中酶抑法分析农药残留提供理论依据。     

酶抑制法测定有机磷农药含量

通过测定乙酸-1-萘酯在酯酶(蚕蛹酶、鸡肝酶和面粉酶)催化下水解生成的乙酸被有机磷农药抑制前后pH值的变化,推算出有机磷农药对酯酶的抑制率,从而检测出有机磷农药的含量.以ΔpH值为指标,经由单因素试验得出最佳酶促反应条件:反应时间30 min、反应温度35 ℃、固蓝B盐1 mL、乙酸-1-萘酯3 mL.结果发现蚕蛹酶活性最高,且农药对酶的抑制具有选择性,混合酶液未出现特异性提高.     

大蒜头提取物对丁酰胆碱酯酶抑制作用的测定分析

试验采用蒸馏水提取得到的大蒜头中干扰酶抑制剂检测有机磷与氨基甲酸酯农药残留的提取物,以2,6-二氯靛酚作为显色剂,分析了提取物对丁酰胆碱酯酶活性的抑制类型.结果表明,大蒜头提取物对丁酰胆碱酯酶的抑制为可逆型抑制.     

有机磷水解酶对不同有机磷农药降解功效的评价

通过2种检测方法测定了有机磷水解酶对不同有机磷农药的降解功效,一种方法是通过气相色谱法直接检测降解产物中农药的残留量来评价有机磷水解酶对不同农药的降解功效;另一种方法是利用有机磷类农药可以抑制乙酰胆碱酯酶的活性,受抑制的胆碱酯酶不能将靛酚乙酸酯(红色)分解为靛酚(蓝色)和乙酸的原理,通过测定有机磷水解酶降解后有机磷农药的残留量对胆碱酯酶的抑制作用来评价有机磷水解酶对不同有机磷农药的降解功效。研究结果发现:有机磷水解酶对甲基对硫磷、对硫磷、喹硫磷和敌敌畏具有高效降解作用,降解率在82.2%～98.7%;其次是氧乐果、久效磷和敌百虫,降解效率在28.1%～45.4%;其他的降解效率均在20%以下。     

植物酯酶源的筛选及最佳提取条件的确定

为建立蔬菜、水果中农药残留的快速检测方法,以2,6-二氯乙酰靛酚为显色剂,对不同来源的植物酯酶进行筛选,以总酯酶活力和比活力为考核指标,确定最佳植物酯酶源。结果表明:苜蓿酯酶的活力和比活力最大,苜蓿为最佳植物酯酶源,酯酶最佳提取条件是在4℃,以pH7.0的0.1mol·L-1磷酸盐缓冲溶液为提取剂,料液比1∶10,提取时间10min。     

麦麸中植物酯酶的提取及其在有机磷农药残留检测中的初探

本文初步确定了麦麸中提取植物酯酶的工艺、酶促反应的最佳检测波长和酶促反应最适条件。酶活测定采用分光光度法,波长确定为533纳米,酶活力用单位时间酶促反应速率表示。酶促反应的最佳条件为:酶液保存温度0～5℃;反应温度40℃,保温时间15分钟,pH7.5,酶量30μL,8毫克/毫升固兰B盐0.5毫升,3毫克/毫升底物(α-乙酸蔡酯)200μL。同时探讨了从麦麸中提取的植物酯酶用于快速检测蔬菜中农药残留的方法。     

有机磷农药与小麦酯酶作用关系研究

本研究以小麦为植物酯酶的酶源,α-乙酸萘酯为底物,考察了小麦酯酶与有机磷农药之间作用的关系,建立了10个以吸光值变化表示的酶活性与有机磷农药浓度对数之间的线性方程,并确定了函数的单调区间和极值。     

猪肝酯酶农药敏感性及其与胆碱酯酶的对比研究

【目的】探讨猪肝酯酶(PLE)对农药的敏感性,为农药残留快速检测提供新的敏感酶源。【方法】以乙酸-1-萘酯为底物,考察PLE酶促反应的最适温度、p H及几种农药的最佳作用时间,同时比较了PLE对几种特异性酶抑制剂的敏感性;以电鳗乙酰胆碱酯酶(ACh E-ee)、马血清丁酰胆碱酯酶(BCh E-hs)为对照酶源,采用酶抑制法,绘制5种有机磷农药(敌百虫、敌敌畏、甲胺磷、辛硫磷、毒死蜱)和5种氨甲酸酯类农药(灭多威、克百威、丁硫克百威、残杀威、涕灭威)的抑制曲线,并计算相关半抑制率(IC50),比较各种酶的农药敏感性。【结果】猪肝酯酶酶活测定方法的最佳温度、时间、p H分别为35℃、15 min、7.0;农药最适作用时间为15min;猪肝酯酶对双(4-硝基苯基)磷酸酯敏感性最高,毒扁豆碱次之,盐酸多奈哌齐最低;与胆碱酯酶相比,猪肝酯酶对供试的多数有机磷农药和氨甲酸酯类农药的IC50更低,,敏感性更好。【结论】猪肝酯酶具有良好的农药敏感性,可以作为酶抑制法农药残留快速检测的候选酶源。     

