应用抑菌剂生产白僵菌的研究

3年试验证明:用麦麸生产白僵菌时,采用敌克松、硫酸铜、漂白粉0.1～0.3％的浓度直接拌料可获得良好的效果,产孢量高,每克菌粉含孢子70～113亿,而且对白僵菌生长安全,抑制杂菌明显。用玉米(米查)生产白僵菌时,则以玉米(米查)煮沸30分钟的产孢量较高,每克菌粉含39.74亿孢子。采用玉米(米查)预浸1天,再用0.1％硫酸铜液浸(米查)15分钟,也可获得较好的效果。此法不用高压灭菌,简单、经济,适合农村应用。     

黄绿绿僵菌Ma130821菌株的分子鉴定及产孢特性研究

【目的】鉴定从云南省玉溪市峨山县塔甸镇玉米田自然罹病蛴螬分离培养获得的绿僵菌Ma130821种类,明确该菌株在害虫生防制剂开发应用的潜力。【方法】根据微生物菌落培养特征和产孢结构特征,结合ITS-5.8S DNA序列,对绿僵菌Ma130821进行种类鉴定,同时对其产孢特性进行研究。【结果】绿僵菌Ma130821为黄绿绿僵菌(Metarhizium flavoviride),该菌株Ma130821在大米、麦麸、玉米粒和稻壳基质上固相培养后均能生长和产孢,但产孢量不同。其中在大米基质上,黄绿绿僵菌的每克孢子含孢量和每克基质产孢数均为最高,同时所产孢子萌发率极显著高于其他培养基所产孢子(P0.01),由此以大米为基质,系统研究了黄绿绿僵菌Ma130821菌株的产孢特性。发现在25℃条件下,黄绿绿僵菌在大米基质上每克孢子含孢量最高达到1.47×109个,极显著高于28℃和30℃(P0.01),所产孢子在48 h时的萌发率达到100%;16 L∶8D光照条件下每克孢子粉产孢量高达5.07×108个,极显著高于14 L∶10 D光照条件下的产孢量,在第48小时时,16 L∶8 D条件下所产孢子的萌发率达到100%。【结论】从云南省玉溪市峨山县塔甸镇玉米田自然罹病蛴螬分离培养获得绿僵菌Ma130821为黄绿绿僵菌(M. flavoviride)。以大米为固相产孢基质,在25℃、16 L∶8D的培养条件下最适宜该菌株分生孢子扩大培养。     

綠僵菌、黄僵菌对松毛虫的室内杀虫及固体生产试验初报

自国外引入金龟子绿僵菌Metarhizium anisopliae1株(RS455)和黄僵菌(即粉质拟青霉)Paecilomyces farinosus 2株(RS3、RS20),经室内杀虫试验证明,皆侵染马尾松毛虫,其中RS3致病力较强,RS455次之。在相对湿度33—97%的范围内,RS455发芽率远高于2株黄僵菌,而RS3发芽率随相对湿度下降速度较RS20稍慢,抗旱力稍强。采用常规的固体生产技术成功地生产出这两种真菌。棉籽粉具显著的促产孢作用,稻壳具显著的改善通气作用。在浅盘生产中,RS455高压灭菌产孢量同石灰水抑菌相近,而RS3高压灭菌产孢量显著高于石灰水抑菌。     

菌渣发酵床对雏鸡生产性能的影响

以金针菇菌渣为原料,分析了菌渣的碳氮比、木质素、持水力等发酵指标,并用菌渣与锯末、稻壳等垫料原料制作发酵床饲养蛋雏鸡,研究菌渣发酵床对雏鸡生产性能的影响。结果表明：25%菌渣＋25%锯末＋50%稻壳发酵床垫料表面、垫料深10 cm、垫料深20 cm处的发酵温度都高于50%锯末＋50%稻壳发酵床。这两种发酵床对雏鸡生产性能的影响无显著差异,且菌渣能够降低发酵床垫料成本,从而可以部分代替锯末用于发酵床。     

