大肠杆菌野生株K99菌毛蛋白结构基因的克隆与序列分析

根据产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)K99菌毛蛋白的全基因序列设计产肠毒素大肠杆菌主要菌毛K99的一对引物。PCR扩增K99菌毛蛋白的全基因序列大小为546bp。将PCR扩增的目的片断克隆于pMD18-T载体、pET-32a载体中,分别转化大肠杆菌,经酶切鉴定、PCR鉴定及DNA序列分析,筛选出阳性克隆。经过序列比对,所克隆的外源基因与报道的K99菌毛蛋白结构基因序列同源性达99.3%。成功克隆分离到的产肠毒素大肠杆菌菌毛的K99基因,为当地产肠毒素性大肠杆菌病疫苗的选择及基因疫苗的研制提供了坚实的理论基础,为产肠毒素性大肠杆菌病检测、预防及基因工程疫苗的研制开辟新的途径。     

新疆野苹果S基因特异性PCR体系优化

[目的]构建适合新疆野苹果自交不亲和基因的PCR扩增程序的优化体系.[方法]采用单因素比较试验,对影响S-RNase基因PCR反应体系的6个主要因素进行梯度扩增.[结果]在20μL的PCR总反应体系中,Mg2+的最适浓度为2.5 mmol/L,dNTP的最适浓度为0.2 mmol/L,引物的最适浓度为0.5mmol/L,TaqDNA聚合酶的最适用量为0.75 U,模板DNA的最适用量为800 ng,最适退火温度为49℃.[结论]利用优化的扩增体系在99个新疆野苹果都获得了有效扩增,证明该体系为进行新疆野苹果S基因PCR扩增的最佳体系,具有良好的稳定性.     

梨SRAP体系的正交优化研究

SRAP是一种基于PCR的新型分子标记,本试验利用正交试验设计对梨SRAP—PCR反应体系中的Mg^2＋、dNTPs、Taq DNA聚合酶、模板DNA、引物5个组分浓度进行优化。确定优化的反应体系为：Mg^2＋浓度2．4mmol／L,dNTPs 200μmol／L,Taq DNA聚合酶1U,模板DNA 80ng,引物浓度0．2μmol／L,反应总体积25μl,同时对该优化体系的稳定性及在梨种间的多态性进行了检测。     

萝卜EST—SSR反应体系的建立与优化

利用正交设计L16（4^5）对萝卜SSR—PCR反应体系的5因素（Taq酶、Mg^2＋、模板DNA、dNTP、引物）在4个水平上进行优化,获得了最佳反应体系,即20山反应体系中含有0．10mmol／LdNTP,3．0mmol／LMg^2＋,50ng模板,0．500μmol／L引物,1．0UTaq酶。使用优化的反应体系,扩增条带清晰,可满足不同引物组合和萝卜材料的要求。此研究为今后利用SSR技术对萝卜种质资源进行分类、构建遗传图谱和基因定位奠定了基础。     

花生疮痂病菌ISSR-PCR反应体系的建立和优化

建立和优化了花生疮痂病菌ISSR-PCR反应体系,为研究花生疮痂病菌遗传多样性及遗传结构提供理论基础。采用正交试验和细调性单因素试验对模板DNA用量、最适引物、引物浓度、Mg~(2+)浓度、Taq酶浓度、d NTPs浓度以及退火温度等影响ISSR反应结果的各因素进行了研究。最优体系中各成分浓度分别为Mg~(2+) 2. 0 mmol/L,dNTPs 0. 2 mmol/L,Taq酶1. 5 U,引物0. 88μmol/L,模板DNA 30～40 ng/25μL;筛选出8条适用于花生疮痂病菌遗传多样性分析的ISSR引物。     

小豆SSR-PCR反应条件的优化

笔者对小豆SSR-PCR扩增体系的反应条件进行了优化,分析了Mg2+浓度、dNTP浓度、DNA模板浓度、引物浓度、Taq聚合酶浓度对PCR扩增结果的影响。结果表明:在10 μL的PCR反应体系中,Mg2+的最适浓度为2 mmol/L,dNTP最适浓度为0．25 mmool/L,反应体系中Taq聚合酶宜加入1 U,引物的最适浓度为 0．15 mmol/L,DNA模板加入量为20 ng。     

