"循化红"线辣椒SRAP-PCR反应体系的优化与建立

[目的]建立适合于“循化红”线辣椒基因组的SRAP-PCR优化扩增反应体系。[方法]采用L16（4^5）正交试验设计,对“循化红”线辣椒SRAP反应体系中的Mg^2＋浓度、Taq聚合酶、dNTPs浓度、引物浓度、模板DNA浓度进行5因素4水平正交优化。[结果]“循化红”线辣椒的最佳SRAP—PCR反应体系为：Mg^2＋浓度为2．0mmol／L,dNTPs为0．5mmol／L,Taq酶0．5U,引物浓度为0．4μmol／L,模板DNA浓度为1．0ng/μl,总体积20μl。[结论]该体系的建立为SARP标记技术应用于“循化红”线辣椒种质资源的收集与利用,品种的鉴定、标记辅助育种等方面奠定了良好的试验基础。     

小麦SRAP-PCR体系的正交设计优化

[目的]优化小麦SRAP-PCR技术体系。[方法]以小麦丰优68为试材,利用正交设计L16（4^5）对小麦SRAP．PCR反应体系中的5因素（细聚合酶、Mg^2、模板DNA、dNTPs、引物）在4个水平上进行优化试验。[结果]不同因素对小麦SRAP反应体系的影响为：Mg^2〉Taq聚合酶〉dNTPs〉模板DNA〉引物;优化的小麦SRAP—PCR体系为：在20山反应体系中,包括10×PCRBuffer2．0山、Mg^2 2．0mmol／L、砌聚合酶2．0U、dNTPs0．2mmol／L、模板DNA40ng、引物0．6μmolVL。[结论]该优化体系为小麦资源SRAP遗传分析奠定了技术基础。     

籽粒苋SRAP-PCR反应体系的确立与优化

以籽粒苋叶片为材料,采用L9（4^5）正交设计方法,对sRAP—PCR反应体系中的Mg^2＋、dNTPs、TaqDNA聚合酶、引物浓度和DNA用量等5因素进行了筛选。建立了适于籽粒苋的SRAP—PCR最佳反应体系。籽粒苋的SRAP—PCR最佳反应体系为：反应总体积为10μL．2．0mlil01·L^-1 Mg^2＋、300μmol·L^-1 dNTPs、0．5UTaqDNA聚合酶、4μmol·L^-1上下游引物、50ngDNA及10xPCRbuffer;各因素水平变化对反应体系影响的大小依次为：Mg^2＋、dNTPs、模板DNA、TaqDNA聚合酶、引物。     

正交设计优化花菜类SRAP分子标记体系的研究

采用正交设计,从Mg^2＋、dNTPs、引物三种因素3个水平对青花菜SRAP反应体系进行优化,确立适合青花菜的SRAP反应体系,并在6个青花菜和花椰菜品种中进行验证。结果表明：20μ/L反应体系中适宜体系的浓度dNTPs为0．2mmol／L、Mg^2＋为1．25mmol／L、上下引物各0．4μmol／L、DNA为20ng、Taq酶1．2U、退火温度为50℃。     

小麦SRAP-PCR体系的正交设计优化（摘要）

[目的]优化小麦SRAP-PCR技术体系。[方法]以小麦丰优68为试材,利用正交设计L16（45）对小麦SRAP-PCR反应体系中的5因素（Taq聚合酶、Mg2＋、模板DNA、dNTPs、引物）在4个水平上进行优化试验。[结果]不同因素对小麦SRAP反应体系影响的大小顺序为：Mg2＋〉Taq聚合酶〉dNTPs〉模板DNA〉引物;优化的小麦SRAP-PCR体系为：在20μl反应体系中,包括10×PCR buffer2.0μl、Mg2＋2.0mmol/L、Taq聚合酶2.0U、dNTPs0.2mmol/L、模板DNA40ng、引物0.6μmol/L。[结论]该优化体系为小麦资源SRAP遗传分析奠定了技术基础。     

麻疯树SRAP-PCR反应体系的优化

采用L9(45)正交设计对影响麻疯树SRAP反应的5个因子(DNA模板浓度、Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度、Taq酶)在4个水平上进行优化试验,PCR结果采用SPSS13.0进行分析。结果表明,各因素对SRAP反应的影响依次为:Mg2+dNTPs引物Taq酶DNA模板。对SRAP反应结果影响较大的3个因子(Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度)进行单因素试验,确立麻疯树SRAP反应最佳体系为:20μL的PCR体系中含有Mg2+2.5 mmol/L、引物0.4μmol/L、dNTPs150μmol/L、DNA模板60 ng、Taq酶0.5 U。将该体系用于麻疯树的SRAP扩增能获得稳定、清晰的多态性条带。     

华山松SRAP-PCR反应体系的优化

为建立华山松SRAP-PCR反应体系,研究先采用L16(45)正交设计对影响华山松SRAP反应的5个因子(DNA模板浓度、Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度、Taq酶)在4个水平上进行优化试验。结果表明:各因素对SRAP反应的影响依次为:Mg2+>dNTPs>Taq酶>DNA模板>引物;对SRAP反应结果影响较大的3个因子(Mg2+浓度、dNTPs浓度、Taq酶浓度)进行单因素试验;确立华山松SRAP反应最佳体系为:20μL的PCR体系中含有Mg2+2.2mmol/L、dNTPs0.25mmol/L、DNA模板60ng、Taq酶0.8mol/s、引物0.8μmol/L。将该体系用于华山松的SRAP扩增能获得稳定、清晰的多态性条带。     

平菇RAPD—PCR反应体系优化研究

以平菇黑丰268为试材,对RAPD—PCR反应体系的各项影响因素进行了优化,建立了平菇RAPD—PCR反应体系。结果表明,平菇RAPD—PCR最优体系为：20μl PCR反应体系中,Mg^2＋浓度为1．4mmol／L,模板DNA为50ng,引物浓度为0．6—0．8μmol／L,dNTPs浓度为250μmol／L,Taq酶为1．2U,10×Buffer2．0μl。     

马铃薯SRAP-PCR反应体系的优化

[目的]建立马铃薯大西洋SRAP—PCR反应体系,为今后的研究奠定基础。[方法]以马铃著大西洋基因组DNA为模板,从Mg^2＋浓度、Taq酶浓度、dNTPs浓度、引物浓度和模板DNA浓度5个方面对大西洋SRAP-PCR反应体系进行优化。[结果]适合大西洋的SRAP-PCR反应体系为：模板DNA1．0μl（50ng／μl）,Vaq酶1．7μl（1U／μl）,引物对1．5μl（1μmol／L）×2,MgCl2 2．4μl（25mmol／L）,dNTPs0．6μl（10mmol／L）,10×Buffer3．0μl,ddH2O18．3μl,总体积30μl。[结论]建立的SRAP-PCR反应体系是稳定可靠的。     

海南安诺兰 RAPD-PCR 反应体系的建立

为海南安诺兰植物种质资源研究提供技术支持,以海南特有安诺兰种质为试验材料,采用正交试验,对影响 RAPD 分子标记的模板 DNA、dNTPs、Taq 聚合酶、Mg2＋浓度和引物浓度5个因素进行优化,建立适合于安诺兰 RAPD 标记的反应体系。结果表明：5个因素优化后在20μL 反应体积的浓度分别为模板 DNA 60 ng,dNTPs 150μmol/L,Taq 酶1．0 U,Mg2＋2．0 mmol/L,引物0．5μmol/L。