添加辅料及引入外源微生物对草屑堆肥的影响

以高尔夫球场草坪修剪的草屑为堆肥原料，采用堆肥试验箱，研究在草屑堆体中调节低C/N（10）到25和加入外源微生物（复合菌）对草屑堆肥效果的影响。设计了几种物料的不同配比,引入高C/N的锯末（500）、稻壳（170.83）来调节C/N，测定了堆体的温度、C/N、含N量和pH值。结果表明，单调节C/N到25的堆体最终的C/N下降到20以下，但是温度上升慢，需要10 d以上才能达50 ℃以上，pH接近5.0 ，含N量下降；加入复合菌的堆体温度只需1～2 d就可达到50 ℃以上，pH值偏中性，但是最终产品的C/N升高，含N量下降；用锯末和稻壳调节C/N到25且加入草屑的堆体，最终堆肥产品的C/N降低到20以下；用锯末和稻壳调节堆体C/N到25且加入复合菌的堆体的温度上升快，堆肥周期短，含N量分别从3.3% 和 3.42%上升到 3.6%和3.72%，pH值接近7.0。加入稻壳和锯末对草屑堆肥的影响没有明显的差异，但用高C/N锯末调剂草屑堆体的C/N到25并加入复合菌，堆肥效果更好，一般2周左右即可完成堆肥过程。     

三种生物农药混配防治马尾松毛虫试验

本试验运用正交试验法研究了不同浓度(含孢量)的白僵菌、绿僵菌和森得保三种生物农药混配林间防治马尾松毛虫试验。试验结果表明,其混配剂中三种生物农药的最佳浓度组合为A3B1C3。即:即含孢量90亿/g白僵菌粉400g/667m2、含孢量50亿/g绿僵菌粉200g/667m2、1000g/667m2森得保的混配剂,防治马尾松毛虫的效果达94.15%,其混配剂具有明显的增效作用,可在生产上推广应用。     

添加辅料及引入外源微生物对草屑堆肥的影响

以高尔夫球场草坪修剪的草屑为堆肥原料，采用堆肥试验箱，研究在草屑堆体中调节低C／N（10）到25和加入外源微生物（复合菌）对草屑堆肥效果的影响。设计了几种物料的；卞同配比，引入高C／N的锯末（500）、稻壳（170．83）来调节C／N，测定了堆体的温度、C／N、含N量和pH值。结果表明，单调节C／N到25的堆体最终的C／N下降到20以下，但是温度上升慢，需要10d以上才能达50℃以上，pH接近5．0，含N量下降；加入复合菌的堆体温度只需1—2d就可达到50℃以上，pH值偏中性，但是最终产品的C／N升高，含N量下降；用锯末和稻壳调节C／N到25且加入草屑的堆体，最终堆肥产品的C／N降低到20以下；用锯末和稻壳调节堆体C／N到25且加入复合菌的堆体的温度上升快，堆肥周期短，含N量分别从3．3％和3．42％上升到3．6％和3．72％，pH值接近7．0。加入稻壳和锯末对草屑堆肥的影响没有明显的差异，但用高C／N锯末调剂草屑堆体的C／N到25并加入复合菌，堆肥效果更好，一般2周左右即可完成堆肥过程。     

蕉斑镰刀菌32-6菌株产孢条件研究

通过液体摇瓶及固体浅盘产孢试验,比较了蕉斑镰刀菌32-6菌株在不同液体培养基中的产孢量,同时以绿豆汤和廉价固体基质(麦麸与米糠)分别作为液体和固体发酵基质,确定了发酵所需的参数。结果表明,绿豆汤培养基液体摇瓶产孢条件为28℃、初始pH8.0、初始接种量体积分数为1%(每mL母液1×106个孢子)、培养5d时,产孢量最大;固体浅盘产孢条件为28℃、初始pH8.0、初始接种量质量体积比为50∶1(g·mL-1)(每mL母液1×106个孢子)、麦麸与米糠的质量比为5.41∶1、基质含水量在63%~65%、培养9d时,产孢量达最大值。     

