茶园土壤中优势菌株棘孢曲霉的分离与鉴定

为了对有机肥中微生物菌种资源进行挖掘与利用,试验对黔南州茶园土壤中菌株进行了分离、纯化并对其进行了形态学特征和ITS序列分析。结果显示,茶园土壤中的优势菌株被确定为棘孢曲霉(Aspergillus aculeatus)。该结果为研究茶园土壤中的曲霉菌对茶树的影响奠定基础。     

黔南州茶园土壤中优势菌株烟曲霉的分离· 纯化及鉴定

[目的]分离一株适于开发茶园专用有机肥的菌株。[方法]以黔南州茶园优质土壤为材料,进行微生物分离、纯化、形态鉴定及分子鉴定。[结果]通过优质土壤的分离、纯化得到优势菌株S2;该菌株边缘薄,中心有不规则状的条纹,表面呈绒毛状,灰白色,背面淡青色;提取菌株S2 DNA,进行凝胶电泳及PCR扩增,经BLAST比对后发现,病原真菌的rDNA-ITS序列与Aspergillus fumigatus(JQ268555.1)的序列相似度高达100%。[结论]结合形态学与分子生物学鉴定,确定从茶园土壤中分离、纯化得到的菌株为烟曲霉菌。     

5种高产洛伐他汀曲霉的筛选和鉴定

从不同生境(食品、土壤、空气、有机质等)收集的自然发酵样品中分离纯化获得150株曲霉纯菌株;经薄层层析法(TLC)初筛获得25株产洛伐他汀(Lovastatin)的曲霉菌株;进一步用高效液相色谱法(HPLC)复筛获得5株Lovastatin产量较高的曲霉菌株,产量范围为32~56 mg/L。对筛选的5株曲霉菌株进行形态特征描述和鉴定,依据曲霉菌株菌落特征、显微特征,结合18S r DNA或ITS r DNA基因序列,鉴定这5株菌株分别为棒曲霉(Aspergillus clavatus)、塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)、菌核曲霉(Aspergillus sclerotiorum)、黑曲霉(Aspergillus niger)和米曲霉(Aspergillus oryzae)。     

球孢白僵菌(Beauveria bassiana)NO6的分离、鉴定与除草活性

旨在研究土壤真菌NO6发酵液中对杂草野燕麦具有抑制作用的次生代谢产物。从坎布拉土壤中分离纯化微生物菌株,利用培养皿分析法测定其次级代谢产物除草活性,利用菌落形态和ITS序列对除草活性最高的菌株进行鉴定,进而利用正相硅胶柱色谱、TLC和半制备HPLC方法对其代谢产物中的除草活性物质进行分离纯化。结果表明,共分离获得9株微生物菌株,其中菌株NO6对野燕麦的除草活性最高,将其鉴定为球孢白僵菌(Beauveria bassiana)。发酵液经乙酸乙酯萃取、硅胶柱层析和半制备HPLC分离纯化得到保留时间为66.868min的除草活性物质3。     

一株柑橘木虱虫生真菌的分离与鉴定

从浙江省台州地区柑橘园中采集的柑橘木虱（Diaphorina citri）虫体中分离得到一株虫生真菌,将其命名为GJMS032,就该菌株对柑橘木虱的致病性、培养特征和形态特征进行了测定,并对其ITS1 58S rDNA ITS2基因序列进行了分析。结果显示,该菌株对柑橘木虱具有较强的致病性,柑橘木虱经浓度为10×109 spores·mL-1的菌株GJMS032的分生孢子悬浮液处理后7 d,其校正死亡率达98%。该菌株的培养特征、形态特征与曲霉属真菌Aspergillus westerdijkiae较为一致,其ITS1 58S rDNA ITS2序列也与A. westerdijkiae表现出100%的相似性,因此将菌株GJMS032初步鉴定为A. westerdijkiae。     

汽蒸前后六堡茶中优势微生物的分离鉴定

选取汽蒸前、后六堡茶茶样,分离纯化得到7株优势菌,采用传统方法观察菌落特征、利用光学显微镜观察菌株的形态,结合分子生物学水平对菌株进行DNA序列分析,通过ITS序列进行同源性搜索比对、对系统发育树分析。结果共鉴定出六堡茶汽蒸前的优势菌为塔宾曲霉、黑曲霉、胶红酵母、LB3青霉、灰黄青霉、鞘氨醇单胞菌以及阿姆斯特丹散囊菌。而在汽蒸后的六堡茶里没有塔宾曲霉以及黑曲霉,说明其在高温汽蒸时已被杀死,而其余5种微生物因耐高温而保留下,对六堡茶的陈化起到重要作用。     