ETEC K99、K88菌毛蛋白抗原表位多肽的设计合成及免疫反应

目的:通过生物信息学及蛋白分析软件等,寻找ETEC K88、K99菌毛蛋白的抗原表位。方法:通过生物信息学技术、DNAStar Protean蛋白分析软件及网络共享软件对ETEC K88、K99菌毛蛋白抗原性相关的参数进行预测分析,从而设计ETEC K88、K99菌毛蛋白的抗原表位多肽;采用腹腔注射的方式将合成的抗原表位多肽免疫小鼠,用ELISA法检测血清中产生的抗体,并对免疫小鼠进行了攻毒试验。结果:多肽免疫小鼠后均能诱导抗体产生,攻毒试验表明合成肽对小鼠具有保护作用。结论:成功预测了抗原表位,合成的表位多肽具有较好的抗原性。     

滑叶藤ISSR PCR反应体系建立及优化

 为建立和优化滑叶藤 ISSR PCR反应体系,运用正交试验和单因子试验分析模板DNA,TagDNA聚合酶,Primer,Mg2+和dNTPs 5个因子对滑叶藤ISSR PCR反应影响。结果表明了滑叶藤 ISSR PCR 25μL反应体系中5个因子最佳水平：DNA模板为84ng,TagDNA聚合酶为20u,Primer浓度为08mmol/L,dNTPs浓度为068mmol/L,M2+浓度为24mmol/L。该反应体系为利用ISSR分子标记技术研究铁线莲属植物提供了可靠方法。     

三角帆蚌ISSR-PCR优化反应体系的建立

采用ISSR技术对三角帆蚌基因组DNA进行PCR扩增,筛选、分析了ISSR—PCR扩增时的主要影响因子,包括Mg^2＋浓度、dNTPs浓度、引物浓度、酶浓度、甲酰胺浓度等,建立了三角帆蚌的ISSR—PCR优化反应体系,为进一步研究三角帆蚌种质资源状况奠定基础。最终确立的适用于三角帆蚌ISSR扩增的25μl反应体系为：MgCl2 1．5mmol／L,dNTPs 0．2mmol／L,引物0．2μmol／L,Taq酶1．0U,甲酰胺1％,DNA模板量约50ng。     

香稻不育系ISSR正交体系优化及验证

利用正交试验设计,从 Taq酶、Mg2＋、模板DNA、dNTP、引物5种因素的4个水平对香稻不育系的ISSR－PCR反应体系进行优化,确立适合香稻的ISSR－PCR反应体系：1．0 U Taq酶、2．5 mmol／L Mg2＋、40 ng模板DNA、0．25 mmol／L dNTP、0．1μmol／L引物浓度。进一步验证试验表明,在该体系下将筛选的13个ISSR引物对15个香稻不育系进行PCR扩增,均可获得稳定、清晰的条带。     

钾细菌对土娄土养分活化作用的研究

采用固态及液态培养法研究了7株钾细菌在不同条件下对土娄土中6种元素的活化作用和对pH的影响.结果表明:①钾细菌在固态培养条件下对P、K、Si元素的活化作用小于液态培养;在固态培养中, 钾细菌对土娄土中Fe、Mn元素有活化作用,但却导致Zn元素发生固定;②固态培养中,钾细菌引起的土壤pH下降幅度小于液态培养;③灭菌处理使土娄土生物释钾量提高,但对生物释硅量无明显影响;④钾细菌不同菌株对土壤养分的活化能力差异很大.     

K+对阿月浑子增殖培养的影响

在阿月浑子继代培养基中设置K^＋浓度分别为0，10，20，30，40mmol／L5个处理，调查分析阿月浑子芽苗的增殖系数、褐变率和总酚含量。结果表明，随着K^＋浓度的增加，阿月浑子芽苗的增殖系数增加，总酚含量与褐变率下降，各处理间差异显著。当K^＋浓度为30mmol／L时，增殖倍数最大为3．656，总酚含量与褐变率最低，分别为5．10mg／gDW和14．51％；当K^＋浓度继续增加到40mmol／L时，增殖倍数下降，总酚含量与褐变率略有增加，褐变率与总酚含量呈正相关关系，相关系数为0．9397。K^＋可能影响到酚类物质的生物合成，进而影响到褐变率和芽苗的增殖。     

吉林省不同区域黑土供钾能力研究

选取吉林省4个不同区域的黑土,设置施钾肥和不施钾肥2种处理,通过连续种植黑麦草(耗竭试验)来观察黑土的供钾能力.结果表明:供试土壤中速效钾的动态变化特征各异,其"最低值"的大小和出现的茬数也不相同.速效钾最低值的变幅为33～40mg/kg,4号土壤速效钾含量降低的幅度最大,种植到第4茬时已经降低到原含量的8.96%,出现的茬数也较早.土壤中缓效钾下降幅度低于速效钾,"最低值"的变幅为527.87～824.28mg/kg,出现的茬数最早在第4茬,最晚在第7茬.从植物的吸钾动态特征来看,速效钾对首茬植物的总吸钾量贡献最大,其次是缓效钾,但随着种植茬数的增加,缓效钾和矿物钾的贡献率逐渐升高.试验中在计算黑麦草的吸钾量时,将缓效钾和矿物钾区分开,并分析了速效性钾、缓效钾及矿物钾对植物的有效性.     