瓶栽猴头赚钱不愁

猴头菌原是野生的,现多人工栽培,而且方法很多,现介绍一种瓶栽方法。1.选瓶最好选用750～1000毫升的小口瓶,颜色选透明或棕色的均可,大容量装料多,生长出的子实体较大,形状好看,易出售。如果无上述瓶子,也可用罐头瓶代替。2.配料栽培猴头的培养料配方很多,农民朋友可根据当地的资源实际,适当选用:(1)棉子壳99%,石膏粉1%。(2)锯末78%,麦麸(或末糠)20%,蔗糖1%,石膏粉1%。(3)玉米心(粉碎)50%,锯末50%。(4)棉子壳30%,锯末40%,麦麸30%。(5)花生壳(粉碎)80%,麦麸(或末糠)18%,石膏粉1%,磷酸二氢钾1%。不论采用哪种配方,加水量应掌握在以5千克干料加…     

生防木霉SS003菌株(Trichoderma atroviride)的固体发酵工艺研究

为了探索酷绿木霉SS003菌株固体发酵产孢子的较优工艺条件.分别以酷绿木霉SS003菌株为供试菌和以玉米秸秆、麦麸发酵基质,分别进行了固体发酵培养基配方和固体发酵条件的优化筛选,试验设计均采用单因索试验.试验最终检测方法采用血球计数板倍量稀释法镜检孢子量(108个/g).分别获得了酷绿木霉SS003菌株产孢固体发酵的较优培养基配方和较优固体发酵条件,即80目的玉米秸秆与麦麸配比1:3,接种1×106个/mL的SS003孢子液,保持含水量55％和充分通气,培养11d后,酷绿木霉SS003菌株固体发酵产孢量达到最大(76.14×108个/g).初步探索到绿木霉SS003菌株固体发酵产孢的较优工艺条件,为该菌的深入研发提供了有益的试验数据.     

大批量生产尖角突脐孢菌分生孢子技术

通过研究光照、培养温度、培养时间、酸碱度和培养基等因素对尖角突脐孢菌孢子形成的影响,从而探明大批量生产该菌分生孢的条件和方法.结果显示,在适合的温度(25～30℃)、pH 4～5、一定的培养时间(2～3周)和适当的产孢介质下,能够诱导尖角突脐孢菌形成大量的分生孢子;该菌产孢需要元素N和S,没有元素P显著降低产孢量,高C/N比和Fe不利产孢,缓效碳源玉米粉产孢效果好,缓效碳源可溶性淀粉次之;有机氮源大豆粉产孢效果最好,无机氮源中NH4NO3的产孢效果好;对合成培养基,在PDA培养基上产孢良好,沙氏和YSC(淀粉、豆粉、胡萝卜汁)培养基不宜作产孢介质;该菌产孢对稗草叶汁和玉米叶汁无依赖;对农基介质,大米、稻谷、稻壳、小麦粒、高粱籽、玉米粉、玉米粒、大豆籽和大豆粉均能产孢,稻谷介质产孢效果最好,其次为大米,麦麸不能产孢.     

玫烟色拟青霉的培养及固体培养基筛选

本文记述了玫烟色拟青霉（Paecilomyces fumosoroseus)在6种不同固体培养基上进行三级扩大培养的方法及培养性状，其中以麦麸和米糠混合的固体培养基产孢量可达283亿／g，该菌在这种培养基上产孢量大，容易生长，且该培养基经济实用，容易得到，判断该培养基为优良培养基。     

白僵菌有关培养条件及其与毒力关系的研究

以麦麸、米糠、黄豆粉、蛋白胨、牛肉膏、蚕蛹粉作供试氮源,在３种动物性氮源的培养基上,白僵菌的产孢量及毒力均高于植物性氖源,其中以蚕蛹粉最优;在１６种不同碳氮比的培养基上,以碳氦比２（４０／２０）和１．５（３０／２０）产孢量和毒力为高;在８种不同ｐＨ值的培养基上,以ｐＨ５．５～６．５最适于产孢,ｐＨ６．３、７．０时,白僵菌的毒力明显较强。研究结果显示,菌落生长量和产孢量往往不一致,而产孢量与毒力则明显相关。     