广西桉蝙蛾病原真菌的鉴定

【目的】进行广西桉蝙蛾病原真菌的种类鉴定,筛选致病性强的优势菌株,为桉蝙蛾的生物防治奠定基础。【方法】采用常规的组织分离法进行病原菌的分离,对分离纯化获得的菌株进行致病性测定,根据形态特征和rDNA ITS序列分析确定病原菌的分类地位。【结果】从桉蝙蛾虫尸上分离纯化获得206个真菌菌株,这些菌株分属于白僵菌（Beauveria）、镰刀菌（Fusarium）、拟青霉（Paecilomyces）、曲霉（Aspergillus）、青霉（Penicillium）、毛霉（Mucor）和Evlachovaea,其中白僵菌分离率为87.4%,其他真菌分离率较低。经致病性测定,白僵菌是桉蝙蛾幼虫强致病菌,镰刀菌和Evlachovaea是弱致病菌,其他4类真菌为非致病菌。以形态学特征和rDNA ITS序列分析结果为依据,鉴定球孢白僵菌[B.bassiana（Balsamo）Vuillemin]、尖孢镰刀菌（F.oxysporum Schlecht）和Evlachovaea sp.为桉蝙蛾幼虫的致病菌,其中Evlachovaea sp.在中国首次被记载。【结论】广西桉蝙蛾的病原真菌为球孢白僵菌、尖孢镰刀菌和Evlachovaea sp.,其中球孢白僵菌为优势菌,具有较高的开发利用价值。     

桃细菌性穿孔病病原鉴定

采用分子鉴定法对连云港班庄镇的桃细菌性穿孔病病原进行分离、纯化和鉴定。根据形态特征和16S-23S ITS 序列扩增结果与Gen-Bank中同源序列比对分析,初步鉴定分离株为树生黄单胞菌李致病变种(Xanthomonas arboricola pv. pruni)。     

“寒富”苹果园土壤氨氧化细菌的筛选与鉴定

为研究氨氧化细菌的作用机理及其在预警和调控土壤微生态环境方面的作用,采集2011年5月、7月、9月和11月4个不同生育时期"寒富"苹果园根区土壤,应用富集培养结合硅胶平板方法分离土壤可培养氨氧化细菌;依据氨氧化活性检测,个体形态、培养特征及16S r DNA序列分析,对具有良好硝化能力的优势氨氧化细菌菌株进行筛选与鉴定。结果表明:苹果园土壤中共分离获得33株优势氨氧化细菌菌株,4个生育时期中,11月氨氧化细菌数量最多,7月最少,各时期分离菌株的氨氧化活性随生育时期而各异。从总体上看,11月分离菌株氨氧化活性较为明显。初筛与复筛结果表明:菌株S5-4和S11-10在不同p H值培养条件下均能表现出良好的氨氧化活性,初步鉴定二者分别为粘着剑菌(Ensifer adhaerens)和中华根瘤菌(Sinorhizobium sp.)。菌株S5-4和S11-10在无机与有机培养基中均能生长,表现出混合营养特性。     

四川康砖茶渥堆过程中优势真菌的分离鉴定

[目的]为康砖茶的品质提高和工艺改进提供依据。[方法]对四川康砖茶渥堆过程中优势真菌进行分离纯化,并对其进行形态及ITS序列鉴定。[结果]依据菌株形态学特征及ITS序列同源性,发现四川康砖茶渥堆过程中存在优势真菌有2种霉菌和2种酵母,即黑曲霉(Aspergillus niger)、青霉(Penicillium sp.)以及汉逊德巴利酵母(Debaryomyces Hansenii)、假丝酵母(Candida sp.)。[结论]研究可为康砖茶渥堆功效及品质的提高提供参考依据。     

酸马奶中酵母菌5.8 S rDNA及ITS的基因序列分析

实验将两株从酸马奶中分离提纯的酵母菌,提取单菌株基因组DNA,用一对真菌通用引物ITS1和ITS4 PCR 扩增它们的5.8S rRNA和ITS基因,连接入pMD19-T载体,克隆鉴定后,测定序列,将测得的序列与GenBank数据库的序列进行同源性分析,并建立系统进化树.结合系统发育树及5.8 S rDNA和ITS的序列分析结果,将菌株J14和S33判定为Kluyveromyces marxianus(马克斯克鲁维酵母).酸马奶中传统的酵母菌分类主要依靠形态学和生理生化等鉴定方法,实验首次利用5.8S rRNA和ITS基因扩增和测序的分子生物学方法对其进行鉴定.     