植物酯酶光纤传感器检测有机磷农药

[目的]探究植物酯酶检测有机磷农药的效果。[方法]采用研究溶胶凝胶法包埋植物酯酶的方法,制备有机磷传感膜,将该传感膜与光纤等器件耦合成有机磷光纤生物传感器,观测该传感器的稳定性及灵敏度。[结果]将该传感器用于检测7种有机磷农药观察发现,有机磷农药浓度在0.010~10.000μg/ml浓度范围内,抑制率与农药浓度的对数值呈良好线性关系,样品加标回收率在90.8%~96.3%,测定值的相对标准偏差小于5%,常见无机阴阳离子对测定无显著干扰。[结论]该传感器可应用于蔬菜中有机磷农残检测。     

果蔬农药残留快速检测固定化酶片的制作研究

[目的]对胆碱酯酶的保藏性进行研究分析,以期得到保障农药残留检测的最佳酶活力。[方法]试验选定高酶活力的大豆酯酶为酶原,通过筛选最适反应温度、反应时间、离子浓度和最适pH,及最佳的反应显色体系来确定反应最适的条件,采用不同的显色体系酶抑制法,研究酶片的制作方法。[结果]酶片载体材料采用硝酸纤维膜,制作每张酶片取20μL大豆酶液,15μL 0.5%的BSA溶液,2μL 0.05%戊二醛于平底试管中。添加0.03 mol/L pH 7.0的磷酸缓冲液至总体积100μL,4℃固定10 h;制作每张显色片,需在1 cm×1 cm大小的滤纸片上加入50μL显色剂,30μL底物,4℃冷风吹干,封膜真空保存。[结论]固兰B盐和α-乙酸奈酯组合,适合作为酶抑制法检测有机磷农药残留的显色剂,且效果明显。     

氧化乐果在绿化废弃物厌氧发酵过程中的降解

[目的]研究厌氧消化方法促进有机磷农药降解的可行性。[方法]采用城市园林绿化废弃物作为发酵底料,同时向厌氧消化系统中滴加有机磷农药——氧化乐果,采用气象色谱仪检测发酵系统中农药的浓度。[结果]厌氧消化系统内农药的浓度越低,其降解速度越快;在厌氧消化系统负荷下,140 mg/L氧化乐果是该系统能够消解的极限。氧化乐果浓度达到60 mg/L以上时,逐渐开始出现对厌氧消化系统产沼气的抑制作用,系统的产沼气能力降低,氧化乐果浓度在100 mg/L以上时对产气造成了严重抑制。随着反应的进行,pH稳步升高,最终稳定在6.5~7.3,该pH适宜于甲烷的生长。[结论]利用城市绿化废弃物发酵降解有机磷农药是可行的。     

市售农残速测试剂盒对5种有机磷农药的敏感性评价

为了对商品化农残速测试剂盒进行评价,全面了解市售农残速测试剂盒的质量,本研究采用市售的6个品牌农残速测试剂盒,在2种情况下（提取液取用2.5 mL和3 mL）对甲拌磷、蝇毒磷、二嗪磷、对硫磷、久效磷进行敏感性测定,根据5种农药在5个浓度水平下的测定结果,绘制6个品牌的试剂盒的抑制率对农药浓度的效应曲线并用抑制率和农药浓度之对数进行线性拟合、计算出相关系数、IC₅₀和IC₁₀,根据IC₁₀对各种试剂盒对每种农药的敏感性进行比较并以此判定试剂盒的优劣。结果表明同一种试剂盒对不同的农药、不同的试剂盒对同一种农药的敏感性均不同;抑制率和农药浓度对数相关性较好的试剂盒其相关系数R²分别为0.4835~1（提取液取用2.5 mL）和0.6602~1（提取液取用3 mL）,IC₁₀分别为2.01×10^-4~3.78 mg/kg（提取液取用2.5 mL）和3.92×10^-3~3.36 mg/kg（提取液取用3 mL）;6种试剂盒对甲拌磷均不敏感,除了A试剂盒外其他试剂盒在5个浓度水平下抑制率均为0。根据所测试的5种农药,将试剂盒分为3个等次,D试剂盒最优,其次是C和E,第三是A、B和F。建议国标和行标修改50%或者70%的判定阈值。     

Amplification of an esterase gene is responsible for insecticide resistance in a California Culex mosquito

An esterase gene from the mosquito Culex quinquefasciatus that is responsible for resistance to a variety of organophosphorus (OP) insecticides was cloned in lambda gt11 phage. This gene was used to investigate the genetic mechanism of the high production of the esterase B1 it encodes in OP-resistant Culex quinquefasciatus Say (Tem-R strain) from California. Adults of the Tem-R strain were found to possess at least 250 times more copies of the gene than adults of a susceptible strain (S-Lab). The finding that selection by pesticides may result in the amplification of genes encoding detoxifying enzymes in whole, normally developed, reproducing insects emphasizes the biological importance of this mechanism and opens new areas of investigation in pesticide resistance management.     