应用二次通用旋转组合设计优化黄绿绿僵菌固相培养基配方

在真菌孢子粉大规模生产中,筛选生防真菌最佳产孢培养基是提高产孢量的先决条件。选用廉价易得的实验材料作固体培养基,在单因素试验的基础上,采用二次通用旋转组合设计,对影响黄绿绿僵菌Mf82菌株固相发酵阶段产孢量的固体培养基组分及其配比进行了优化,并检测了所获孢子粉的质量指标。结果表明,单因素试验,从大米粉、面粉、玉米粉、豆角壳和黄粉虫蜕中选择面粉、豆角壳与黄粉虫蜕以4:1:0.2配比混合作为固体培养基配方时,该菌产孢量最高;优化实验,固相培养基中面粉、豆角壳和黄粉虫蜕的配比为4:1:0.25时,该菌产孢量高达2.39×1012个·kg-1;孢子粉的指标检测,显示用该培养基配方生产的黄绿绿僵菌孢子粉达到了真菌孢子粉生产的企业标准。     

生猪菌渣发酵床垫料对小麦种子发芽及酶活的影响

为了促进发酵床废弃垫料的循环利用,设计5种发酵床,以锯末稻壳发酵床为对照,在对照发酵床中分别以15%、45%的金针菇菌渣或15%、45%的杏鲍菇菌渣替代等比例的锯末,饲养生猪100 d后测定垫料的化学成分及0、50、100倍垫料稀释液对小麦种子发芽率、主根长度及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)活性的影响。结果表明:该5种发酵床垫料中的氮、磷、钾、铜、铁、锌、锰含量均居于合理区间,第二天小麦种子发芽率皆达到100%,彼此无显著差异。零倍稀释液的主根长度、SOD、POD、CAT活性极显著高于100倍稀释液(P0.01)。同期该5种发酵床小麦种子的发芽率、主根长度及各种酶活彼此无显著差异(P0.05)。表明锯末稻壳发酵床中分别添加15%、45%的金针菇或杏鲍菇菌渣对小麦种子发芽无不利影响。     

加工工艺对超微粉碎麦麸热干面品质的影响及工艺优化

试验研究了超微麦麸添加量、谷朊粉添加量、食用碱添加量、食用盐添加量对超微粉碎麦麸热干面品质(蒸煮特性、质构和感官评价)的影响。结果表明,在单因素试验的基础上,通过正交试验确定了超微粉碎麦麸热干面的最佳工艺为:麦麸添加量8%,谷朊粉添加量3%,食用碱添加量0.8%,食用盐添加量0.4%。     

玫烟色拟青霉固体培养基筛选及培养条件研究

玫烟色拟青霉IfB01菌株在25℃、RH85％下分别在4种单一培养基(大米、黄豆粉、玉米粉、小麦粉)和3种复合培养基(小麦粉∶麦麸1∶1、黄豆粉∶麦麸1∶1、玉米粉∶麦麸1∶1)培养,以产孢量为指标筛选出较佳的基础培养基配方.通过正交试验验证加入不同浓度的碳源、氮源优化的基础培养基,筛选较佳的固体培养基配方为:玉米粉培养基+0.2％KNO3+0.1％葡萄糖+水(1∶1.5=物料∶水质量比);通过单因素试验,确定菌株较佳的培养条件是28℃、光照黑暗交替培养14h∶10h、产孢前期湿度为80％、产孢后期湿度为50％.     