香蕉染病植株的病原真菌分离及分子鉴定

香蕉枯萎病是一种毁灭性真菌病害,对香蕉的种植和产业发展危害严重,其病原为尖孢镰孢菌古巴专化型(Fusarium oxysporum f.sp.cubense).为了研究该病原菌的致病机理和香蕉的枯萎病抗性机制,对病原菌进行分离.通过组织分离法,分离纯化真菌菌株,提取真菌DNA、PCR扩增ITS序列、测序及生物信息学分析等手段,对病原菌进行分子鉴定,确定引起香蕉枯萎病的致病菌.结果分离得到了8个真菌菌株,提取了各菌株的DNA;PCR扩增了8个菌株的ITS序列,并测序和生物信息学分析,根据8个菌株的ITS序列,进行了序列的多重比较分析,建立了各个菌株的分子进化树.通过形态观察、ITS序列的分析及病原接种致病实验,确认1、7、8号菌株为尖孢镰刀菌,能引起香蕉发生枯萎病症状,是香蕉枯萎病的致病真菌.     

草甘膦降解菌A-F02的分离·鉴定及降解特性研究

[目的]筛选高效草甘膦降解菌株,并研究其降解特性。[方法]从草甘膦生产厂的曝气池活性污泥中分离到1株高效草甘膦降解真菌A-F02,并根据菌株形态特征和核糖体内源转录间隔区（ITS）全序列分析进行菌株鉴定。同时研究菌株对草甘膦的降解特性和影响因素。[结果]经鉴定,菌株A-F02为米曲霉属。在基础盐培养基中,以草甘膦（1000mg/L）为唯一碳源,30℃、150r/min培养7d,草甘膦降解率为86.82%。通过研究添加葡萄糖量、初始pH值、温度及草甘膦浓度对米曲霉A-F02降解能力和生物量的影响结果表明,在添加葡萄糖浓度0.5%,初始pH值7.5,温度30℃,草甘膦浓度1500mg/L的条件下,菌株A-F02的生长量最大,草甘膦的降解效果最佳。[结论]该研究可为草甘膦降解酶的分离纯化提供试验基础。     

西藏设施辣椒根腐病病原的分离及鉴定

为明确西藏设施辣椒根腐病病原,从西藏采集典型根腐病标本,利用组织分离法分离得到9个真菌分离物,经柯赫氏法则确定2株真菌可引起西藏设施辣椒根腐病,其中2号菌株在分离菌落中出现频率为43.6%,为优势菌株。对其进行孢子形态鉴定、通用ITS序列及镰孢菌专用引物tef1-a和cbh-c序列扩增分析将其鉴定为尖镰孢菌(Fusarium oxysporum)。     

秦岭北麓猕猴桃主产区溃疡病病原菌的分离与鉴定

为明确秦岭北麓猕猴桃主产区主栽品种猕猴桃溃疡病病原菌致病性强弱与地理来源及品种之间的关系,本研究在周至、杨凌和眉县选择了海沃德、华优和红阳的感病枝条为材料,采用常规组织法对猕猴桃溃疡病病原菌进行分离、纯化,结合16S-23S rDNA ITS序列分析进行分子鉴定,并进行了致病性测定。结果表明:经分离、纯化和分子鉴定,共获得丁香假单胞杆菌猕猴桃致病变种（Pseudomonas syringae pv.actinidiae）菌株20个,且不同地理来源和不同品种的菌落形态差异较大;对不同菌株致病性的测定表明,各菌株致病性强弱与其地理来源及品种之间并没有直接的关系;建立基于软件ImageJ 1.50b的定量精确叶片致病性强弱分析方法,筛选出强致病性菌株4个,可为抗性材料鉴定和抗溃疡病专用生物药剂筛选研究奠定基础。     