Studies on the Purification and Characterization of Soybean Esterase, and Its Sensitivity to Organophosphate and Carbamate Pesticides

Soybean esterase, a cholinesterase-like enzyme, was purified by differential centrifugation firstly, then, ammonium sulfate precipitation, dialysis, and finally, DEAE-cellulose-32 ion-exchange chromatography after extracting it from soybean seeds with phosphate buffer （0.3 mol L^-1, pH 7.0）. The extract recovery rate of the purified enzyme was 8.18% and purification fold was 91.58. The soybean esterase appeared as two bands on the denaturing SDS-PAGE with molecular weights of 24 and 37.2 kDa, respectively, which proved that it is a dimer protein consisting of two subunits. The result of nondenaturing PAGE revealed that the soybean esterase is a single band with cholinesterase-like activity using α- naphthyl acetate as the substrate and fast blue B salt as coloring agent. The esterase showed very high sensitivity to 18 kinds of organophosphate pesticides and 6 kinds of carbamate pesticides with the lowest detective limits of 0.03125- 0.0625 and 0.03125-0.25 mg kg^-1, respectively, and can meet the demands of MRL specified by the most countries.     

光催化氧化法降解有机磷农药的动力学研究

[目的]进一步对有机磷敌敌畏农药光催化降解的反应动力学进行研究。[方法]采用Sol-gel法在玻璃圆形反应器上镀制了TiO2膜,以紫外/二氧化钛膜(UV/TiO2)光催化氧化法来降解有机磷农药敌敌畏溶液,探讨了光催化反应时间、溶液的初始浓度对降解敌敌畏溶液的影响。[结果]由玻璃筒负载的TiO2膜对单一的敌敌畏溶液具有很好的光催化降解效果,TiO2膜具有很好的光催化活性。敌敌畏溶液的初始浓度越低,光催化降解效果越好,经90 min光催化氧化处理后,不同浓度敌敌畏的降解率都能达到90%以上。动力学研究表明,敌敌畏的降解速率对敌敌畏浓度为一级反应,反应速率方程为:Ct=C0e-0.0719t(mg/L)。[结论]光催化降解有机磷农药敌敌畏溶液具有很好的降解效果。     

板栗苞壳提取物对思茅松毛虫肠道细菌的抑菌作用

[目的]研究板栗苞壳提取物对思茅松毛虫肠道细菌的抑菌作用,为害虫防治及新型植物源生物农药开发提供理论依据.[方法]以10株思茅松毛虫3龄和5龄幼虫肠道细菌为供试菌种,采用牛津杯法测定不同有机溶剂板栗苞壳提取物的抑菌效果.[结果]不同有机溶剂板栗苞壳提取物对思茅松毛虫肠道细菌均有一定的抑菌作用,且随着质量浓度的增大抑菌作用逐渐增强,各提取物的抑菌作用大小顺序为乙酸乙酯>乙醇>氯仿>正丁醇>石油醚,其中以乙酸乙酯提取物对思茅松毛虫肠道细菌的抑菌作用最强,最低抑菌质量浓度(MIC)为6.250 mg/mL,石油醚提取物的抑菌作用不明显或无抑菌作用.[结论]板栗苞壳提取物可作为新型植物源生物农药在思茅松毛虫防治中加以开发利用.     

豚草提取液对小鼠肝脏CarE活性及蛋白质含量的影响

采用超声法提取豚草活性物质,通过灌胃给药途径喂给小白鼠,以有机磷药剂敌敌畏(DDVP)和空白组作为对照,研究豚草提取液对哺乳动物肝脏羧酸酯酶(CarE)活性及蛋白质含量的影响。结果表明:豚草提取液对小鼠肝脏CarE活性有激活作用,在给药后6 h内酶比活力值上升显著,达到15.006 μmol/（min•mg）;随后逐渐降低,24 h时酶比活力值降至9.156 μmol/（min•mg）,基本恢复至正常水平。DDVP对小鼠肝脏CarE活性产生明显抑制作用,给药后其CarE活性始终处于被抑制状态,显著低于空白组,且恢复缓慢。豚草提取液和DDVP均对小鼠肝脏蛋白质含量有抑制作用。作为杀虫抑菌制剂,豚草活性物质的安全性显著优于有机磷药剂。