蓝光促进绿僵菌产孢和产孢调节基因fluG表达

【目的】明确蓝光照射对绿僵菌产孢的促进作用及与产孢调节基因fluG表达量的关系,为绿僵菌发酵生产提供光照促进产孢的理论依据和技术参数。【方法】以绿僵菌高效杀虫菌株M202为试材,平板接种培养,通过显微观察每隔12 h的菌体发育状态,确定菌株发育进程产孢前期、初始期、旺盛期、平稳期的对应时段。以蓝光6 804-54 432 J?m^-2的8个能量梯度,照射处理在黑暗中培养至不同发育期即24、48、72 h的菌体,继续培养到产孢稳定期后,采用打孔法取样,以显微计数法检测计算产孢量,评估菌体发育阶段对蓝光的敏感性以及蓝光照射能量对产孢量的影响。克隆fluG,建立fluG real-time PCR反应体系;以蓝光6 804-54 432 J?m^-2的8个能量梯度,照射处理发育至48 h即处于产孢前将进入产孢期的菌丝体,照射处理后立即取菌丝,液氮冷冻,提取RNA并反转录成cDNA,通过real-time PCR检测fluG表达量,评估蓝光照射对fluG表达量的影响。【结果】绿僵菌M202菌株发育24 h前为萌发期,24-72 h为菌丝快速生长期,其中48 h还处于产孢前期,60 h已进入产孢初期,72-96 h为产孢盛期,96-120 h为产孢末期,120 h后为孢子成熟期,7-10 d后产量达到稳定。蓝光不同能量照射24 h菌龄即初期菌丝体,其产孢量与无光照处理的对照无显著差异,照射48 h菌龄即菌丝快速生长的产孢前期,其产孢量显著提高,最适照射能量为20 412-40 824 J?m^-2,其中34 020 J?m^-2使产孢量最高达无光照处理对照的1.50倍,72 h菌龄即产孢结构形成、产孢量快速增长期对蓝光最为敏感,低至6 804 J?m^-2的照射能量即可显著提高产孢量,且宽泛的各剂量均有效。对于fluG的表达,在试验照射剂量范围内,48 h菌龄接受蓝光照射后,fluG表达量显著提高,表达量随照射剂量呈先上升后下降的趋势,在20 412 J?m^-2以下较低能量时,fluG表达量与照射剂量成正相关,当照射时间为2.25 h时,表达量达到最高,为无光照处理对照的2.41倍,而在20 412 J?m^-2以上较高能量时,二者呈现负相关,随着蓝光照射时间的增加,基因表达量呈下降趋势;灰色关联度分析显示,当关联因子为0.5时,产孢量与fluG表达量的关联度r值为0.74。【结论】蓝光照射能够促进绿僵菌产孢及fluG表达,不同发育阶段的菌体对蓝光感应有显著差异,在48-72 h菌龄时照射34 020 J?m^-2能量可获得最高产孢量,产孢与fluG之间有较高关联度说明fluG参与绿僵菌产孢的调控。     

一株具有高毒力的蜡蚧轮枝菌最适培养条件筛选

为了筛选出一株具有高毒力的蜡蚧轮枝菌菌株,根据已有文献所记载的蜡蚧轮枝菌的培养条件,对一株蜡蚧轮枝菌菌株培养条件进行筛选,在不同接菌量、不同摇床转速、不同碳源和氮源条件下,分别比较了各处理组蜡蚧轮枝菌的产孢数量。结果表明,在接菌量为1%的液体培养基中产孢量最大,同时在培养转速160 r/min的条件下菌株产孢量与其他摇床转速处理差异显著,产孢量为1.46×10~9个/mL,在第6天供试碳源为葡萄糖的处理产孢量为1.26×10~9个/mL。菌株在供试氮源为蛋白胨的培养基中产孢量最大,为1.31×10~9个/mL,与供试氮源为酵母浸粉的处理之间差异显著。在以上条件下,蜡蚧轮枝菌菌株具有生长速度快、产孢量大和菌丝活力高等优点,并为更好地将该菌应用于大田生产提供了崭新的思路。     

应用二次通用旋转组合设计优化黄绿绿僵菌固相培养基配方

在真菌孢子粉大规模生产中,筛选生防真菌最佳产孢培养基是提高产孢量的先决条件。选用廉价易得的实验材料作固体培养基,在单因素试验的基础上,采用二次通用旋转组合设计,对影响黄绿绿僵菌Mf82菌株固相发酵阶段产孢量的固体培养基组分及其配比进行了优化,并检测了所获孢子粉的质量指标。结果表明,单因素试验,从大米粉、面粉、玉米粉、豆角壳和黄粉虫蜕中选择面粉、豆角壳与黄粉虫蜕以4:1:0.2配比混合作为固体培养基配方时,该菌产孢量最高;优化实验,固相培养基中面粉、豆角壳和黄粉虫蜕的配比为4:1:0.25时,该菌产孢量高达2.39×10¹²个·kg^-1;孢子粉的指标检测,显示用该培养基配方生产的黄绿绿僵菌孢子粉达到了真菌孢子粉生产的企业标准。