小链粘孢属一中国新记录种

为薏仁病害防治提供参考,采用形态学鉴定和ITS序列分析相结合的方法对从贵州省兴仁县采集薏仁发病叶片上分离得到菌株HGUP RJ-351进行研究。结果表明:该菌株为曲霉小链粘孢(Hormographiella aspergillata);小链粘孢属为我国真菌新记录属,曲霉小链粘孢为我国真菌新记录种。     

一株生防木霉菌株的鉴定及其对番茄保护酶的诱导作用

采用形态鉴定和5.8S rDNA-ITS序列分析对土壤中分离得到菌株进行鉴定.结果表明,其形态特征与哈茨木霉非常接近,5.8S rDNA-ITS序列分析表明.其与哈茨木霉的同源性达到99%,因此,鉴定其为哈茨木霉新菌株.用其孢子悬浮液对番茄灰霉病进行防治,测定植物苯丙氨酸解氨酶(PAL)、多酚氧化酶(PPO)、过氧化物...     

怀地黄内生产红色素真菌血红红曲霉(Monascus sanguineus)的分离与鉴定

真菌色素是天然食用色素的潜在来源。本文从药用植物怀地黄(Rehmannia glutinosa Libosch.)中分离鉴定出了一株能够产生丰富可溶性红色素的内生红曲霉属真菌RJL03。为进一步研究和利用该菌株及其次级代谢物,对其进行分类鉴定。采用不同的培养基培养并观察RJL03的菌落特征,使用光学显微镜和扫描电子显微镜对菌株形态进行观察发现:该菌株菌落初为白色,后产色素变红,绒毡状,圆形;菌丝分枝,分隔;分生孢子倒梨形,单生或至多10个成短链状,大小为(8.0～16.5)μm×(7.5～14.0)μm;孢子囊球形,外壳褐色,直径32～70μm;子囊孢子椭圆形,大小为(6.0～7.5)μm×(4.0～5.0)μm,表面平滑,无色或红色。序列分析发现,该菌株ITS和18S rDNA序列与血红红曲霉(Monascus sanguineus)的相似度分别为100%和93%。综合形态学和序列分析的结果,将菌株RJL03鉴定为血红红曲霉。这是首次在我国报道的血红红曲霉怀地黄分离株;另外,通过对比观察认为M.sanguineus是与紫色红曲霉(M. purpureus)不同的独立物种。     

不同地黄品种根际土壤真菌群落结构研究

[目的]通过研究不同地黄品种根际土壤真菌的群落结构,以明确不同地黄品种的根际土壤中真菌的群落结构和组成是否具有差异,为优选抗病性地黄品种提供数据支撑.[方法]通过采用传统的平板培养和分离方法,将吨王、北京3号、沁怀、金九、金状元、狮子头6个地黄品种土壤中的真菌先进行纯培养分离、鉴定和计数,然后提取初步分离得到的真菌菌株的DNA,采用基于ITS序列的一代测序技术,通过ITS序列扩增、测序比对,进一步鉴定真菌的种类,并进行聚类分析,分析真菌的群落结构及多样性.[结果]从6个地黄品种的根际土壤中共分离出34株真菌,分别通过形态、显微鉴定以及序列分析,最终归属于13属27种,主要属于青霉属、毛霉属、曲霉属、根霉属、酵母属、枝孢属、链格孢属等.其中沁怀中分离出来的真菌属于4属,狮子头3属,金九3属,金状元4属,吨王和北京3号均为5属.[结论]不同地黄品种根际土壤中真菌的群落结构具有一定差异,地黄根系对其根际土壤中的真菌数量、组成和种类具有一定的塑造性.     

大丽轮枝菌拮抗细菌的分离筛选及Bv1-9菌株鉴定

对植物黄萎病病原菌大丽轮枝菌拮抗细菌进行了分离筛选及Bv1-9拮抗菌株鉴定.结果表明,从土壤中分离到891株细菌,初筛出具有拮抗活性的菌株83株,经过复筛选出一株具有较高拮抗活性的菌株Bv1-9,并对其进行了形态鉴定、生理生化特征鉴定和16S rDNA全序列分析,最终此菌株鉴定为花域芽孢杆菌,16S rDNA序列相似度达99.49%.