湖南省花垣县农田土壤钾素现状、存在问题及对策

基于花垣县2007年农田土壤钾素调查数据与1980年湖南省第二次土壤普查数据,分析花垣县农田土壤钾素现状,探讨其存在问题,从而提出因地制宜的农田土壤钾素肥力管理措施。结果表明,花垣县农田土壤全钾平均含量为12.93 g/kg,与湖南省第二次土壤普查相比下降了22.44%;土壤速效钾含量总体水平偏高,平均达到124.66g/kg,与湖南省第二次土壤普查相比增加了54.76%,呈明显增加趋势;缓效钾含量总体偏低,低于100 mg/kg的农田占全县农田面积的87.46%。目前花垣县农田土壤存在钾素储备偏低,长期供钾潜力不足的问题。针对花垣县农田土壤钾素现状及存在的问题,应当改善耕作方式,防止农田钾素流失;实行秸秆还田,有效防止农田钾素失衡;推广测土配方施肥,实现钾素投入平衡等有效措施,提高土壤钾素肥力。     

无径流和淋溶条件下钾肥利用率的研究

应用盆栽模拟试验方法,在无钾的径流和淋溶损失情况下,连续3年种植玉米,测定出广西10种土壤的钾肥利用率为79．0％～93．8％,平均为87．5％,研究结果表明,钾肥利用率与作物收获后的土壤速效钾含量呈极显著的负相关,与土壤阳离子交换量(CEC)也呈显著的负相关,土壤供钾量的估算方法对钾肥利用率的计算结果影响较大,土壤供钾量应依据种植前和收获后土壤供钾水平的改变及土壤对钾的缓冲能力来估算才符合实际情况,钾肥利用率的计算也应以此为基础。     

稻草与钾肥配合施用对冬作马铃薯土壤钾素的影响

为研究施钾肥和稻草还田对南方冬作马铃薯土壤钾素状况的影响,在施氮磷肥基础上设计了稻草与钾肥不同组合的盆栽试验。结果表明:相对于仅施氮磷肥,增施钾肥和稻草可显著增加土壤速效钾、有效钾、缓效钾含量,且以氮磷钾肥配施稻草处理对土壤钾素提高的效果明显好于氮磷肥基础上施用钾肥或稻草;至马铃薯成熟期,氮磷钾肥配施稻草处理的土壤速效钾、有效钾和缓效钾含量平均高180.13%、125.16%和10.62%,而且较种植前也有较大提升,土壤速效钾含量平均提高33.33%。钾肥与稻草不同配比中以T5(K3S2)、T8(K2S3)对土壤钾素影响比较明显,速效钾和缓效钾含量比种植前分别增加69.69%、14.09%和81.98%、10.76%。从节约资源和改善土壤钾素状况综合考虑,在南方早稻-晚稻-马铃薯种植模式下,钾肥和稻草施用量以199.7 kg/hm2和9 000 kg/hm2较佳。     

易花药培养的早熟小麦新种质K35

小麦新种质K35是本所培育的小麦新品系,兼有早熟、抗白粉病和易花药培养等突出特点,是一个良好的花药培养遗传育种材料。     

低钾条件下不同品种烟苗钾离子吸收动力学比较

在日光温室营养液培养条件下,以300μmol/L K＋浓度水平的Hoagland营养液的改良配方培养4个不同品种的烟苗,采用离子消耗技术和原子吸收光谱法于9叶期对其K＋吸收动力学参数Km（钾离子浓度）,Imax（钾最大吸收速率）和Cmin（钾离子最低临界浓度值）进行测定分析。结果表明,在低钾胁迫下培养的烟苗K＋吸收动力学参数Km,Imax和Cmin可对不同品种烟苗钾效率分类,其中云烟85和大伏烟Imax值均表现较高,而K326和黄花93-1Imax值表现较低。云烟85,大伏烟,K326 Km值较低,黄花93-1Km值较高。     

烤烟K326配套栽培技术

本文介绍了烤烟K326的配套栽培技术。